lncRNA OTUD6B-AS1在彌漫大B細胞淋巴瘤中的表達及意義

邱厚兵 王春燕 楊清明

彌漫大B細胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤中極為常見的惡性腫瘤之一,好發于女性,遺傳、免疫、感染等因素對DLBCL的發生起著不可忽視的作用[1,2]。DLBCL腫瘤細胞核較大,是正常B淋巴細胞的5倍,具有增長迅速快、侵襲性強、任何器官均可涉及等特點,雖然其治療方案在不斷改善,但仍有部分DLBCL患者出現復發轉移,因此尋找與DLBCL有關的生物標志物,對患者預后評估及有效治療具有重要意義[3-5]。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)是真核細胞基因組編碼的轉錄本,雖不參與編碼蛋白質,但可在表觀遺傳、轉錄和轉錄后等不同水平調控基因表達[6,7]。多項研究表明,lncRNAs的異常表達與DLBCL等惡性腫瘤細胞的增殖、生長、轉移和侵襲密切相關,lncRNA人去泛素化酶含有卵巢腫瘤結構域的6B反義RNA 1(OTUD6B-AS1)作為一種lncRNA,在多種惡性腫瘤的發生發展過程中發揮重要作用[8,9],例如Wang等[10]研究結果表明,透明細胞腎細胞癌患者腫瘤組織中lncRNA OTUD6B-AS1表達下調,lncRNA OTUD6B-AS1通過抑制Wnt/β-catenin通路來抑制癌細胞增殖,且該研究還表明,lncRNA OTUD6B-AS1低表達患者預后不良,lncRNA OTUD6B-AS1具有抗癌基因的功能,但目前關于lncRNA OTUD6B-AS1在DLBCL中的表達及發揮的作用研究較少,因此,本研究通過對lncRNA OTUD6B-AS1在DLBCL中的表達及臨床意義分析,為患者預后評估提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年2月至2017年2月在本院就診的110例DLBCL患者作為研究對象,其中男47例,女63例;年齡44～57歲,平均年齡(50.80±6.10)歲。另選擇111例淋巴結反應性增生(reactive hyperplasia of lymph node,RLH)患者,其中男48例,女63例;年齡42～58歲,平均年齡(50.00±7.21)歲。取手術切除的DLBCL組織作為研究組以及取RLH患者的淋巴組織為對照組。本研究經醫院倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準:①經病理學診斷為DLBCL;②首次患DLBCL;③所有DLBCL患者均未進行任何免疫治療、放化治療或其他輔助治療;④患者知情同意并簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準:①有腫瘤疾病史;②長期服用激素藥物治療者;③患腎、肺、心臟等其他重要器官疾病;④臨床資料不全。

1.3 方法

1.3.1 qRT-PCR檢測組織lncRNA OTUD6B-AS1的表達水平:Trizol試劑(美國Invitrogen公司)提取樣本的總RNA,之后采用SuperScript RT Kit試劑盒(日本TAKARA公司)將所得RNA反轉錄為cDNA,以其為模板,使用SYBR Green PCR masterMix試劑盒(日本TAKARA公司)進行實時熒光定量PCR(qRT-PCR)對lncRNA OTUD6B-AS1進行擴增,lncRNA OTUD6B-AS1的qRT-PCR反應條件為95℃,10 min;95℃,15 s;55℃,30 s,30次循環;lncRNA OTUD6B-AS1及內參GAPDH的上下游引物序列(由上海生工生物工程有限公司合成),采用2-ΔΔCT法分析lncRNA OTUD6B-AS1的表達水平。PCR基因擴增儀購自美國BIO-RAD公司。見表1。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3.2 隨訪:研究人員以電話、規律復診等方式對DLBCL患者出院后進行隨訪,終點事件為DLBCL患者死亡或5年隨訪時間結束,術后第1年每3個月隨訪1次,第2年每6個月隨訪1次,之后第3～5年每年隨訪1次。

2 結果

2.1 2組lncRNA OTUD6B-AS1表達水平比較 與對照組比較,研究組DLBCL組織中lncRNA OTUD6B-AS1水平明顯降低(P<0.05)。見表2。

表2 2組lncRNA OTUD6B-AS1表達水平比較

2.2 DLBCL組織中lncRNA OTUD6B-AS1與患者臨床病理參數的關系 根據DLBCL組織中lncRNA OTUD6B-AS1表達水平平均數分為高表達組54例,低表達組56例,lncRNA OTUD6B-AS1表達與DLBCL患者性別、年齡、腫瘤大小、免疫分型、化療敏感性、原發部位、血清乳酸脫氫酶無關(P>0.05),在美國東部腫瘤協作組評分(Eastern Cooperative Oncology Group,ECOG評分)(>2分)、霍奇金淋巴瘤HL分期(Ann Arbor分期)(Ⅲ、Ⅳ期)、國際預后指數(international prognostic index,IPI)評分(≥3分)的DLBCL患者組織中lncRNA OTUD6B-AS1表達水平均低于ECOG評分(≤2分)、Ann Arbor分期(Ⅰ、Ⅱ期)、IPI評分(<3分)的DLBCL患者(P<0.05)。見表3。

表3 DLBCL組織中lncRNA OTUD6B-AS1表達與患者臨床病理參數的關系 例

2.3 COX回歸分析影響DLBCL患者預后不良的危險因素 單因素COX回歸分析表明,ECOG評分、Ann Arbor分期、IPI評分、lncRNA OTUD6B-AS1均是影響DLBCL患者預后的有關因素(P<0.05);多因素COX分析表明,lncRNA OTUD6B-AS1低表達是影響DLBCL患者預后不良的危險因素(P<0.05)。見表4。

表4 COX回歸分析影響DLBCL患者預后不良的危險因素

2.4 lncRNA OTUD6B-AS1表達對DLBCL患者預后的影響 對DLBCL患者進行5年隨訪,lncRNA OTUD6B-AS1低表達組生存率23.21%(13/56)低于高表達組生存率61.11%(33/54)(χ2=16.227,P<0.05)。見圖1。

圖1 lncRNA OTUD6B-AS1表達與DLBCL患者預后的關系

3 討論

DLBCL是臨床上較為常見的具有侵襲性的免疫系統惡性腫瘤疾病,是非霍奇金淋巴瘤中最常見的類型,在非霍奇金淋巴瘤中約占30%～40%[11],有較高發病率、死亡率,且進展迅速、易全身擴散,DLBCL患者發病年齡一般偏大,體質較弱,近年來,DLBCL發病率呈上升趨勢,盡管隨著新藥的不斷開發和治療方案的不斷成熟。關于DLBCL的治療取得了很大進展,醫生可根據患者血液病理學檢測和B細胞免疫表型確認治療方案,能夠提高患者的生存率,但仍有患者復發,預后較差,雖然IPI、ECOG評分等是評估癌癥患者預后的指標,但研究發現相同IPI分值的DLBCL患者預后情況大不相同,因此,尋找與DLBCL有關的新型腫瘤標志物,對改善患者預后具有重要意義[12,13]。

lncRNAs是近年來新發現的一類RNA,在多種惡性腫瘤疾病的發生、發展及預后中發揮重要作用,最近越來越多研究表明,lncRNA在DLBCL的發生發展中發揮作用[14,15]。吳艷珺等[16]總結了lncRNAs與DLBCL的關系,提到lncRNAEN-TPD1-AS1、lncRNA ACS-AS1、lncRNA H3BP5-AS1等17個lncRNA在DLBCL的發生發展過程中發揮重要的作用。lncRNA OTUD6B-AS1作為一種lncRNA,研究表明lncRNA OTUD6B-AS1在乳腺癌[17],結直腸癌[18],膀胱癌[19]等多種癌癥的發生中發揮重要的作用,如Ma等[17]從癌癥基因組圖譜數據庫中得到與乳腺癌有關的lncRNA,共鑒定出lncRNA OTUD6B-AS1等937個免疫相關lncRNA。Wang等[18]研究結果表明,lncRNA OTUD6B-AS1過表達對結直腸癌細胞增殖、侵襲、遷移等具有抑制作用。Wang等[19]研究結果表明,lncRNA OTUD6B-AS1通過誘導氧化應激顯著加劇三氧化二砷介導的氧化損傷,從而參與膀胱癌的發生。Wang等[20]研究結果表明,甲狀腺癌患者癌組織中lncRNA OTUD6B-AS1表達下調,lncRNA OTUD6B-AS1表達變化與甲狀腺癌的腫瘤大小、臨床分期和淋巴轉移有關,lncRNA OTUD6B-AS1過表達明顯降低甲狀腺癌細胞的活力、遷移和侵襲。本研究結果表明,研究組lncRNA OTUD6B-AS1表達水平明顯低于對照組,提示lncRNA OTUD6B-AS1可能具有抑制DLBCL發生的作用;在ECOG評分(>2分)、Ann Arbor分期(Ⅲ、IV期)、IPI評分(≥3分)的DLBCL患者組織中lncRNA OTUD6B-AS1表達水平均低于ECOG評分(≤2分)、Ann Arbor分期(Ⅰ、Ⅱ期)、IPI評分(<3分)的DLBCL患者,進一步說明lncRNA OTUD6B-AS1與DLBCL發生有關;Kaplan-Meier結果顯示lncRNA OTUD6B-AS1低表達者生存率低于高表達者,提示lncRNA OTUD6B-AS1低表達患者預后不良;多因素COX分析表明,lncRNA OTUD6B-AS1低表達是影響DLBCL患者預后不良的危險因素,提示lncRNA OTUD6B-AS1可作為評估DLBCL患者預后情況的輔助指標。

綜上所述,lncRNA OTUD6B-AS1與DLBCL的發生及預后有關,檢測lncRNA OTUD6B-AS1水平對DLBCL的發生及預后評估具有重要意義。