電針對營養性肥胖小鼠脂肪因子及脂肪酸合成酶的影響?

司原成，任晨晨，張二偉，康朝霞，莫曦雅，馮 麟，孫燕子，趙超超，李青青，陳 波

貴州中醫藥大學，貴州 貴陽 550025

單純性肥胖癥是一種慢性疾病，嚴重影響人們生活質量的提升，是多種疾病的高發危險因素，其致病機制研究的熱點亦傾向于脂肪及肝臟組織的脂質代謝異常方面［1-2］。脂質代謝異常是肥胖癥發生的顯著表現之一，其血清血脂［總膽固醇（cholesterol，CHO）、甘油三酯（triglycerides，TG）］及調控脂質代謝的細胞因子［瘦素（leptin，LP）、脂聯素（adiponectin，ADPN）］和脂肪酸合成酶都是在脂質代謝中擔當重要的角色［3-4］。

中醫認為，肥胖癥多因痰、虛、瘀夾雜所致，臨床上通常治以健脾、益氣、化痰、散瘀［5］。電針療法是中醫特色療法之一，具有良好的可控性和操作性［6］。本研究擬探討電針在改善肥胖癥脂質代謝異常方面的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實 驗 動 物50 只SPF 級C57BL/6 小 鼠，8 周齡，雌雄各半，體質量（18.15±2.36）g，購買于斯貝福（北京）生物技術有限公司［許可證號：SCXK（京）2016-0002］。飼養條件：飼養于貴州中醫藥大學基礎醫學院實驗中心動物房內，溫度23～25 ℃，濕度40%～60%，晝夜各半，7∶00—19∶00 開燈，19∶00—7∶00 關燈。實驗符合貴州中醫藥大學動物倫理委員會實驗動物福利和倫理相關規定（倫理編號：20210022）。

1.2 試劑及儀器小鼠血清CHO 試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：20181110）；小鼠血清TG 試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：20181110）；小鼠血清LP 試劑盒（依科賽生物科技有限公司，批號：20181114）；小鼠血清ADPN 試劑盒（武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批號：20181110）；小鼠FAS 試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：20181113）。ELX808IU-P 型全自動酶標儀（美國寶特公司）；Multiskan X1R型高速臺式冷凍離心機（美國ThermoScientic公司）；DY-89型電動玻璃勻漿機（浙江新芝生物有限公司）。

1.3 實驗方法

1.3.1 模型建立 50 只C57BL/6 小鼠，適應性喂養1 周后，分層次隨機選出6 只為正常組，余下44只飼以高脂飲食［北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號：SCXK（京）2016-0002］，8 周后，篩選出體質量大于正常組均值的20%的實驗鼠，且Lee's 指數顯著高于正常組的，定義為肥胖鼠，共得到18只肥胖鼠。

1.3.2 分組及干預 將18只肥胖鼠按照隨機數字表平均分成模型組、電針14天組、電針28天組，每組6 只。干預方法：穴位選擇參照2016版《實驗針灸學》［7］，電針組腧穴選取天樞、關元、足三里、三陰交干預，施以針刺補法，行搓針手法，得氣后，接通G6805-Ⅲ型電針儀治療，頻率30 Hz，強度以局部微微震顫為度。正常組與模型組以相同方式固定10 min，不予電針干預。

1.3.3 標本采集 每周固定時間測量實驗鼠的體質量、體長等指標。樣本分別在治療14、28 天等時間節點進行，股動脈取血，完成相關生化檢測。脫頸椎處死后，通過電動玻璃勻漿機將脂肪、肝臟等組織勻漿，離心，取上清液400 μL 于EP 管中，置于-80 ℃冷凍冰箱中保存，以便進行（fatty acid synthetase，FAS）檢測。

1.4 觀察指標

1.4.1 一般狀態 觀察各組實驗小鼠的毛色反應、大小便及精神狀態是否正常。

1.4.2 體質量及Lee's 指數 每周固定時間由專人測量每組實驗鼠體質量及體長（從鼻尖到肛門的長度）2 遍，取平均值，計算大鼠的Lee's 指數［Lee's指數

1.4.3 實驗室指標 采用酶聯免疫吸附測定法（Elisa）檢測CHO、TG、LP、ADPN、FAS 水平，按照試劑盒的說明書逐步操作，檢測實驗小鼠相關指標含量變化。

1.5 統計學方法使用SPSS 19.0 統計軟件進行分析，計量數據以±s 表示，單因素方差分析，組間配對S-N-K 檢驗。P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 小鼠形態學一般指標C57BL/6 小鼠，適應性喂養1 周后，毛色潤滑，精神狀態良好，大小便未見異常。飼養8 周以后，正常組無明顯變化，各組肥胖鼠，毛發出油，毛發略有成簇現象。經過干預治療后，電針14天組及電針28天組實驗鼠均出現明顯好轉。

2.2 小鼠體質量及Lee's 指數治療前模型組、電針14 天組及電針28 天組的體質量及Lee's 指數均顯著高于正常組（P＜0.01），表明各組肥胖鼠復制造模成功。經電針干預治療后，與模型組相比，電針14 天組與電針28 天組體質量及Lee's 指數均顯著下降（P＜0.01），其中電針28 天組較電針14天組更為明顯（P＜0.05）。見表1。

表1 各組小鼠體質量、體長及Lee's指數比較（±s）

表1 各組小鼠體質量、體長及Lee's指數比較（±s）

注：與正常組比較，**表示P＜0.01；與模型組比較，△表示P＜0.05，△△表示P＜0.01；與電針14天組比較，▲表示P＜0.05

組別正常組模型組電針14天組電針28天組鼠數體質量（g）治療前22.62±3.22 31.10±2.21**30.10±1.49**31.32±0.83**治療后19.88±0.75 24.33±1.61**24.87±1.29 22.12±0.86△▲體長（cm）治療前9.80±0.24 9.78±0.16 9.93±0.10 10.03±0.15治療后9.55±0.12 9.42±0.58 9.83±0.26 9.43±0.36治療后2.84±0.06 3.18±0.18**2.97±0.10△2.88±0.14△6 6 6 6 Lee's指數治療前2.89±0.19 3.21±0.08**3.13±0.08 3.14±0.02

2.3 小鼠血清血脂水平、血清脂肪細胞因子及脂肪和肝臟組織中FAS 的含量與正常組比較，模型組小鼠的血脂水平（CHO、TG）、血清脂肪細胞因子（LP、ADPN）、脂肪和肝臟組織中FAS 的含量均顯著升高；經電針干預治療后，與模型組相比較，電針14 天組與電針28 天組上述指標均顯著下降（P＜0.01），其中電針28 天組較電針14 天組更為明顯（P＜0.05）。見表2。

表2 各組小鼠血脂、脂肪細胞因子及不同組織中FAS含量比較（±s）

表2 各組小鼠血脂、脂肪細胞因子及不同組織中FAS含量比較（±s）

注：與正常組比較，**表示P＜0.01；與模型組比較，△表示P＜0.05，△△表示P＜0.01；與電針14天組比較，▲表示P＜0.05

組別正常組模型組電針14天組電針28天組鼠數血脂CHO（mmol/L）2.87±0.25 6.42±0.58**4.71±0.66△3.96±1.36△△▲TG（mmol/L）1.00±0.16 3.93±0.72**2.47±0.57△1.15±0.29△△▲脂肪細胞因子LP（pg/mL）383.39±40.40 1185.94±150.02**663.78±102.70△△471.17±146.12△△▲ADPN（pg/mL）379.28±55.60 623.63±66.15**491.79±32.64△△406.81±76.59△△▲肝臟（ng/mL）2.61±2.92 19.20±4.05**14.71±3.51△8.95±3.49△△▲6 6 6 6不同組織中FAS含量脂肪（ng/mL）9.83±2.09 40.55±6.12**21.82±1.83△△15.00±7.57△△▲

3 討論

流行病學調查結果顯示，中國目前超重率為31.5%，肥胖率為12.2%，而且這一數字依然呈現快速的增長［8-9］的趨勢。肥胖癥與高血壓、2 型糖尿病、膽囊炎及部分癌癥等疾病密切相關［10］。血清CHO、TG 是直接反應血脂狀態的客觀指標，降低血清血脂，有助于提高胰島素的敏感性，改善β胰島細胞功能狀態［11-12］。脂肪組織能夠分泌脂肪細胞因子，分泌LP、ADPN 特異性調節脂質代謝。LP抑制食欲，激動交感神經活性，釋放儲存的能量，抑制脂肪合成的作用［13］；ADPN 抑制糖異生，減少葡萄糖產生，降低脂肪堆積，促進骨骼肌細胞氧化，兩者協同調控脂肪分解、能量代謝平衡等環節［14］。FAS 在脂肪組織儲存和運輸能量，維持細胞結構穩定，提供多種激素合成所需的中間產物等方面起到重要作用［15］。

在中醫診斷治療體系中，電針亦是一種傳統而常規的治療手段［16-17］。天樞、關元、足三里、三陰交穴等四穴配伍，是調節脂質代謝的重要腧穴，顯著改善腸腑、脾胃及諸勞虛證［18］。電針具有調解瞬息電壓感受器陽離子通道受體，抑制增加能量消耗，抑制脂肪細胞分化，防止脂肪組織堆積，調節脂肪代謝的生理活動，活化Ca2+、Mg2+和Na2+等陽離子內流，改善胰島素等作用［19-20］。

本研究發現，模型組實驗鼠血清血脂（CHO、TG）及脂肪因子（LP、ADPN）均顯著高于正常組，在電針干預后得到有效改善，針灸治療的效果在一定時間內與治療時間呈現遞進關系，其在治療28天的減肥降脂效果優于治療的14 天時的效果。FAS 主要合成部位是脂肪和肝臟組織，對其含量變化的研究中發現，肥胖鼠脂肪及肝臟組織的FAS含量均顯著增加，在治療后可有效減少FAS的合成，對調節脂質代謝異常有著關鍵作用。

綜上所述，電針可調控肥胖癥小鼠的體質量、血脂（CHO、TG）、脂肪細胞因子（LP、ADPN）、脂肪和肝臟組織中的FAS 的功能，從而改善肥胖癥的脂質代謝，實現減肥消脂目的。