氣相色譜質譜法測定湘西杜仲籽油中5 種脂肪酸含量

◎ 饒青青，王 然，歐陽位麒，章發盛

（湘西土家族苗族自治州食品藥品檢驗所，湖南 吉首 416000）

杜仲是我國獨有的植物資源，廣泛分布于我國湖南、廣西、四川等地區，在湖南慈利、貴州遵義有規模化商品種植，其產品及其衍生物具有廣闊的開發應用前景[1-2]。杜仲籽油是通過超臨界萃取或者微波萃取等技術從杜仲翅果籽中得到的，含90%以上不飽和脂肪酸，有利于人體健康的杜仲加工品[3-5]。杜仲籽油主要由ɑ-亞麻酸（C18:3）、亞油酸（C18:2）、油酸（C18:1）、硬脂酸（C18:0）和棕櫚酸（C16:0）等脂肪酸等組成[6]，其中ɑ-亞麻酸、亞油酸是多烯類不飽和脂肪酸具有降血壓、降血脂等作用，是需從食物中攝入且人體不能自己合成的必需脂肪酸（EFA，essential fatty acids）[7-8]。油酸是單不飽和酸，分子穩定，有抗氧化作用，營養價值高[9]。

食用植物油中脂肪酸的種類、含量及其比例是衡量植物油營養價值和質量的重要指標，本文用氣相色譜—質譜聯用法（GC-MS，gas chromatograph-mass spectrometry ）對湘西杜仲籽油中5 種脂肪酸的含量進行測定，以期為湘西杜仲籽油的開發應用提供理論支撐，對促進湘西精準扶貧事業、發展民族食品經濟，具有重要意義，將產生良好的經濟、社會、生態效益。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

湘西杜仲籽油：湘西沃康油業科技有限公司提供樣品。

試劑：正己烷（美國TEDIA 公司）、甲醇（美國TEDIA 公司）為色譜純。氫氧化鉀（湖南匯虹公司）為分析純。

標準物質：亞麻酸甲酯標準物質（壇墨質檢，CAS：301-00-8，批號：22070574），亞油酸甲酯標準物質（壇墨質檢，CAS：112-63-0，批號：22020464），油酸甲酯標準物質（壇墨質檢，CAS：112-62-9，批號：22090019），硬脂酸甲酯標準物質（壇墨質檢，CAS：112-61-8，批號：21120712），棕櫚酸甲酯標準物質（壇墨質檢，CAS：112-39-0，批號：22020101）。

1.2 儀器與設備

7890B-5977A 型氣質聯用儀（Aglient 公司）；AB135-S 型電子天平（Mettler Toledo 公司）；HY-5A 型振蕩器（環宇科學儀器廠）。

1.3 實驗方法

1.3.1 試驗條件

氣質聯用條件。HP-INNOWAX色譜柱（60 m×0.25 mm，0.25 μm）。色譜條件：起始溫度180 ℃，10 ℃·min-1升溫至 220 ℃，再以 8 ℃·min-1升溫至 250 ℃，保持13 min。進樣口溫度：220 ℃，采用分流進樣，分流比為40:1；四極桿溫度：230 ℃；SIM 模式掃描;離子源溫度：230 ℃。

1.3.2 標準溶液的配制

準確稱取亞麻酸甲酯345.35 mg、亞油酸甲酯61.41 mg、油酸甲酯76.86 mg、硬脂酸甲酯11.22 mg、棕櫚酸甲酯27.10 mg 于25 mL 容量瓶中，用正己烷定容至刻度，搖勻，為標準貯藏液。準確量取標準貯藏液0.1、0.2、1.0、2.0、5.0 mL 于50mL 容量瓶中，用正己烷定容至刻度，搖勻，作為系列標準溶液。

1.3.3 樣品處理

準確稱取混合均勻的樣品0.1 ～0.2 g（精確到0.000 1 g）至100 mL 容量瓶中，加入20 mL 正己烷輕搖溶解，并用正己烷定容至刻度，搖勻，為待測液。

吸取待測液2.0 mL 至15 mL 離心管中，加入2.0 mL（0.5 mol·L-1）氫氧化鉀甲醇溶液，至恒溫振蕩器器上50 ℃振蕩混合15 min，靜置5 min，加入6 mL蒸餾水，上下振搖0.5 min，靜置分層，吸取正己烷層過0.45 μm 膜待上機測試用。

1.4 數據處理

（1）結果計算。

試樣中棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、ɑ-亞麻酸含量按下面公式計算：

式中Xi—試樣中棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸的含量，單位為克每克（g·g-1）；Ci—由標準曲線得測定樣液中各脂肪酸甲酯的濃度，單位為毫克每毫升（mg·mL-1）；V—被測定樣液的最終定容體積，單位為毫升（mL）；m—試樣的稱樣質量，單位為克（g）；F—各脂肪酸甲酯轉化為脂肪酸的換算系數，其中：棕櫚酸甲酯轉化為棕櫚酸系數為0.948 1，硬脂酸甲酯轉化為硬脂酸系數為0.953 0，油酸甲酯轉化為油酸系數為0.952 7，亞油酸甲酯轉化為亞油酸系數為0.952 4，亞麻酸甲酯轉化為ɑ-亞麻酸的轉換系數為0.952 0。

（2）結果分析。IBM SPSS Statistics 26 軟件用于數據分析處理。

2 結果與分析

2.1 系統適用性試驗

取混合對照溶液按1.3.1 進樣，定性定量粒子按表1 設置，結果見圖1。

圖1 混合對照品色譜圖

2.2 線性關系

取1.3.2 配制的標準曲線系列按1.3.1 進樣，每種化合物選擇1 個定量離子及2～3 個定性離子。樣品測定時，所選擇的離子均出現，而且所選擇的離子豐度比與標準樣品的離子豐度比相一致（相對豐度＞50%，允許±10%偏差；相對豐度20%～40%，允許±20%偏差）。以目標峰面積為縱坐標，濃度為為橫坐標，繪制標準曲線。標準曲線回歸方程，對應的定量離子、定性離子及定量離子與定性離子的豐度比見表1。

表1 GC-MS 保留時間、定量離子、定性離子及標準曲線表

2.3 方法驗證

驗證試驗結果見表2，其中重復性試驗按1.3.3 制取同一批號的6 份樣品測定，重復性在2.43%～7.43%之間，含量高的ɑ-亞麻酸重復性最佳；穩定性試驗是取同一杜仲油供試品溶液，在提取后的0、4、8、12、16、24 h 進樣；精密度試驗是取同一杜仲油供試品溶液連續進樣6 次；穩定性和精密度的RSD 均小于1%，表明杜仲油中5 種脂肪酸按本方法測定結果穩定，重復性再現性強；加標回收試驗則是按1.3.3制取樣品時按100%水平加入標準對照溶液，結果在87.08%～104.43%。

表2 方法驗證試驗數據表

2.4 樣品測定

按照1.3 對湘西杜仲籽油樣品進行測定，檢測結果如表3 所示。結果發現湘西杜仲籽油中具有極高的營養保健價值的ɑ-亞麻酸含量在60%左右，ɑ-亞麻酸和亞油酸含量和高達72%左右和彭密軍[10]的研究結果61.04%和73.68%相似，本實驗發現湘西杜仲籽油中還有15%左右的油酸，高含量的油酸、亞油酸和ɑ-亞麻酸使湘西杜仲籽油可視為潛在的不飽和脂肪酸獲取源。

表3 湘西杜仲籽油中脂肪酸含量測定結果表

3 結論

本實驗建立了用氣相色譜-質譜聯用法（GC-MS）同時測定湘西杜仲油中棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯和亞麻酸甲酯的方法，進而計算其中棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸和亞麻酸的含量。實驗結果說明GC-MS 法方法測定準確，重復性好，該方法可以作為杜仲油質量控制的方法對于湘西杜仲籽油的生產全程質量控制具有積極的意義。本方法的氣質聯用儀也可用氣相色譜儀代替，同樣的前處理及系列標準曲線的配制方法，可取得同樣的檢測效果。

本研究發現湘西杜仲籽油中高含量的ɑ-亞麻酸（59.9%）、亞油酸（12.2%）、油酸（15.2%）不飽和脂肪酸的組成，使其成為一種良好的食藥兩用的新源性油類，在降血脂、血壓和心腦血管疾病預防的方面有廣闊的開發前景，值得深入研究合理利用。