WDR27 在胃癌組織中的表達及其臨床意義

瞿 峰，胡懿淋，朱 斌，陳 煜

（南通大學附屬醫院胃腸外科，江蘇 226001）

胃癌是最常見的消化道惡性腫瘤之一,目前居全球腫瘤發病率第三位,死亡率居第五位[1-2],在中國胃癌為公次于肺癌的第二常見惡性腫瘤。胃癌發病與幽門螺桿菌感染、吸煙、食用腌制食品和高鹽飲食有關[3]。盡管近年來手術結合放療、免疫治療和靶向治療明顯改善胃癌患者的預后,但5年生存率仍很低,因此尋找胃癌的有效治療靶點具有重要意義。

WD 重復結構域27（WD Repeat Domain 27,WDR27）屬于含WDR 結構域超家族,編碼具有多個WD 重復的蛋白質,WDR 結構域由多個β-螺旋結構組成,通常用作蛋白質相互作用的支架,并為多蛋白質復合物的組裝提供平臺,參與廣泛的細胞網絡,如信號轉導、轉錄調節、細胞周期控制、細胞骨架組裝和染色質修飾等,其中許多與人類疾病有關[4]。本研究收集2010年1月—12月南通大學附屬醫院胃腸外科胃癌手術標本150 例,采用qRT-PCR 檢測胃癌組織及癌旁組織中WDR27 mRNA 的表達,分析WDR27 mRNA 表達與臨床病理參數及預后的相關性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 胃癌手術患者150 例,男性96 例,女性54 例,年齡28～84 歲,平均61.16±11.54 歲。納入標準：（1）手術標本經病理確診為原發性胃癌;（2）術前未接受過任何抗腫瘤治療;（3）無其他部位腫瘤;（4）臨床資料及隨訪資料完整。患者出院后進行隨訪,隨訪截止于2015年8月或患者死亡,隨訪時間3～67 個月。本研究經醫院倫理委員會批準。

1.2 RNA 提取、cDNA 合成和qRT-PCR 胃癌及癌旁組織用生理鹽水沖洗干凈后迅速放入-80 ℃凍存。使用Trizol 試劑（Invitrogen,美國）按說明書提取RNA,逆轉錄試劑盒（生工生物）進行逆轉錄,采用PCR 試劑盒（生工生物）進行擴增反應,檢測胃癌及癌旁組織中WDR27 mRNA。以GAPDH 作為內參,引物序列為：WDR27：5’-GTGGTTCATCCATCAGGGGG-3’（F）,5’-GGGGATCCCTTTTGAGGAGC-3’（R）。根據WDR27 mRNA 表達水平分為高表達組（癌組織高于癌旁組織）和低表達組（癌旁組織高于癌組織）。

1.3 線上數據庫 利用TCGA 數據庫網（https：//cancergenome.nih.gov/）,收集375 例胃癌樣本和32例癌旁樣本數據,其中27 對為配對樣本,分析WDR27 在胃癌組織和癌旁組織中的表達。

1.4 統計學處理 應用SPSS 21.0 統計軟件進行數據分析。WDR27 與患者年齡、性別、臨床分期等臨床特征間的關系采用χ2檢驗,繪制Kaplan-Meier 生存曲線,生存率比較采用Log-rank 檢驗,預后因素分析采用Cox 比例風險模型。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 胃癌組織中WDR27 表達 分析TCGA 數據庫數據發現,非配對樣本或者配對樣本,胃癌組織中WDR27 表達均高于癌旁組織,差異均有統計學意義（P＜0.05）（圖1A,1B）。本研究對150 例組織樣本進行qRT-PCR 檢測顯示,88 例（58.67%）（高表達組）胃癌組織中WDR27 mRNA 表達水平高于癌旁組織,62 例（41.33%）（低表達組）癌旁組織中WDR27 mRNA 表達水平高于胃癌組織（圖1C）。

圖1 胃癌組織及癌旁組織WDR27 mRNA 表達

2.2 胃癌組織中WDR27 表達水平與臨床病理特征的關系 WDR27 mRNA 表達與腫瘤T 分期（P=0.003）、TNM 分期（P=0.001）和淋巴結轉移（P=0.049）有關,而與性別、年齡、腫瘤分化程度、腫瘤大小及位置無關（P＞0.05）。見表1。

表1 胃癌組織中WDR27 mRNA 表達與臨床特征的關系 例（%）

2.3 影響胃癌患者預后的因素分析 單因素Cox回歸模型分析顯示,WDR27 mRNA 表達、分化程度、腫瘤大小、TNM 分期、T 分期、淋巴轉移與胃癌患者預后相關。多因素Cox 回歸分析顯示,WDR27 mRNA表達水平（HR=2.173,95%CI：1.119-4.221,P=0.022）和淋巴結轉移（HR=5.049,95%CI：1.704-14.962,P=0.003）是影響胃癌預后的獨立因素,見表2。WDR27 mRNA 低表達胃癌患者總生存期長于高表達者,差異有統計學意義（P=0.002）,見圖2。

圖2 WDR27 mRNA 低表達組與高表達組胃癌患者總生存期比較

表2 Cox 回歸分析影響胃癌患者預后因素

3 討 論

胃癌異質性高,具有侵襲能力強、易轉移等特點。目前早期胃癌的主要治療方法是手術和化療,術后化療的效果影響患者的預后和生存率[5]。惡性腫瘤一旦發生轉移,患者預后就較差[6]。因此,有必要尋找新的標志物為胃癌診斷和治療提供靶點。

近年來關于含WDR 結構域超家族的研究取得較大進展。研究顯示,WDR76 與包括腫瘤在內的多種疾病密切相關[7-9]。WDR34 在膠質瘤、乳腺癌和肝細胞癌中表達上調,且與患者不良預后相關,敲除WDR34基因可以抑制膠質瘤細胞的侵襲能力[10-12]。WDR54在結直腸癌患者中高表達,且是疾病特異性生存的獨立風險因素。在體內和體外模型中敲除WDR54可顯著抑制結直腸癌細胞的生長和侵襲性[13]。

為了解WDR27 在胃癌中的表達及其與患者預后的關系,本研究對TCGA 公共數據庫進行分析,發現WDR27 在胃癌組織中高表達;采用qRT-PCR 檢測150 例組織樣本,證實WDR27 mRNA 在胃癌組織中異常上調,提示該基因可能發揮促癌作用,一定程度上參與胃癌的發生發展。Cox 回歸模型單因素分析顯示,WDR27 mRNA 表達、分化程度、腫瘤大小、TNM 分期、T 分期、淋巴轉移與胃癌患者預后相關。多因素Cox 回歸分析顯示,WDR27 mRNA 表達水平和淋巴結轉移是影響胃癌預后的獨立因素。WDR27 mRNA 低表達胃癌患者總生存期長于高表達者,差異有統計學意義。表明WDR27 異常升高與胃癌惡性程度及疾病分期有關,并預示患者預后較差。