miR-133b在子宮內膜癌中的表達及臨床意義

黨引利,羅海霞,劉瑩瑩,劉曉鶯,樊海燕

陜西省榆林市第一醫院檢驗科,陜西榆林 719000

子宮內膜癌(EC)又稱子宮體癌,其發病率位居婦科惡性腫瘤首位,主要發生于圍絕經期和絕經后的中老年婦女中,嚴重威脅女性身心健康和生命安全[1]。雖然大多數EC患者經臨床合理治療后可獲得較好預后,但相較于其他惡性腫瘤逐漸下降的病死率,EC病死率卻呈現明顯增長趨勢[2]。尋找新的高效的治療靶點對于改善EC患者預后具有重要意義。微小核糖核酸(miRNA)是近年研究較多的,與惡性腫瘤發生、發展、轉移等密切相關的非編碼內源性RNA[3-4]。近年研究亦在EC病灶組織中發現了許多表達異常的miRNA[5-6]。miR-133b位于6號染色體短臂1區2帶,其低表達與食管鱗癌、直腸癌患者細胞增殖、侵襲、遷移有關[7-8],其高表達與宮頸癌的發生、發展有關[9],但關于其在EC中的表達及作用的分析報道較為少見。本研究旨在探討miR-133b在EC癌變組織中的表達及意義,現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 以本院2020年1月至2022年6月在腫瘤病灶切除術中收集的EC癌變組織(EC組)、診斷性刮宮術中收集的子宮內膜增生性病變組織(增生組)、進行診斷性刮宮術或行子宮切除術的子宮異常出血者和子宮肌瘤者的正常子宮內膜組織(對照組)各66例為研究對象。各組織來源者的納入標準:術前未接受任何藥物治療;順利完成手術操作;獲得新鮮子宮內膜組織標本,且保存良好;臨床資料完整。各組織來源者的排除標準:合并凝血系統或免疫系統疾病;合并嚴重心、肝、腎、肺和腦血管疾病;合并其他部位腫瘤。EC組患者年齡39～70歲,平均(54.64±7.46)歲;增生組患者年齡36～71歲,平均(53.27±8.05)歲;對照組患者年齡36～69歲,平均(51.72±6.92)歲。3組患者年齡比較,差異無統計學意義(P>0.05)。本研究均征得患者或陪同家屬同意,且簽訂知情同意書。本研究經本院醫學倫理委員會批準。

1.2方法

1.2.1miR-133b測定 (1)總RNA提取:取適量子宮內膜組織標本,加液氮快速研成粉末,嚴格參照Trizol試劑盒說明書,加入總RNA抽提試劑,提取組織標本中的總RNA;紫外分光光度計檢驗提取的RNA純度,測定標本吸光度(A)。當A260/230和A260/280均在1.9～2.1時,提示RNA純度達標。1%瓊脂糖凝膠電泳分析提取的RNA,電泳樣帶5S rRAN、18S rRAN、28S rRAN清晰存在時,證明提取的RNA完整性良好。(2)RNA檢測:嚴格按照反轉錄試劑盒說明書合成上述提取物的反轉錄cDNA標本;以反轉錄cDNA為模板(3.0 μL),聯合miR-133b正向和反向引物各1.0 μL(正向引物:5′-CTT TGG TCC CCT TCA ACC A-3′,反向引物:5′-GTG CAG GGT CCG AGG T-3′),2×SYBR Green Ⅰ Master混合物12.5 μL,雙蒸水7.5 μL,選擇實時熒光定量PCR技術,經過95 ℃預變性3 min,95 ℃變性10 s,59.2 ℃退火30 s,70 ℃延伸30 s,反復40個循環,測定標本中miR-133b水平,記錄反應標本的Ct值,用2-ΔΔCt計算組織標本中miR-133b表達水平。

1.2.2腫瘤標志物檢測 分析天平精確稱取EC組子宮內膜組織1 000 mg,加入液氮充分研磨后轉入2 mL RIPA裂解液勻漿,17 000 r/min離心10 min,分離上清液保存待用。采用化學發光法測定組織上清液中腫瘤標志物人附睪蛋白4(HE4)、糖類抗原125(CA125)表達水平。結果判斷:HE4>140 pmol/L為陽性,HE4≤140 pmol/L為陰性;CA125>35 U/mL為陽性,CA125≤35 U/mL為陰性。

1.2.3雌激素受體(ER)檢測 獲取EC子宮內膜組織標本,4%甲醛溶液固定,經石蠟包埋、切片、免疫組化染色后,顯微鏡下觀察組織切片,細胞核或細胞膜中出現棕黃色顆粒,判定為陽性細胞。依據陽性細胞占比進行切片中ER陽性表達判定,陽性細胞占比>5%判定為ER陽性表達[10]。

2 結 果

2.13組子宮內膜組織中miR-133b表達水平比較 EC組患者子宮內膜組織miR-133b表達水平為0.65(0.46,1.09),增生組為1.32(0.93,1.72),對照組為1.84(1.45,2.31),3組子宮內膜組織miR-133b表達水平比較,差異有統計學意義(H=80.513,P<0.05),且EC組低于增生組和對照組(Z=5.787、8.199,P<0.05),增生組低于對照組(Z=4.624,P<0.05)。

2.2不同臨床病理特征EC患者子宮內膜組織miR-133b表達水平比較 不同年齡、病理分型、細胞分化程度、肌層浸潤深度、ER表達的EC患者子宮內膜組織miR-133b表達水平比較,差異均無統計學意義(P>0.05);FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、HE4陽性、CA125陽性的EC患者子宮內膜組織miR-133b表達水平均低于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移、HE4陰性、CA125陰性的患者(P<0.05)。見表1。

表1 不同臨床病理特征的EC患者子宮內膜組織中miR-133b表達水平比較

2.3EC組患者子宮內膜組織miR-133b表達水平與FIGO分期、淋巴結轉移、HE4表達、CA125表達的相關性 相關分析顯示,EC組患者子宮內膜組織中miR-133b表達水平與FIGO分期、淋巴結轉移、HE4表達、CA125表達呈負相關(r=-0.445、-0.405、-0.445、-0.534,P<0.001)。

2.4miR-133b對EC、EC病理分期及淋巴結轉移的診斷效能 ROC曲線分析顯示:以增生組為對照,miR-133b診斷EC的曲線下面積(AUC)為0.802(95%CI:0.726～0.877);以FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期為對照,miR-133b診斷FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期的AUC為0.765(95%CI:0.650～0.880);以無淋巴結轉移為對照,miR-133b診斷EC淋巴結轉移的AUC為0.826(95%CI:0.756～0.895)。見圖1和表2。

注:A為miR-133b診斷EC的ROC曲線;B為miR-133b診斷EC病理分期的ROC曲線;C為miR-133b診斷EC淋巴結轉移的ROC曲線。圖1 子宮內膜組織中miR-133b診斷EC、EC病理分期和淋巴結轉移的ROC曲線

表2 miR-133b對EC、EC病理分期及淋巴結轉移的診斷效能

3 討 論

EC是女性生殖系統三大惡性腫瘤之一,且近年來其發病率呈現出一定上升趨勢。有研究指出,EC患者的預后與疾病早期診斷及病情進展情況密切相關,當病灶僅局限于內膜組織時,其5年生存率可高達91%,但當發生遠處轉移時,5年生存率可降至17%以下[11]。故做好EC診斷及病情進展狀況的準確判斷對患者預后的評估至關重要。

目前已存在的診斷性刮宮技術、盆腔鏡技術及磁共振技術等雖然在EC診斷中有一定的靈敏度和特異度,但仍存在一定局限性[12]。miRNA是一類長度約為22～25個核苷酸的單鏈RNA,被越來越多研究證實與惡性腫瘤的發生、發展相關[13]。miR-133b被證明是細胞代謝中的關鍵分子,可在轉錄后調節機體代謝[14]。CHENG等[15]研究發現,miR-133b屬于海綿腫瘤中的抑制基因;LI等[16]在卵巢癌研究中發現,卵巢癌患者卵巢組織及血液中miR-133b水平均顯著低于正常卵巢組織,miR-133b可通過抑制Warburg效應而抑制腫瘤的發生、發展,并提出這一發現可能會改善卵巢癌的診斷及治療方法。 LIAO等[17]在EC研究中發現,miR-133b在EC組織中低表達,且在腫瘤高病理分期和絕經患者中表達水平較低,在EC患者體內miR-133b可通過下調SUMO1抑制腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲作用。本研究得到與LIAO等[17]相似的結果,EC組子宮內膜組織miR-133b表達水平顯著低于增生組和對照組,且其在FIGOⅢ～Ⅳ期、有淋巴結轉移、HE4陽性、CA125陽性患者子宮內膜組織中的表達水平均顯著低于FIGOⅠ～Ⅱ期、無淋巴結轉移、HE4陰性、CA125陰性的患者(P<0.05),證實在EC患者體內miR-133b呈低表達狀態,且病情越嚴重其表達水平越低。HE4和CA125是臨床常用的腫瘤標志物,對EC診斷均具有較高價值[18]。本研究相關分析顯示,EC組患者子宮內膜組織中miR-133b表達水平與HE4和CA125表達呈負相關(P<0.05),提示miR-133b可用于EC診斷及病情判斷。進一步ROC曲線分析顯示,miR-133b對EC、EC FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期和淋巴結轉移均具有一定診斷價值,AUC分別為0.802、0.765和0.826,但單獨用于病理分期發展診斷的特異度較低,若與其他腫瘤標志物進行聯合檢測,有可能會提高其臨床應用價值。

綜上所述,miR-133b在EC中呈低表達,在EC發生和病情發展方面均具有一定診斷價值。但受時間和其他條件限制,本研究仍存在諸多不足有待后續進一步證實。諸如,miR-133b均低表達于卵巢癌病灶組織和血清中,該現象是否同樣存在于EC中?臨床是否可通過監測血清miR-133b進行EC早期判斷?此外,基質金屬蛋白酶(MMP)-9在EC轉移中起促進作用[19],而以往在諸多惡性腫瘤發病機制研究中發現miR-133b通過調節MMP-9代謝,抑制腫瘤的發生、發展[9],該機制是否同樣存在EC中?有待進一步研究分析。