廣親和砧木小果甜柿離體快繁技術建立及優化

摘" " 要：【目的】近年來廣親和砧木類型小果甜柿已經在我國柿產業中廣泛應用，但尚未建立起規模化無性系營養繁殖體系，尤其是離體培養的生根條件亟待優化，旨在建立小果甜柿組培快繁體系，并優化其生根條件。【方法】以小果甜柿為試材，重點探討無菌離體培養過程中的生長調節劑種類、處理時間，以及暗處理等因素對其試管苗生根的影響。【結果】（1）休眠芽經75%乙醇消毒30 s，再使用1%次氯酸鈉消毒6 min，消毒效果最佳，消毒后的休眠芽接種到含MS（Murashige amp; Skoog）（含1/2 NH4NO3和1/2 KNO3）+1 mg·L-1玉米素（zeatin，ZT）+0.1 mg·L-1 吲哚乙酸（indole-3-acetic acid，IAA）+30 mg·L-1蔗糖+7 g·L-1瓊脂+0.6 g·L-1聚乙烯吡咯烷酮-40（polyvinylpyrrolidone-40，PVP-40）的初代培養基上，可獲得62.56%的無根試管苗；（2）取初代培養試管苗側芽接種于DKW+1 mg·L-1 ZT+0.1 mg·L-1 IAA+1000 μmol·L-1甜菜堿+30 mg·L-1蔗糖+7 g·L-1瓊脂+0.6 g·L-1 PVP-40的培養基上，平均分蘗數1.59個，株高度3.30 cm，葉片數9.49片·株-1，莖節數7.40節·株-1，繼代培養時可按照0.5 cm切取帶芽莖段繼續增殖培養，有效繼代數目可達10.46個·代-1；（3）用100 mg·L-1 萘乙酸（1-naphthaleneacetic acid，NAA）浸蘸生根處理莖段基部10 min，轉入1/2 MS培養基，生根率90.00%，平均總根長度23.17 cm，平均根系表面積6.73 cm2，平均根系體積0.19 cm3；（4）莖段在1/2 MS+0.5 mg·L-1 NAA+0.2 mg·L-1 IBA+5 mg·L-1褪黑素（melatonin，MT）+30 mg·L-1蔗糖+7 g·L-1瓊脂+0.6 g·L-1 PVP-40的培養基中暗處理10 d后，再接種至無激素1/2 MS培養基上，生根率71.50%，平均總根長度24.14 cm，平均根系表面積9.74 cm2，平均根系體積0.27 cm3；（5）生根后的組培苗經閉瓶和開蓋煉苗后移栽，成苗率52.5%，移栽至大田8個月后平均株高度49.17 cm，莖粗6.0 mm，可用于接穗的嫁接繁殖。【結論】構建的小果甜柿高效離體快速繁殖體系，為優質甜柿苗木的規模化營養繁殖提供了科學依據。

關鍵詞：小果甜柿；離體培養；生根；馴化；移栽

中圖分類號：S665.2 文獻標志碼：A 文章編號：1009-9980（2023）09-1980-12

收稿日期：2023-02-14 接受日期：2023-05-23

基金項目：國家重點研發計劃項目（2019YFD1000600）；湖北省恩施州“重點創新團隊”項目（武陵山特色園藝作物良種繁育及推廣應用創新團隊）

作者簡介：劉彬，男，在讀碩士研究生，研究方向為果樹生物技術與遺傳育種。Tel：027-87282677，E-mail：liubin2022@webmail.hzau.edu.cn

*通信作者Author for correspondence. E-mail：zhangqinglin@mail.hzau.edu.cn；E-mail：luozhr@mail.hzau.edu.cn

Establishment and optimization of in vitro rapid propagation technology of Xiaoguo Tianshi as compatible rootstock for persimmon

LIU Bin1， DU Xiaoyun2， CHEN Wenxing1， GUO Dayong1， XU Liqing1， ZHANG Qinglin1*， LUO Zhengrong1*

（1National Key Laboratory for Germplasm Innovation amp; Utilization of Horticultural Crops， Huazhong Agricultural University， Wuhan 430070， Hubei， China;2Yantai Academy of Agricultural Sciences， Yantai 265599， Shandong， China）

Abstract： 【Objective】 Xiaoguo Tianshi （Diospyros kaki Thunb.） is a kind of persimmon rootstock collected from Dabieshan Mountain area of Hubei Province. Xiaoguo Tianshi has been confirmed to have superior grafting compatibility with persimmon varieties as Taishu， Soshu and Fuyu PCNA （pollination-constant non-astringent）. In recent years， Xiaoguo Tianshi has been widely used in commercial persimmon propagation industry in China. However， large-scale clonal vegetative propagation system for Xiaoguo Tianshi rootstock has not been established. The efficient rooting conditions in vitro for Xiaoguo Tianshi need to further investigation. The aim of this study was to establish the tissue culture and rapid propagation system of ‘Xiaoguo Tianshi’ and optimize its rooting conditions. 【Methods】 The branches of Xiaoguo Tianshi with robust dormant buds were collected in winter， then cut into stem segments and put into sterilized conical flask with Tween-20 for 1-2 min， lately washed with sterile water for 2-3 times. The buds were soaked in 75% alcohol for 30 s， then disinfected with sodium hypochlorite of different concentrations （0.5%， 1%， 2%， 2.5%） for 6 minutes， washed with sterile water for several times， and the scales outside the buds were removed with scalpel. The tips were placed on MS medium （1/2 NH4NO3 and 1/2 KNO3） plus 1 mg·L-1 ZT， 0.1 mg·L-1 IAA， 30 mg·L-1 sucrose， 7 g·L-1 agar and 0.6 g·L-1 PVP-40， cultured at 25 ℃， 2000 lx light intensity and 16 h/d. The in vitro plantlets derived from the primary culture were cut into stem segments of 1-1.5 cm length and trasfered on 6 kinds of proliferation media containing DKW+1 mg·L-1 ZT+0.1 mg·L-1 IAA+30 mg·L-1 sucrose +7 g·L-1 agar +0.6 g·L-1 PVP-40 with betaine at different concentration （0， 10， 50， 100， 1000， 2000 μmol·L-1）. The culture conditions were the same as that of the primary culture. Two methods were used for rooting culture of Xiaoguo Tianshi. （1） Dipping method： the base of shoots was soaked with different kinds of plant growth regulators at different concentrations and then cultured on 1/2 MS basic medium+1 mg·L-1 activated carbon +30 mg·L-1 sucrose +7 g·L-1 agar +0.6 g·L-1 PVP-40. The shoots were dark treated for 10 days and then transferred to the basic medium without plant growth regulator. （2） Two-step rooting method： different kinds and concentrations of plant growth regulator were added into the basic medium， and the 2-3 cm rootless plantlets obtained from proliferation culture were excised and trasfered to the rooting media. After dark treatment of 5， 10 or 15 days， they were transferred into the basic medium without plant growth regulator to induce rooting. 【Results】（1） After 30 days culture， embryogenic callus appeared and differentiated into axillary buds and leaves from 62.56% of the primary culture， but there was still a small amount of endophytic bacteria contamination， which needed to further eliminated by subsequent subculture. （2） After treatment with betaine at different concentrations for 30 days， the leaves of the plantlets turned dark green， and the in vitro culture medium supplemented with 1000 μmol·L-1 betaine was most beneficial to the proliferation and growth of the plantlets. The average number of the proliferation rate was 1.59， the average plant height was 3.29 cm， the average number of leaves per plant was 9.49， and the average number of stem nodes per plant was 7.40. During subculture， each 0.5 cm stem with buds of the plantlets was excised for proliferation， and the effective number of subculture stem segment reached 10.46 per generation. （3） After rooting treatment by dipping with 100 mg·L-1 NAA for 10 min， the rooting percentage reached 90.00%， the average total root length was 23.17 cm， the average root surface area was 6.73 cm2， and the average root volume was 0.19 cm3. （4） The stem segments were darkly treated with 1/2 MS+0.5 mg·L-1 NAA+0.2 mg·L-1 IBA+5 mg·L-1 MT （melatonin） +30 mg·L-1 sucrose +7 g·L-1 agar +0.6 g·L-1 PVP-40 medium for 10 days， and then transfered to hormone free 1/2 MS medium. The rooting percentage achieved 71.50% by the two-step rooting method. The average root length， root surface area and root volume were 24.14 cm， 9.74 cm2 and 0.27 cm3， respectively. （5） The survival rate of Xiaoguo Tianshi plantlets was 52.5% after transplanting. The average plant height and stem diameter was 49.17 cm and 6.0 mm at 8 months after acclimatization and transplanting to the field. 【Conclusion】 An effective protocol was established for propagating Xiaoguo Tianshi as rootstock for persimmon. The better rooting effect was obtained when 0.5 mg·L-1 NAA+0.2 mg·L-1 IBA+5 mg·L-1 MT was added to the basic medium in dark treatment for 10 days. Dipping method for induction of rooting had the advantages of low cost and simple operation， and has the potential to be to used in the nursery industry.

Key words： Xiaoguo Tianshi; In vitro culture; Rooting; Acclimatization; Transplanting

柿（Diospyros kaki Thunb.）是柿科（Ebenaceae）柿屬（Diospyros Linn.）植物中作為果樹栽培的代表種。根據成熟果實能否自然脫澀及其性狀遺傳特點，現有柿品種被分為完全甜柿（pollination-constant non-astringent，PCNA或甜柿）和非完全甜柿（non-PCNA或澀柿）[1]。甜柿果實成熟時無需人工脫澀處理即可鮮食，顛覆了傳統的鮮食習慣，是目前世界范圍內柿產業發展和遺傳改良的主要目標，但其主栽品種均源自日本。我國從20世紀20年代起開始引入富有等柿品種，后期又陸續引入許多日本甜柿品種，如太秋、早秋等。然而，這些優質品種與我國習用的砧木君遷子（D. lotus L.）嫁接親和性較差，生產中存在嚴重的早期或后期不親和現象。因此，篩選適宜的砧木是我國甜柿產業可持續發展亟待解決的“瓶頸”問題。

小果甜柿是華中農業大學柿研究團隊在20世紀90年代從湖北省大別山區收集到的砧木種質，已有研究認為其與包括太秋、早秋和富有在內的系列甜柿品種具良好的嫁接親和性[2]。我國柿產業目前缺乏嫁接親和性強且具無融合生殖特性的砧木種質，而通過種子播種獲得的砧木實生苗則易發生性狀分離，導致其整齊度較差且育苗周期較長。近年來，隨著優質甜柿苗木需求的不斷增加，亟待建立規模化營養系砧木快速繁殖體系。離體培養可實現砧木的規模化繁育，是現代化和標準化苗木生產的重要途徑。但是，柿樹生根難[3-5]，目前尚缺乏遺傳一致度可控且高效的砧木繁殖技術。

筆者在本研究中擬以小果甜柿為試材，探討生長調節劑和環境等因素對其生根的影響，以期獲得最佳生根條件，并在此基礎上建立小果甜柿離體快速繁殖體系，為我國甜柿產業的可持續發展提供技術支持。

1 材料和方法

1.1 材料

試材為小果甜柿（D. kaki Thunb. ‘Xiaoguo Tianshi’）；外植體定點采集于華中農業大學柿圃多年生小果甜柿休眠芽。選生長健壯的組培苗，取2.0～3.0 cm幼嫩新梢（繼代培養5～6次）作生根材料。

1.2 試驗方法

1.2.1 初代培養 冬季采集小果甜柿生長健壯、芽飽滿的枝條，剪成帶芽莖段，裝入滅菌后的錐形瓶中，用吐溫-20浸洗1～2 min后，用無菌水沖洗2～3次。接種前先采用75%乙醇浸泡30 s，再經不同濃度（φ，后同）次氯酸鈉（0.5%、1.0%、2.0%和2.5%）分別消毒6 min，無菌水沖洗數次錐形瓶內外植體，手術刀剝除休眠芽外部數層鱗片，接種至MS（Murashige amp; Skoog）（含1/2 NH4NO3和1/2 KNO3）+1 mg·L-1玉米素（zeatin，ZT）+0.1 mg·L-1吲哚乙酸（indole-3-acetic acid，IAA）+30 mg·L-1蔗糖+7 g·L-1瓊脂+0.6 g·L-1聚乙烯吡咯烷酮-40（polyvinylpyrrolidone-40，PVP-40）初代培養基，于（25±2） ℃、2000 lx光照度和16 h·d-1條件下培養。每瓶接種5個外植體，每處理接種10瓶，3次重復；30 d后統計污染率和死亡率。污染率/%=污染個數/接種外植體個數×100；死亡率/%=消毒致死個數/接種外植體個數×100。

1.2.2 增殖培養 將初代培養獲得的組培苗剪成1.0～1.5 cm的莖段，接種于DKW+1 mg·L-1 ZT+0.1 mg·L-1 IAA+30 mg·L-1蔗糖+7 g·L-1瓊脂+0.6 g·L-1 PVP-40中添加不同濃度（0、10、50、100、1000、2000 μmol·L-1）甜菜堿組合共6種增殖培養基中培養，培養條件與初代培養相同。每瓶接種5個莖段，每個處理接種10瓶，3次重復；30 d后統計每個外植體的分蘗數、葉片數、莖節數和植株高度。

1.2.3 生根培養 試驗設計L9（34）正交試驗，利用2種方法進行生根培養。

（1）浸蘸生根法：以1/2 MS+1 mg·L-1活性炭+30 mg·L-1蔗糖+7 g·L-1瓊脂+0.6 g·L-1 PVP-40為基本培養基，用不同種類及質量濃度的激素浸蘸新梢基部，包括萘乙酸（1-naphthaleneacetic acid，NAA）、吲哚丁酸（indole butyric acid，IBA）和褪黑素（melatonin，MT），進行10 d暗處理而后轉入不含激素的基本培養基中，促進新梢生根（表1）。

（2）兩步生根法：在基本培養基中附加不同種類和質量濃度的生長調節劑，將增殖培養中獲得的長為2～3 cm的無根苗切去愈傷組織并接種于生根培養基，暗處理后轉入不含激素的基本培養基誘導生根（表2）；2種誘導生根方法每瓶接種5個莖段，每個處理接種6瓶，重復3次，接種30 d后，統計生根率，并采用 Epson Scan 根系掃描儀（WinRHIZO軟件）測定生根組培苗根系的總長度、表面積和體積。

1.2.4 移栽試驗 將生根30 d后的組培苗馴化移栽，將其分別放在生長室中閉瓶煉苗3、7、10 d后，再開瓶煉苗3 d。栽培基質選用商道（山東商道生物科技有限公司）與蛭石（體積比10∶1）的混合基質。移栽前用1000倍多菌靈拌土，容器為直徑6 cm、高度11 cm的塑料穴盤，配高度10 cm塑料蓋，移栽后透氣覆蓋，在托盤中加入一定量的水保持濕度，每7 d噴施1000倍多菌靈溶液，并適當在托盤中補水。置于25 ℃自然光照下培養至成活。觀察記錄幼苗生長狀況，60 d后統計幼苗成活率。

1.2.5 數據處理 將獲得的數據使用 Microsoft Excel 2021進行匯總。統計各處理的生根率、根長度、根系表面積和體積，數據采用SPSS 22.0統計軟件進行方差和極差分析。方差分析前對生根率進行反正弦轉換，多重比較采用鄧肯新復極差法。同時，通過隸屬函數法對生根效果進行綜合評價。隸屬函數值計算公式：R（Xi）=（Xi-Xmin）/（Xmax-Xmin），i=1，2，3，…，n；公式中，Xi為不同處理的同一指標測定值；Xmin和Xmax分別為不同處理中某一指標的最小值和最大值。將測定值Xi利用公式換算成相應的隸屬函數值R（Xi），并加和計算不同處理各指標綜合隸屬函數值。

2 結果與分析

2.1 不同濃度次氯酸鈉對小果甜柿休眠芽莖段的消毒效果

外植體表面滅菌是建立離體快繁體系的關鍵，病菌存在會極大影響組培苗后續生長，不利于無菌材料獲取。由表3可知，在相同的消毒時間內，隨著次氯酸鈉濃度增加，外植體污染率從26.11%降低至0%，但隨著次氯酸鈉濃度增加，對外植體的組織損傷加大。圖1所示為不同濃度次氯酸鈉處理后的小果甜柿外植體生長狀態；2.5%次氯酸鈉溶液處理能有效去除污染物，但植物組織完全受損，誘導后7 d變為黑色并全部死亡；1.0%次氯酸鈉消毒后的外植體成活率最高（62.56%），30 d后出現胚性愈傷組織并分化出葉片（圖1-B），但仍存在少量內生菌污染，需通過不斷更換培養基繼代3～4次進而消除內生菌。

2.2 不同濃度甜菜堿對小果甜柿組培苗增殖的影響

在0～2000 μmol·L-1濃度范圍內，甜菜堿對組培苗增殖作用整體呈現先增加后降低的趨勢（圖2）。10～1000 μmol·L-1濃度范圍內，分蘗數、株高度、莖節數、葉片數與濃度均呈正相關（圖2-B～E）；100 μmol·L-1與其他組處理的分蘗數、株高度、葉片數、莖節數組間無顯著差異；1000 μmol·L-1處理與0、10、50、2000 μmol·L-1處理相比株高度存在顯著差異（圖2-C）。不同濃度甜菜堿處理30 d后，葉色濃綠、植株生長狀況良好，表明基本培養基DKW所含元素能滿足小果甜柿生長所需，1000 μmol·L-1甜菜堿處理，組培苗增殖和生長狀況最優，平均增殖的分蘗數1.59個，株高度3.29 cm，葉片數9.49·株-1，莖節數7.40·株-1，此外增加30 d培養時間平均分蘗數增加0.5，株高度則無顯著增加。增殖擴繁植株數量與分蘗數和株高度相關性最顯著，繼代培養時可等長切斷植株（約0.5 cm·段-1）帶芽繼續增殖，繼代培養莖段有效數量達到10.46個·代-1，因此繼代培養在30 d增殖效果最佳。

2.3 NAA、IBA和MT浸蘸顯著促進小果甜柿組培苗生根

不同處理后小果甜柿生根狀態見圖3，處理2相比其他處理根系生長狀態更優。由圖4可見，9個處理間的生根長度差異較大，根長度介于6.41～23.17 cm之間；處理2（100 mg·L-1 NAA處理10 min）生根長度最長（23.17 cm）；根系表面積和根系體積9個處理間差異明顯，其中處理3（200 mg·L-1 NAA處理15 min）根系表面積和根系體積最大，分別為7.70 cm2和0.20 cm3，9個處理中使用NAA和IBA促進生根效果明顯，處理2（100 mg·L-1 NAA處理10 min）生根率最高可達90%。

不同處理綜合隸屬函數值大小排序為處理2＞處理3＞處理1＞處理6＞處理5＞處理4＞處理7＞處理9＞處理8（表4）。綜合看來，最佳方案處理2（100 mg·L-1 NAA處理10 min）所得到促進小果甜柿生根的各項指標最佳。

2.4 NAA、IBA和MT組合處理促進小果甜柿組培苗生根

不同處理小果甜柿生根狀態見圖5，處理4相比其他處理根系生長狀態更優。由圖6可見，促進小果甜柿根長度和根系表面積效果最好處理為處理4（0.5 mg·L-1 NAA+0.2 mg·L-1 IBA+5 mg·L-1 MT暗處理10 d），根長度達24.14 cm，根系表面積達9.74 cm2；促進根系體積效果最好處理為處理3（1 mg·L-1 NAA+1.5 mg·L-1 IBA+5 mg·L-1 MT暗處理5 d），根系體積達到0.29 cm3；生根率最高處理為處理7（0.5 mg·L-1 NAA+1.5 mg·L-1 IBA+0.1 mg·L-1 MT暗處理15 d），生根率達到80%。

不同處理綜合隸屬函數值大小排序為處理4＞處理3＞處理6＞處理9＞處理2＞處理7＞處理5＞處理8＞處理1（表5）。綜合來看，最佳方案為處理4（0.5 mg·L-1 NAA+0.2 mg·L-1 IBA+5 mg·L-1 MT），培養基暗處理10 d可高效促進小果甜柿生根。

2.5 閉瓶煉苗時間對小果甜柿馴化移栽的影響

木本植物組培苗用于大田生產需要從異養狀態過渡到主要由光合自養生長的馴化過程。組培苗在培養瓶中處于一個相對封閉的狀態，相對濕度高（80%～95%），光照不足（一般容器的光照度為1500～3000 lx，遠低于室外的自然光照），移栽馴化時需要從較高濕度及弱光照狀態慢慢過渡到自然環境狀態。對生根30 d后的小果甜柿試管苗3種閉瓶處理下移栽成活率的試驗結果表明，閉瓶煉苗7 d，再開瓶煉苗3 d的苗木成活率最高，達52.5%；小果甜柿苗木移栽240 d后株高度49.17 cm，莖粗6.0 mm（圖7）。

2.6 小果甜柿離體培養快速繁育體系

以小果甜柿休眠芽為外植體材料，建立了小果甜柿離體培養快速繁育技術體系，具體技術流程如圖8所示。采集冬季發育飽滿的休眠芽（圖8-a），2次消毒后接種至初代培養基誘導不定芽（圖8-b～e）；30 d后不定芽伸長生長（圖8-f），將其切成高度為1～1.5 cm莖段（圖8-g）接種至增殖培養基中增殖，將底部帶有芽的莖段（圖8-h）放入增殖培養基中繼續培養，經多次繼代培養（圖8-i～k），擴大繁殖系數；選取繼代培養30 d后帶有4～5片葉的莖段（2～3 cm）進行生根培養（圖8-l），生根30 d后的小果甜柿馴化移栽至營養缽中（圖8-m～n）生長良好。

3 討 論

滅菌劑的用量及使用時間是建立離體快繁體系的關鍵因素之一。Sarathchandra等[6]以非完全甜柿品種平核無為外植體材料，使用95%乙醇對外植體清洗30 s后再利用飽和的次氯酸鈣消毒15～20 min，但此消毒方法導致不定芽的生長勢較弱。Tao等[7]使用0.5%～1.0%次氯酸鈉對7種柿外植體消毒，獲得了無菌組培苗；Wardani等[8]使用70%乙醇對柿幼芽消毒后，使用3%的次氯酸鈉再消毒4 min，外植體存活率高達100%。乙醇作為常見的消毒劑，被廣泛使用于組織培養消毒。前人使用不同濃度的乙醇對柿外植體做預處理，并結合使用其他消毒劑如次氯酸鈉、次氯酸鈣等對柿外植體進行消毒，雙重消毒效果較好。本研究表明，不同體積分數的次氯酸鈉消毒對柿外植體成活率有顯著影響，使用1.0%的次氯酸鈉處理小果甜柿外植體6 min，污染率和消毒致死率都控制在一定范圍，成活率也最高，這與Tao等[9]使用1.0%次氯酸鈉消毒外植體的效果最佳的結論一致。

甜菜堿經常作為植物抵抗非生物脅迫的保護劑應用[10]，誘導培養基中添加甜菜堿，可顯著提高茶樹成熟鮮種在培養14 d內無愈傷組織直接形成體細胞胚胎的速度[11]，還有效提高凍存莖尖的再生率[12]。筆者在本研究中通過在基本培養基中添加1000 μmol·L-1的甜菜堿有效提高了小果甜柿增殖速率。

浸蘸生根法和兩步生根法是目前難生根樹種中常使用的2種生根方法。張利彩等[13]利用兩步生根法對不同激素處理下扁桃試管苗生根情況進行研究，利用IBA處理生根率最高達到了87.21%。裴東等[14]對6個核桃品種采用兩步誘導生根法，在黑暗條件下，通過1/4 DKW培養基中添加IBA 5.0～10.0 mg·L-1進行誘導10～15 d，而后轉移至不含IBA的DKW培養基中，獲得了60.5%～89.7%的生根率。筆者同時設計了浸蘸生根法法和二步生根法誘導小果甜柿組培苗生根，并結合暗處理對小果甜柿生根進行嘗試。一種是利用生長素浸蘸新梢基部，暗培養處理后生根；另一種是兩步生根法即生根初期在含有生長調節劑的培養基上進行暗培養而后轉入不含生長調節劑的培養基上生根。結果表明，浸蘸生根法可以減少培養基的使用量，具有成本低、操作簡單的優勢，生根率最高達到90%。該結果為難生根樹種規模化育苗提供了有益借鑒。

植物根系的生長發育受多種植物激素的協同調控。前人用NAA和IBA組合對柿生根效果進行嘗試，發現不同生長素間組合比單種激素處理生根效果更好[15-18]。MT作為一種促進生長的物質，可以提高植物體內內源吲哚乙酸的含量，促進不同植物的根系生長[19-22]。筆者利用NAA、IBA與MT等激素組合施用試驗，發現3種激素可通過協同作用顯著提高小果甜柿組培苗生根率，且根系健壯，與前人結論相符。

4 結 論

筆者在本研究中構建了小果甜柿高效離體快速繁殖技術體系，外植體初代培養成活率62.56%；最佳增殖培養基為DKW+1 mg·L-1 ZT+0.1 mg·L-1 IAA+30 mg·L-1蔗糖+7 g·L-1瓊脂+0.6 g·L-1 PVP-40+1000 μmol·L-1甜菜堿。浸蘸生根法以100 mg·L-1 NAA處理10 min最佳；兩步生根法中最佳激素處理為0.5 mg·L-1 NAA+0.2 mg·L-1 IBA+5 mg·L-1 MT。建議小果甜柿工廠化育苗優先選用浸蘸生根法誘導生根。

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