3個礬根品種的組織培養(yǎng)技術(shù)研究

顧雪芳 潘文明 韋慶華 汪成忠

摘要 該研究對不同葉色的礬根新優(yōu)品種‘花毯‘梔子黃和‘紅色警戒3個品種進(jìn)行了組織培養(yǎng)，通過對礬根采取外植體的不同部位及消毒方法的設(shè)計(jì)，結(jié)果表明，‘花毯的底芽更容易誘導(dǎo)出芽體，而‘紅色警戒‘梔子黃則取花梗作為外植體培養(yǎng)較底芽更容易誘導(dǎo)出芽體，花梗誘導(dǎo)培養(yǎng)基的最佳濃度為 MS+BA 1.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L，底芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的最佳濃度為MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L。3個品種的礬根在繼代階段的增殖率具有明顯的差異，其增殖率高低順序分別為‘花毯>‘梔子黃>‘紅色警戒。繼代培養(yǎng)基配方濃度為MS+BA 1.0 g/L+NAA 0.01 mg/L，生根壯苗培養(yǎng)基為1/2MS+活性炭1g/L，以芽叢切成3芽/瓶最好，平均根系數(shù)最多，且長勢健壯。

關(guān)鍵詞 礬根；彩葉新品種；組織培養(yǎng)；‘花毯；‘梔子黃；‘紅色警戒

中圖分類號 S688.4? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A

文章編號 1007-7731（2023）04-0014-04

礬根（Heuchera micrantha）為虎耳草科礬根屬多年生彩色觀葉植物，近年來作為優(yōu)秀的耐寒地被植物被廣泛應(yīng)用于花境、立體綠化和盆栽等。礬根品種繁多，由于葉色豐富且葉型奇特，受到了園藝和綠化人士的喜愛。為了滿足市場需求，用組織培養(yǎng)方法可以實(shí)現(xiàn)礬根的快速繁殖，在短期內(nèi)生產(chǎn)出大量整齊、均勻的健壯種苗，并為礬根的規(guī)模化生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 供式材料

于2021年3月24日對種植在蘇州農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院相城校區(qū)科技園基地大棚內(nèi)盆栽的3個礬根品種進(jìn)行了取材，3個礬根的品種名分別為‘花毯‘梔子黃‘紅色警戒（見圖1），顏色依次為綠色、黃色、紅色。

1.2 試驗(yàn)方法

3個品種在外植體的選材上選取了2種：底芽和花梗。通過設(shè)置0.1%氯化汞4個處理時間，30 d后統(tǒng)計(jì)出污染數(shù)、成活瓶數(shù)及出芽數(shù)等，便將成活的小芽轉(zhuǎn)入3個不同細(xì)胞分裂素濃度（BA 0.5、1.0、1.5 mg/L）的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，45 d后觀察和統(tǒng)計(jì)總芽數(shù)，并對3個品種的花梗和底芽的芽誘導(dǎo)率進(jìn)行對比。再將芽體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中，通過方差分析對3個品種的增殖系數(shù)進(jìn)行對比。生根壯苗階段則采用統(tǒng)一培養(yǎng)基配方，接種芽體為1、2和3芽這3種規(guī)格，30 d后對3個品種的平均根系數(shù)及生長狀況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

1.2.1 不同外植體滅菌處理方法。大棚內(nèi)種植的礬根3個品種在取材前2 d停止?jié)菜３峙梵w干燥，但植物體生長正常。外植體取材的部位是主芽旁邊長出的小底芽和帶花苞的花梗。將底芽去除葉片保留葉柄，而花梗則剪成3～4 cm的小段，放入加入洗潔精的自來水中，攪拌清洗3 次，再將外植體置于流水下沖洗1 h，倒盡水分。將表面清洗干凈的外植體置于超凈工作臺上，均是先用75%乙醇浸泡30 s，再用0.1%的升汞浸泡，底芽的消毒時間為10～15 min，花梗的消毒時間為5～8min；最后將外植體用無菌水清洗5次，吸去外植體表面的水分后，接種到MS基本培養(yǎng)基上，1芽/瓶，每個處理各20瓶。對2個外植體部位滅菌處理時間設(shè)2個梯度，研究對外植體污染率及出芽率的影響，得出最佳滅菌時間和外植體取材部位。

1.2.2 初代培養(yǎng)。30 d后，將礬根3個品種底芽和花梗分化的無菌芽體分切后，分別接種于以下3個不同濃度的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，編號A：MS+BA 0.5 mg/L+0.1 mg/L；編號B：MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L；編號C：MS+BA 1.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L中。每個濃度接種20 瓶，1 芽/瓶，45 d后觀察初代的芽體數(shù)量，從而篩選出最適芽誘導(dǎo)配方。

1.2.3 增殖培養(yǎng)。根據(jù)初代培養(yǎng)誘導(dǎo)出來芽的狀況可以知道底芽和花梗的分化均未經(jīng)歷愈傷組織的過程，而是直接分化出叢生芽體，且同時發(fā)現(xiàn)經(jīng)初代培養(yǎng)的苗，在培養(yǎng)基配方C中培養(yǎng)90 d后，無論是花梗還是底芽誘導(dǎo)的芽體均有玻璃化現(xiàn)象。所以在繼代階段將3 個品種的組培小苗分別接種于培養(yǎng)基B：MS+BA1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L中，對3個品種的增殖系數(shù)進(jìn)行比較，接種時3 叢/瓶，3 株/叢，每個品種各接種30 瓶。45 d后隨機(jī)抽取10 瓶瓶苗，清點(diǎn)總芽數(shù)，計(jì)算增殖系數(shù)。

1.2.4 生根壯苗培養(yǎng)。采用1/2MS基本培養(yǎng)基進(jìn)行壯苗，并同時促進(jìn)生根。在壯苗階段接入生根培養(yǎng)基的苗分切成1、2和3 芽3 種規(guī)格，且編號為D、E、F。4 株/瓶，且接入的苗葉片寬度均需達(dá)到0.5 cm以上。30 d后統(tǒng)計(jì)3種規(guī)格苗的生長情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體的選擇與滅菌時間

從表1可以看出，升汞處理時間均為8 min，‘花毯‘紅色警戒和‘梔子黃3個品種外植體取花梗成活率最高，分別為80%、65%、65%；3個品種的出芽率最高均為60%，但取材部位分別是：‘花毯的底芽、‘紅色警戒和‘梔子黃的花梗，且培養(yǎng)過程不經(jīng)過脫分化階段便可誘導(dǎo)出芽體。

2.2 初代培養(yǎng)的芽誘導(dǎo)

從表2和表3可以看出，花梗和底芽的芽誘導(dǎo)過程中，‘花毯的底芽在代號B培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)率最高為665%，‘紅色警戒‘梔子黃花梗則在代號C培養(yǎng)基的誘導(dǎo)率最高，分別為465%和480%，但這2個品種在后期均出現(xiàn)玻璃化苗現(xiàn)象。

2.3 增殖培養(yǎng)的增殖系數(shù)

45 d后隨機(jī)抽取10瓶瓶苗，清點(diǎn)總芽數(shù)，計(jì)算增殖系數(shù)。通過觀察3個品種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基的生長情況，確定繼代的培養(yǎng)基配方為編號B，即MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，3個品種均能實(shí)現(xiàn)數(shù)量穩(wěn)定及增長且長勢良好，但增殖系數(shù)強(qiáng)弱順序?yàn)椋骸ㄌ?‘梔子黃>‘紅色警戒，分別為8.79、5.32、3.50。‘花毯的增殖系數(shù)最高，但葉片寬度最小，且沒有顯示與母本相似的紅色葉脈。‘紅色警戒雖然增殖系數(shù)最低，但葉片最大寬度能達(dá)到2 cm。具體結(jié)果見表4和圖2。

2.4 壯苗和生根

3個品種的生長情況及平均根系數(shù)見表5，在增殖培養(yǎng)中，芽體在大規(guī)模數(shù)量增多的情況下，基部均出現(xiàn)了白色根系，但部分長在培養(yǎng)基里面的芽體較細(xì)弱，故生根培養(yǎng)考慮不添加激素。在壯苗和生根培養(yǎng)基中，3個品種葉色正常，且葉寬均能長至1.5 cm左右，接種后需要20～30 d，均能長出白色根系，葉片寬度均有小幅度增長，且苗體健壯。

3 結(jié)論

經(jīng)試驗(yàn)結(jié)果表明，礬根的3個品種（‘花毯‘紅色警戒‘梔子黃）的底芽和花梗均可以直接誘導(dǎo)出芽，縮短了組織培養(yǎng)的時間。‘花毯底芽的芽誘導(dǎo)率最高，‘紅色警戒‘梔子黃則是花梗的芽誘導(dǎo)率最高。在外植體取材方面，花梗較底芽更易取得，且滅菌處理的成活率也更高。3個品種的礬根在增殖階段表現(xiàn)差異較大，接種于相同配方的培養(yǎng)基中，增殖系數(shù)為‘花毯∶‘梔子黃∶‘紅色警戒=8.79∶5.32∶3.50。說明綠葉帶紅條紋的‘花毯的增殖速率更高，其余2個品種次之，3個品種長勢健壯，葉片寬大。生根階段主要以壯苗為目的，同時生根也較容易，且將苗切成不同芽數(shù)的叢苗，生根的根系數(shù)也明顯不同，且將苗切成3芽以上的芽叢，平均根系數(shù)多，苗體更健壯，葉寬較1芽和2芽更寬，生長健壯的生根叢生苗將為后期的出瓶煉苗奠定基礎(chǔ)，并為礬根的快速繁殖及工廠化生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。

4 參考文獻(xiàn)

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（責(zé)編：張宏民）