匹拉米洞半定量檢測(cè)法與雙抗體夾心法檢測(cè)糞便隱血的比較*

陳 劍,張大蓮,張 毅,周 利,葉 丹

(玉溪市人民醫(yī)院 1.檢驗(yàn)科 2.呼吸科,云南 玉溪 653100)

糞便隱血是一項(xiàng)常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室檢查項(xiàng)目,主要是檢查胃腸道有無(wú)出血,并且對(duì)消化道腫瘤也有一定的預(yù)警作用。目前采用的糞便隱血檢測(cè)方法主要有化學(xué)法和免疫法兩類(lèi)。兩類(lèi)方法各有優(yōu)缺點(diǎn),本文選擇化學(xué)法中的匹拉米洞半定量檢測(cè)法(Fecal Occult Blood pyramidon semi-quantitative method,FOBpsm)和免疫法中的免疫雙抗體夾心法檢測(cè)(Immune Fecal Occult Blood,IFOB)進(jìn)行比較,分析如下。

1 材料與方法

1.1 材料

收集本院512例消化科病人糞便;已知血紅蛋白濃度為100mg/mL的抗凝血2mL。

1.2 試劑

匹拉米洞半定量檢測(cè)法采用國(guó)內(nèi)某公司生產(chǎn)的匹拉米洞半定量檢測(cè)法(FOBpsm)試劑盒;雙抗體夾心法采用國(guó)內(nèi)某股份有限公司生產(chǎn)的大便隱血(IFOB)檢測(cè)試劑盒。

1.3 兩種檢測(cè)方法操作

對(duì)512例標(biāo)本每份分為兩份,分別進(jìn)行FOBpsm和IFOB試驗(yàn)。

1.4 檢測(cè)范圍

測(cè)定將Hb結(jié)果100mg/mL的抗凝血用生理鹽水分別稀釋10倍、100倍、500倍、1000倍、2000倍、4000倍、5000倍、10000倍、20000倍、50000倍、100000倍、200000倍,制備成100mg/mL、10mg/mL、1mg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、5μg/mL、2μg/mL、1 μg/mL、0.5μg/mL的紅細(xì)胞懸液,并用兩種方法進(jìn)行檢測(cè)。

1.5 方法

在隱血陰性的正常糞便中加入一定數(shù)量的動(dòng)物血、菠菜、鐵劑、鉍劑,同時(shí)在隱血陽(yáng)性的糞便標(biāo)本中加入大量維生素C干擾物質(zhì),并同時(shí)用兩種方法進(jìn)行檢測(cè)。

2 統(tǒng)計(jì)分析

2.1 兩種方法檢測(cè)糞便結(jié)果

FOBpsm檢測(cè)糞便隱血的陽(yáng)性率為44.1%,IFOB的陽(yáng)性率為77.5%,P<0.005,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,詳見(jiàn)表1。

表1 FOBpsm和IFOB檢測(cè)糞便隱血結(jié)果

2.2 兩種方法的檢測(cè)血紅蛋白上下限比較結(jié)果FOBpsm紅細(xì)胞懸液Hb的最低濃度為:20μg/mL,最高濃度超過(guò)100mg/mL時(shí)仍能準(zhǔn)確顯示強(qiáng)陽(yáng)性。IFOB紅細(xì)胞懸液Hb的最低濃度為:1μg/mL,最高檢測(cè)濃度為10mg/mL,見(jiàn)表2。

表2 FOBpsm和IFOB檢測(cè)Hb上下限結(jié)果比較

2.3 兩種方法檢測(cè)血紅蛋白抗干擾結(jié)果

IFOB加入各種干擾物質(zhì)的糞便標(biāo)本時(shí)均能準(zhǔn)確排除干擾,FOBpsm則出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果,見(jiàn)表3。

表3 FOBpsm和IFOB抗干擾結(jié)果比較

3 討論

引起消化道出血的原因有很多,常見(jiàn)的原因有消化性潰瘍、急性胃腸炎、食管胃底靜脈曲張破裂、消化道腫瘤,等等。尤其是結(jié)直腸癌,發(fā)病率已躍居全球惡性腫瘤第三位[1]。糞便隱血試驗(yàn)可對(duì)微量血紅蛋白進(jìn)行檢測(cè),以明確患者是否存在消化道出血,且具有便捷、廉價(jià)的優(yōu)勢(shì),適合高危人群進(jìn)行反復(fù)檢測(cè)[2]。特別是在消化道出血早期,出血量不多時(shí),往往糞便外觀(guān)無(wú)改變,肉眼不能分辨是非已經(jīng)存在出血,所以,糞便隱血檢測(cè)的靈敏度和特異性顯得尤為重要[3]。

目前糞便隱血的檢測(cè)的方法分為化學(xué)法和免疫法兩大類(lèi)。由表1可以看出FOBpsm檢測(cè)Hb陽(yáng)性率為77.5%,IFOB陽(yáng)性率為90%。差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而從表2檢測(cè)上下限對(duì)比中可以看出 FOBpsm在紅細(xì)胞懸液Hb濃度降到25μg/mL時(shí)顯色變淡接近消失,20μg/mL就完全顯現(xiàn)不出來(lái)了。IFOB在2 μg/mL仍能準(zhǔn)確顯示隱血陽(yáng)性,在1μg/mL時(shí)顯色才徹底消失。但是在10mg/mL以上高濃度時(shí),FOBpsm準(zhǔn)確顯示強(qiáng)陽(yáng)性,而IFOB因?yàn)殂^狀效應(yīng)而出現(xiàn)了假陰性。同時(shí),在表1中,也有18例患者標(biāo)本中含有大量Hb產(chǎn)生了鉤狀效應(yīng)從而出現(xiàn)假陰性,在用FOBpsm復(fù)查才準(zhǔn)確顯示強(qiáng)陽(yáng)性結(jié)果。由此可見(jiàn),IFOB的陽(yáng)性檢測(cè)閾值明顯低于FOBpsm,相較于FOBpsm具有更好的診斷效能[4,5]。FOBpsm則具有更高的檢測(cè)值上限。

從表3抗干擾能力結(jié)果顯示中可以看出,FOBpsm由于方法學(xué)的原因,較易受到各種因素的干擾。該方法依賴(lài)于簡(jiǎn)單的氧化反應(yīng),食物及藥品中的動(dòng)物血紅蛋白和過(guò)氧化物酶易導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。抗氧化劑(如維生素C)影響氧化過(guò)程,產(chǎn)生假陰性結(jié)果。因此FOBpsm是一種靈敏度低而且非特異性的檢測(cè)方法[6,7]。

IFOB通過(guò)標(biāo)記的Hb單克隆抗體與糞便中的Hb結(jié)合形成復(fù)合物,從而在纖維膜上顯示陰性或陽(yáng)性,利用了人血紅蛋白抗原抗體反應(yīng)的原理進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果不受飲食、藥物等影響,抗干擾能力明顯優(yōu)于FOBpsm,對(duì)于糞便隱血的檢查來(lái)說(shuō),盡早提示消化道出血更為重要。因此,IFOB更加適用于人群篩查[8]。

綜上所述,FOBpsm操作簡(jiǎn)便,快速,顯色穩(wěn)定而且可以根據(jù)顏色深淺判定糞便隱血的程度,但是因方法學(xué)的限制,靈敏度沒(méi)有IFOB高,易受到飲食及藥物的影響。IFOB靈敏度足夠高,特異性強(qiáng),不受飲食及藥物的影響,同時(shí)也具有操作簡(jiǎn)便,快速的特點(diǎn),但是在胃腸道大量出血,糞便中Hb含量較大時(shí),會(huì)出現(xiàn)鉤狀效應(yīng),必須特別小心。近年來(lái),IFOB憑借良好的靈敏度與特異性,優(yōu)異的抗干擾能力,在很大程度上已經(jīng)取代了FOBpsm,尤其對(duì)結(jié)直腸腫瘤的早期篩查方式占據(jù)了主導(dǎo)地位[9]。但在糞便隱血個(gè)體化檢測(cè)普及之前,化學(xué)法與免疫法相結(jié)合,互相彌補(bǔ)方法學(xué)的不足,才能跟好的提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。