補(bǔ)飼開食料對(duì)斷奶前后牦牛犢牛生長(zhǎng)性能和免疫器官發(fā)育的影響

郝文君,劉書杰,郭文杰,張玉瑩,張 博,王 音,焦 洋,崔占鴻

(1.青海大學(xué) 畜牧獸醫(yī)科學(xué)院,西寧 810016;2.青海省牦牛工程技術(shù)研究中心,西寧 810016;3.青海省高原放牧家畜動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,西寧 810016)

牦牛是青藏高原地區(qū)的優(yōu)勢(shì)反芻家畜,其生產(chǎn)性能水平與該地區(qū)藏族群眾的生產(chǎn)生活關(guān)系密切[1]。母牦牛于每年4-6月集中產(chǎn)犢,犢牛出生后采用隨母哺乳放牧的飼喂方式進(jìn)行早期培育[2]。在泌乳期間,母牦牛平均日產(chǎn)乳量?jī)H為 1.56 kg左右[3],犢牛哺乳后只能采食少量的天然牧草,致使其早期營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)攝入不足,不利于犢牛免疫器官的健康發(fā)育,進(jìn)而影響犢牛對(duì)應(yīng)激以及疾病的抵抗力和恢復(fù)力,降低了犢牛的早期生長(zhǎng)發(fā)育質(zhì)量[4-5]。免疫系統(tǒng)是在機(jī)體發(fā)育過程中逐漸建立健全的,免疫器官的功能也是隨生長(zhǎng)發(fā)育逐漸建立完善,此過程中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)發(fā)揮至關(guān)重要的作用[6-7]。肝臟是機(jī)體最大的代謝器官,也是連接營(yíng)養(yǎng)與免疫的樞紐,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)動(dòng)物免疫器官的形態(tài)和功能發(fā)育起著重要調(diào)控作用[8-9]。胸腺是機(jī)體重要的中樞免疫器官,幼年時(shí)期體積較大,隨著年齡增長(zhǎng)逐漸退化,其作為T淋巴細(xì)胞發(fā)育、增殖、分化與成熟的場(chǎng)所且兼具分泌功能(分泌胸腺肽、胸腺素等激素),在機(jī)體細(xì)胞免疫中發(fā)揮著重要作用[10-11];脾臟聚集了大量的免疫細(xì)胞,是產(chǎn)生免疫應(yīng)答的重要場(chǎng)所,機(jī)體接受抗原刺激后,合成具有促進(jìn)吞噬和調(diào)節(jié)免疫的促吞噬素[12-13]。目前有關(guān)日糧營(yíng)養(yǎng)調(diào)控牦牛犢牛免疫器官發(fā)育的相關(guān)研究報(bào)道很少,生產(chǎn)中對(duì)牦牛犢牛期免疫功能的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控缺乏科學(xué)指導(dǎo)。本研究以牦牛犢牛為試驗(yàn)對(duì)象,通過牦牛犢牛舍飼飼喂“代乳粉+苜蓿干草”模擬“隨母哺乳+放牧采食牧草”的方法,探究補(bǔ)飼開食料對(duì)牦牛犢牛生長(zhǎng)性能,肝臟、胸腺和脾臟組織形態(tài)發(fā)育及其免疫因子分泌的影響,闡釋日糧營(yíng)養(yǎng)水平調(diào)控牦牛犢牛免疫機(jī)能的量效關(guān)系,為牦牛犢牛關(guān)鍵期的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控研究提供重要參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及分組

選取30頭出生日齡(30±4) d、體質(zhì)量相近(30.79±3.43)kg、健康的大通牦牛犢牛(公)作為研究對(duì)象,牦牛犢牛購自青海省大通牛場(chǎng),飼養(yǎng)試驗(yàn)在青海省海北州海晏縣高原現(xiàn)代生態(tài)畜牧業(yè)科技試驗(yàn)示范園進(jìn)行。試驗(yàn)期為2020年7月14日-2021年1月27日,共計(jì)230 d,預(yù)試期為 30 d,正試期200 d 。

1.2 飼養(yǎng)管理

對(duì)照組飼喂代乳粉和苜蓿干草,試驗(yàn)組在對(duì)照組的基礎(chǔ)上補(bǔ)飼開食料,兩組干物質(zhì)飼喂量保持一致,當(dāng)固體物質(zhì)的干物質(zhì)采食量達(dá)到1 kg時(shí)(160日齡)牦牛犢牛斷奶,兩組各屠宰5頭牦牛犢牛,試驗(yàn)期130 d,正式期100 d,預(yù)試期30 d。斷奶后兩組剩余牦牛犢牛按燕麥干草∶苜蓿干草(1∶1)與犢牛料7∶3比例飼喂,當(dāng)體質(zhì)量達(dá)到90 kg左右(230日齡)時(shí)兩組各屠宰5頭牦牛犢牛,試驗(yàn)期200 d,正式期170 d,預(yù)試期30 d。代乳粉飼喂時(shí)間為每日8:00、14:00和17:00,用煮沸后冷卻到42 ℃的溫水按1∶5的比例沖泡進(jìn)行飼喂。試驗(yàn)正式開始時(shí)代乳粉飼喂量為0.48 kg/(頭·d),代乳粉每5 d 增加0.01 kg;試驗(yàn)結(jié)束時(shí)代乳粉飼喂量為0.72 kg/(頭·d)。30～80日齡時(shí)試驗(yàn)組牦牛犢牛按苜蓿干草與開食料 2∶1比例飼喂,81～160 日齡試驗(yàn)組牦牛犢牛按苜蓿干草與開食料1∶1比例飼喂,161～230日齡兩組牦牛犢牛按苜蓿干草∶燕麥干草(1∶1)與犢牛料7∶3比例飼喂,試驗(yàn)飼料的營(yíng)養(yǎng)水平見表1,不同日齡的飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表2。160日齡代表斷奶前的階段,230日齡代表斷奶后的階段。試驗(yàn)犢牛分單圈飼養(yǎng),圈舍始終保持衛(wèi)生良好,通風(fēng)順暢,定期消毒。代乳粉和開食料均購自北京精準(zhǔn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究中心,犢牛料購自青海河湟青牧飼料科技開發(fā)有限公司。

表1 飼料的營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Nutrients levels of diet (DM basis) %

表2 不同日齡犢牛的飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 2 Dietary composition and nutritional level of calves at different ages (DM basis) %

1.3 觀測(cè)指標(biāo)與方法

1.3.1 生長(zhǎng)性能 正試期第1天、第100天和第170天晨飼前稱量牦牛犢牛體質(zhì)量,計(jì)算終末體均質(zhì)量和平均日增質(zhì)量(ADG),試驗(yàn)期每天記錄兩組牦牛犢牛的采食量,計(jì)算平均日采食量。

平均日增質(zhì)量=(末期體質(zhì)量-初始體質(zhì)量)/試驗(yàn)天數(shù)。

1.3.2 樣品采集 分別于160日齡和230日齡時(shí)試驗(yàn)組和對(duì)照組各屠宰5頭牦牛犢牛,采取肝臟、胸腺和脾臟,用濾紙吸干臟器表面血液,修剪成(2×2×2) cm3的組織塊,浸泡于4%多聚甲醛,用于制作組織切片。另采取一部分組織小塊于 5 mL凍存管,投入液氮,存于-80 ℃冰箱,待測(cè)。

1.3.3 肝臟、胸腺、脾臟組織形態(tài)觀察 采用常規(guī)石蠟切片HE染色進(jìn)行組織學(xué)形態(tài)觀察。 Olympus光學(xué)顯微鏡觀察2組牦牛犢牛肝臟、胸腺和脾臟組織結(jié)構(gòu),并應(yīng)用Motic image plus 2.0ML顯微圖像分析測(cè)量軟件測(cè)量胸腺小葉的皮質(zhì)、髓質(zhì)厚度,測(cè)量胸腺髓質(zhì)和皮質(zhì)的面積、計(jì)算胸腺皮質(zhì)/髓質(zhì)比例;測(cè)量脾臟中脾小結(jié)的半徑、紅髓和白髓的面積,取平均值。

1.3.4 肝臟、胸腺、脾臟激素和細(xì)胞因子的測(cè)定 將組織樣品從-80 ℃冰箱中取出,稱取0.2 g左右,將組織磨碎,加入9倍體積的生理鹽水,冰浴勻漿,4 ℃、3 000 r/min離心15 min;取上清液,分裝待測(cè)。

Elisa法測(cè)定脾臟中促吞噬素,胸腺中前胸腺素α、胸腺素β-4和胸腺肽,肝臟、胸腺和脾臟中免球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、白細(xì)胞介素2(IL-2)、白細(xì)胞介素4(IL-4)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)、干擾素α(IFN-α)、干擾素β(IFN-β)、干擾素γ(IFN-γ)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)等。試劑盒均購自江蘇酶標(biāo)生物。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

將得到的數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2019初步處理后,再利用SPSS 20.0分析數(shù)據(jù),采用單因素方差分析(One-way ANOVA)比較數(shù)據(jù)差異性,結(jié)果用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示,以P<0.05表示具有顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 補(bǔ)飼開食料對(duì)牦牛犢牛生長(zhǎng)性能的影響

由表3和表4可知,160日齡試驗(yàn)組牦牛犢牛平均日采食量、凈增質(zhì)量和平均日增質(zhì)量均顯著高于對(duì)照組(P<0.05);230日齡試驗(yàn)組牦牛犢牛凈增質(zhì)量和平均日增質(zhì)量顯著高于對(duì)照組(P<0.05),平均日增質(zhì)量差異不顯著(P> 0.05)。

表3 對(duì)照組和試驗(yàn)組160日齡牦牛犢牛生長(zhǎng)性能Table 3 Growth performance of 160-day-old yak calves in control and test groups

表4 對(duì)照組和試驗(yàn)組230日齡牦牛犢牛生長(zhǎng)性能Table 4 Growth performance of 230-day-old yak calves in control and test groups

2.2 補(bǔ)飼開食料對(duì)牦牛犢牛肝臟發(fā)育的影響

2.2.1 對(duì)肝臟組織形態(tài)的影響 由圖1可知,牦牛犢牛肝臟大多數(shù)肝細(xì)胞排列成單層,細(xì)胞界限明顯,細(xì)胞核大而圓,位于中央,清晰可見,160日齡和230日齡試驗(yàn)組牦牛犢牛肝臟細(xì)胞核較對(duì)照組排列稀疏,說明試驗(yàn)組牦牛犢牛肝細(xì)胞較大,發(fā)育更好。

1～4.分別表示160日齡對(duì)照組、160日齡試驗(yàn)組、230日齡對(duì)照組、230日齡試驗(yàn)組牦牛犢牛的肝臟組織切片。a.肝細(xì)胞核

2.2.2 對(duì)肝臟細(xì)胞因子分泌的影響 由表5可知,160日齡試驗(yàn)組牦牛犢牛肝臟IgM、M-CSF、IFN-β和IFN-γ含量顯著高于對(duì)照組(P< 0.05),兩組間肝臟IgG、IgA、IL-2、、IL-4、IL-6、IFN-α和TNF-α含量差異不顯著(P>0.05);230日齡試驗(yàn)組牦牛犢牛肝臟IgA 、IL-2、IL-4、IFN-α、IFN-β和TNF-α含量顯著低于對(duì)照組 (P<0.05),兩組間肝臟IgG、IgM、IL-6、M-CSF和IFN-γ含量差異不顯著(P>0.05)。

表5 對(duì)照組和試驗(yàn)組牦牛犢牛肝臟細(xì)胞因子分泌含量Table 5 Secretion content of cytokine in liver of yak calves in control and test groups

2.3 補(bǔ)飼開食料對(duì)牦牛犢牛胸腺發(fā)育的影響

2.3.1 對(duì)胸腺組織形態(tài)的影響 由圖2可知,牦牛犢牛胸腺小葉界限分明,皮質(zhì)與髓質(zhì)分界明顯,皮質(zhì)染色較深,髓質(zhì)染色較淺,160日齡和230日齡試驗(yàn)組牦牛犢牛胸腺皮質(zhì)面積較對(duì)照組大。

1～4.分別表示160日齡對(duì)照組、160日齡試驗(yàn)組、230日齡對(duì)照組、230日齡試驗(yàn)組牦牛犢牛的胸腺組織切片;a.髓質(zhì);b.皮質(zhì)

由表6可知,160日齡試驗(yàn)組牦牛犢牛胸腺皮質(zhì)厚度、皮質(zhì)/髓質(zhì)面積比均顯著高于對(duì)照組(P<0.05);230日齡試驗(yàn)組皮質(zhì)厚度顯著高于對(duì)照組(P<0.05),皮質(zhì)/髓質(zhì)面積比差異不顯著(P>0.05)。

表6 對(duì)照組和試驗(yàn)組牦牛犢牛胸腺皮質(zhì)厚度、皮質(zhì)面積/髓質(zhì)面積比例Table 6 Thymus cortical thickness and cortex area/medulla area ratio of yak calves in control and test groups

2.3.2 對(duì)胸腺激素含量的影響 由表7可知,160日齡試驗(yàn)組牦牛犢牛胸腺中胸腺肽含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05),兩組間前胸腺素α和胸腺素β-4均差異不顯著(P>0.05);230日齡試驗(yàn)組牦牛犢牛胸腺中胸腺肽含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05),前胸腺素α和胸腺素β-4兩組間均差異不顯著(P>0.05)。

表7 對(duì)照組和試驗(yàn)組牦牛犢牛胸腺激素含量Table 7 Thymus hormone content of yak calves in control and test groups

2.3.3 對(duì)胸腺細(xì)胞因子分泌的影響 由表8可知,160日齡和230日齡,試驗(yàn)組和對(duì)照組牦牛犢牛胸腺中IgG、IgM、IgA、IL-2、IL-4、IL-6、M-CSF、IFN-α、IFN-β、IFN-γ和TNF-α等細(xì)胞因子含量差異不顯著(P>0.05)。

表8 對(duì)照組和試驗(yàn)組牦牛犢牛胸腺細(xì)胞因子分泌含量Table 8 Secretion content of cytokines in thymus of yak calves in control and test groups

2.4 補(bǔ)飼開食料對(duì)牦牛犢牛脾臟發(fā)育的影響

2.4.1 對(duì)脾臟組織形態(tài)的影響 由圖3可知,牦牛犢牛脾臟脾小結(jié)、紅髓和白髓分界明顯,160日齡試驗(yàn)組牦牛犢牛脾小結(jié)個(gè)數(shù)和半徑較對(duì)照組多且大。230日齡兩組牦牛犢牛脾臟脾小結(jié)個(gè)數(shù)和半徑未見明顯區(qū)別。

1～4.分別表示160日齡對(duì)照組、160日齡試驗(yàn)組、230日齡對(duì)照組、230日齡試驗(yàn)組牦牛犢牛的脾臟組織切片;a.脾小結(jié);b.紅髓

由表9可知,160日齡試驗(yàn)組牦牛犢牛脾臟脾小結(jié)的半徑顯著大于對(duì)照組(P<0.05),兩組間紅髓、白髓比例差異不顯著(P>0.05);230日齡試驗(yàn)組牦牛犢牛脾臟脾小結(jié)、紅髓和白髓比例均與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。

表9 對(duì)照組和試驗(yàn)組牦牛犢牛脾臟脾小結(jié)半徑、紅髓和白髓比例Table 9 Radius of spleen and spleen nodules, ratio of red pulp and white pulp of yak calves in control and test groups

2.4.2 對(duì)脾臟促吞噬素含量的影響 由表10可知,160日齡和230日齡,試驗(yàn)組與對(duì)照組牦牛犢牛脾臟中促吞噬素含量差異不顯著(P>0.05)。

表10 對(duì)照組和試驗(yàn)組牦牛犢牛脾臟促吞噬素含量Table 10 Content of tuftsin in spleen of yak calves in control and test groups

2.4.3 對(duì)脾臟細(xì)胞因子分泌的影響 由表11可知,160日齡試驗(yàn)組牦牛犢牛脾臟中IFN-γ含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05),兩組間IgG、IgM、IgA、IL-2、IL-4、IL-6、M-CSF、IFN-α、IFN-β和TNF-α含量差異不顯著(P>0.05);230日齡兩組牦牛犢牛脾臟IgG、IgM、IgA、IL-2、IL-4、IL-6、M-CSF、IFN-α、IFN-β、IFN-γ和TNF-α含量差異不顯著(P>0.05)。

表11 對(duì)照組和試驗(yàn)組牦牛犢牛脾臟細(xì)胞因子分泌含量Table 11 Secretion content of cytokines in spleen of yak calves in control and test groups

3 討 論

3.1 補(bǔ)飼開食料對(duì)牦牛犢牛生長(zhǎng)性能的影響

牦牛傳統(tǒng)放牧生產(chǎn)方式下,犢牛出生后采用隨母加放牧方式進(jìn)行培育,此時(shí)放牧草地牧草隨季節(jié)變化其數(shù)量和質(zhì)量營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)大幅降低,帶犢母牦牛泌乳量逐漸下降,母乳和天然牧草中的能量、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不能滿足牦牛犢牛發(fā)育所需,會(huì)造成犢牛生長(zhǎng)發(fā)育緩慢,同時(shí)不利于消化道更好發(fā)育[14]。哺乳期犢牛的胃腸道發(fā)育未完善,對(duì)粗纖維飼糧利用能力較差,適當(dāng)補(bǔ)充開食料可充分發(fā)揮其快速生長(zhǎng)的潛力[15]。開食料是一種品質(zhì)較高的固體飼料,適口性好,適時(shí)補(bǔ)飼開食料提高瘤胃細(xì)菌活性,促進(jìn)粗纖維的降解,瘤胃排空速率加快[16]。已有研究表明,補(bǔ)飼開食料是牦牛犢牛從液體向固體采食的一個(gè)重要過渡,較早采食開食料可以顯著提高幼畜的采食量和生長(zhǎng)性能[17]。本研究發(fā)現(xiàn),補(bǔ)飼開食料提高斷奶前牦牛犢牛的生長(zhǎng)性能和平均日采食量與上述結(jié)果相一致。

本試驗(yàn)中,牦牛犢牛斷奶之后,兩組犢牛的飼糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平一致,可能是兩組牦牛犢牛的采食量接近一致的原因。由于前期對(duì)牦牛犢牛補(bǔ)飼開食料,促進(jìn)牦牛犢牛的胃腸道發(fā)育與段鵬偉等[18]的研究結(jié)果一致,提高牦牛犢牛胃腸道對(duì)揮發(fā)性脂肪酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和對(duì)犢牛料的利用效率,故補(bǔ)飼開食料提高斷奶后牦牛犢牛的生長(zhǎng)性能。

3.2 補(bǔ)飼開食料對(duì)牦牛犢牛肝臟發(fā)育的影響

肝臟作為機(jī)體最大的代謝器官兼具免疫功能,肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞占肝細(xì)胞的60%～80%,非實(shí)質(zhì)細(xì)胞(星狀細(xì)胞、枯否氏細(xì)胞等)占20%～40%發(fā)揮其免疫功能[19]。在肝臟代謝過程中,瘤胃發(fā)酵、飼糧來源的各種營(yíng)養(yǎng)素和細(xì)菌抗原等通過門靜脈進(jìn)入肝臟,由血液循環(huán)運(yùn)送至全身各個(gè)臟器,促進(jìn)發(fā)育并激活機(jī)體免疫系統(tǒng),還有一部分抗原物質(zhì)隨富含氧的血液經(jīng)肝動(dòng)脈到達(dá)肝臟,激活肝臟的免疫防御機(jī)制[20]。IgM由漿細(xì)胞分泌,是機(jī)體初次免疫應(yīng)答時(shí)產(chǎn)生的抗體[21],干擾素在抗感染和免疫調(diào)節(jié)中起著重要作用[22],M-CSF促進(jìn)巨噬細(xì)胞的增殖分化[23]。本研究中,補(bǔ)飼開食料斷奶前(160日齡)牦牛犢牛肝臟IgM、M-CSF、IFN-β和IFN-γ水平較高,一方面,補(bǔ)飼開食料提高日糧蛋白質(zhì)水平,促進(jìn)肝臟中枯否氏細(xì)胞等免疫細(xì)胞的發(fā)育,這與朱雯等[24]研究低蛋白水平飼糧抑制肝臟糖異生,不利于肝臟組織發(fā)育的研究結(jié)果一致,推測(cè)免疫細(xì)胞能快速識(shí)別外界抗原并做出免疫應(yīng)答,提高肝臟的免疫機(jī)能;另一方面,飼糧蛋白質(zhì)水平高低會(huì)影響肝臟的基因表達(dá)模式,進(jìn)而影響肝臟的免疫功能,本研究中補(bǔ)飼開食料提高飼糧蛋白質(zhì)水平,增強(qiáng)肝臟的免疫機(jī)能,這與王波[25]低蛋白飼糧影響肝臟發(fā)育的研究結(jié)果相一致。

據(jù)報(bào)道,營(yíng)養(yǎng)缺乏或不足會(huì)影響免疫功能,而適當(dāng)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)在一定程度上能夠調(diào)控由于營(yíng)養(yǎng)缺乏而導(dǎo)致的免疫功能下降[26]。IgA是黏膜免疫的主要抗體[27];IL-2是一種炎性因子直接作用于B細(xì)胞發(fā)揮其免疫功能[28];IL-4生物效應(yīng)最高的抗炎因子,促進(jìn)B 細(xì)胞的增殖[29];TNF-α是一種促炎因子,脂多糖(LPS)是其刺激劑[30]。本研究中,與斷奶前的160日齡結(jié)果不同,230日齡(斷奶后)對(duì)照組牦牛犢牛肝臟IgA、IL-2和IL-4含量增加,分析原因可能存在兩個(gè)方面,其一,斷奶后給對(duì)照組牦牛犢牛補(bǔ)飼精料(斷奶前沒有),精料在瘤胃內(nèi)發(fā)酵產(chǎn)生揮發(fā)性脂肪酸等,使瘤胃pH下降,黏膜受損通透性增加[31],LPS等抗原進(jìn)入瘤胃壁毛細(xì)血管激活粘膜免疫,產(chǎn)生IgA等細(xì)胞因子,經(jīng)血液循環(huán)到達(dá)肝臟后激活免疫功能,使得肝臟中促炎因子和抗炎因子的含量增加,增強(qiáng)肝臟的免疫功能,這與LPS調(diào)節(jié)反芻動(dòng)物肝臟免疫功能的影響結(jié)果一致[32],肝臟受到門靜脈的LPS 刺激時(shí),TNF-α的產(chǎn)生會(huì)加強(qiáng),表明肝臟參與反芻動(dòng)物的免疫調(diào)節(jié),這與本試驗(yàn)的研究結(jié)果一致[33]。 其二,在營(yíng)養(yǎng)限制期間動(dòng)物體對(duì)營(yíng)養(yǎng)素的代謝需求降低,動(dòng)物的基礎(chǔ)能耗減少,以提高動(dòng)物在一定時(shí)間內(nèi)對(duì)低營(yíng)養(yǎng)飼養(yǎng)條件下的適應(yīng)能力,待補(bǔ)充飼料采食恢復(fù)營(yíng)養(yǎng)后,其器官如肝臟、胃腸道等會(huì)補(bǔ)償生長(zhǎng),其功能也會(huì)隨之增強(qiáng)[34],提高飼糧蛋白質(zhì)和能量水平能促進(jìn)肝臟細(xì)胞增殖分化和補(bǔ)償生長(zhǎng)[35],以上結(jié)果與本試驗(yàn)補(bǔ)飼開食料提高飼糧蛋白質(zhì)和能量水平促進(jìn)肝臟發(fā)育的研究結(jié)果相一致。

3.3 補(bǔ)飼開食料對(duì)牦牛犢牛胸腺發(fā)育的影響

胸腺是機(jī)體主要的中樞免疫器官,其發(fā)育和生理機(jī)能完善對(duì)機(jī)體非常重要。胸腺不僅參與細(xì)胞免疫對(duì)機(jī)體起保護(hù)作用,而且其皮質(zhì)中含大量的胸腺細(xì)胞,分泌胸腺肽等激素促進(jìn)T細(xì)胞分化成熟,增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能并調(diào)節(jié)機(jī)體免疫平衡[36-37]。本試驗(yàn)中,補(bǔ)飼開食料提高了 斷奶前(160日齡)和斷奶后(230日齡)的牦牛犢牛胸腺皮質(zhì)厚度和皮質(zhì)/髓質(zhì)比例,同時(shí)促進(jìn)胸腺細(xì)胞的發(fā)育和胸腺肽的分泌,提高機(jī)體的細(xì)胞免疫機(jī)能,這與妊娠后期宮內(nèi)限制影響蒙古羊胎兒胸腺發(fā)育的研究結(jié)果一致[38]。同時(shí)研究也發(fā)現(xiàn),蛋白質(zhì)和氨基酸水平較低時(shí)小鼠胸腺上皮褪化,重新給予正常蛋白水平的飼糧能夠促進(jìn)胸腺細(xì)胞發(fā)育使胸腺恢復(fù)正常[39],這與本試驗(yàn)補(bǔ)飼開食料提高飼糧蛋白水平促進(jìn)牦牛犢牛胸腺的發(fā)育的研究結(jié)果一致,且推測(cè)營(yíng)養(yǎng)的供給可能會(huì)持續(xù)影響胸腺的發(fā)育和免疫機(jī)能。本試驗(yàn)中補(bǔ)飼開食料斷奶前(160日齡)和斷奶后(230日齡)牦牛犢牛胸腺細(xì)胞因子水平接近一致,說明補(bǔ)飼開食料提高飼糧蛋白質(zhì)和能量水平對(duì)胸腺發(fā)育和其分泌的激素影響顯著,但對(duì)胸腺分泌的細(xì)胞因子含量未見明顯影響,但這方面的相關(guān)報(bào)道現(xiàn)在還很少,有關(guān)于補(bǔ)飼開食料影響牦牛犢牛胸腺發(fā)育和免疫的機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

3.4 補(bǔ)飼開食料對(duì)牦牛犢牛脾臟發(fā)育的影響

脾臟參與機(jī)體內(nèi)所有的免疫應(yīng)答,同時(shí)還兼具濾血、造血等功能[40]。IFN-γ是一種具有廣泛高效抗病毒和免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子, 能直接增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷病毒的能力, 它的分泌受到機(jī)體的嚴(yán)格調(diào)控。在免疫狀態(tài)下, IFN-γ的表達(dá)會(huì)出現(xiàn)變化[41],脾小結(jié)數(shù)量增多且體積變大時(shí)機(jī)體發(fā)生體液免疫應(yīng)答[42]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),補(bǔ)飼開食料提高斷奶前(160日齡)牦牛犢牛脾臟脾小結(jié)半徑和IFN-γ含量,促進(jìn)脾臟的發(fā)育和細(xì)胞因子的合成,且由瘤胃壁毛細(xì)血管進(jìn)入脾臟的細(xì)菌LPS刺激脾臟完善脾臟功能,抵御不良反應(yīng),這與鐘友寶[43]的研究結(jié)果一致。且研究表明高水平纖維飼糧會(huì)促進(jìn)脾臟的發(fā)育[44],與本試驗(yàn)中補(bǔ)飼開食料提高日糧纖維水平促進(jìn)脾臟發(fā)育的研究結(jié)果一致。補(bǔ)飼開食料提高飼糧蛋白水平促進(jìn)脾臟的發(fā)育,這與岳喜新[45]研究結(jié)果一致。

免疫器官對(duì)營(yíng)養(yǎng)水平的敏感性不同,從免疫系統(tǒng)的角度出發(fā),中樞免疫器官有利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的優(yōu)先權(quán),相對(duì)不易受到營(yíng)養(yǎng)水平的影響,營(yíng)養(yǎng)水平的高低對(duì)外周免疫器官的影響較大[46],牦牛犢牛斷奶后,飼糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平一致,導(dǎo)致兩組外周免疫器官脾臟的發(fā)育和細(xì)胞因子含量未見明顯差異,肝臟中的炎癥介質(zhì),如LPS等抗原和代謝物則通過循環(huán)系統(tǒng)影響脾臟的功能[47]。本試驗(yàn)中230日齡牦牛犢牛對(duì)照組和試驗(yàn)組的肝臟細(xì)胞因子水平未見明顯變化,據(jù)推測(cè)可能是炎性介質(zhì)經(jīng)過肝臟的代謝,不足以影響脾臟細(xì)胞因子的變化,影響脾臟的免疫功能。

4 結(jié) 論

補(bǔ)飼開食料提高斷奶前后牦牛犢牛的生長(zhǎng)性能,且提高斷奶前牦牛犢牛的免疫力,對(duì)斷奶后牦牛犢牛免疫器官的發(fā)育存在潛在積極調(diào)控作用,故對(duì)牦牛犢牛早期適時(shí)合理補(bǔ)飼是有必要的。