云南山橙果實中的生物堿類成分研究*

劉家歡，吳 靜，郁 陽，，蔡祥海△

(1.安徽中醫藥大學藥學院，安徽 合肥 230012；2.中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續利用國家重點實驗室，云南 昆明 650201)

山橙屬（Melodinus）是夾竹桃科（Apocynaceae）的一個大屬，全球約53 種，分布于亞洲熱帶、亞熱帶和大洋洲至太平洋沿岸。我國產11 種，主要分布于西南、華南及臺灣等省區[1]。山橙屬植物在民間藥用廣泛，例如，山橙（M.suaveolens）的果實用于治療腹痛、疝氣、消化不良、小兒疳積、睪丸炎等癥[1]；茶藤（M.magnificus）的葉經揉制作茶飲料，有興奮作用[1]；尖山橙（M.fusiformis）全株供藥用，具有活血、補肺、祛風、通乳和治風濕性心臟病等功效[1]。

山橙屬植物豐富的化合物類型和廣泛的生物活性使得國內外學者對其開展系統而深入的研究。該屬植物中的生物堿成分種類及結構豐富多樣，已知報道的生物堿約300 個[2]，其中以單萜吲哚生物堿最為主要。本課題組前期從該屬植物山橙（M.suaveolens）、思茅山橙（M.henryi）、薄葉山橙（M.tenuicaudatus）、龍州山橙（M.morsei）、尖山橙（M.fusiformis）以及云南山橙（M.ynnanensis）的莖葉部位中鑒定了一系列骨架新穎或細胞毒活性顯著的單萜吲哚生物堿[3-7]。為了挖掘更多結構新穎或活性顯著的化合物分子，同時對比同一植物不同部位次生代謝產物的差異，我們對云南山橙的果實進行系統的生物堿成分分離，從中鑒定21 個單體化合物，包括1 個新的單萜喹啉生物堿melloyunnanine D（1）。20 個已知化合物依次鑒定為：scandine（2），scandine N-oxide（3），10-hydroxyscandine（4），tabersonine（5），11-methoxytabersonine（6），11 -hydroxytabersonine （7），lochnericine（8），pachysi-phine（9），11-hydroxylochnericine（10），19Rhydrox ytabersonine （11），19R -acetoxytabersonine（12），voaphylline（13），19S-vindolinine（14），19Rvindolinine（15），venalstonidine（16），17α -hydroxyvenalstonine （17），19R -methoxytubotaiwine（18），kopsiyunnanines F1 （19），stemmadenine -N -oxide（20），16-epi-stemmadenine（21）。

1 儀器與材料

比旋光用Jasco P-1020 數字式旋光儀測定。ESIMS 在UPLC-IT-TOF 或Agilent G6230 TOF 質譜儀上測定。HRESIMS 在Agilent G230 質譜儀上測定。1D 和2D-NMR 在Bruker AM-400、DRX-500 或AV-600 核磁共振儀上測定，以TMS 為內標，化學位移δ以ppm 為單位，耦合常數J 以Hz 為單位。分析或半制備型Waters 1525 HPLC 系統，色譜柱為Waters Xbridge 系列或Waters Sunfire 系列（4.6 mm × 150 mm；19 mm×250 mm）。反相填充材料RP-18 硅膠（20～45 μm）日本Fuji 公司生產。中壓色譜MPLC 為Buchi 系統，色譜柱為RP-18 填充柱（15 × 230 and 26×460 mm）。柱層析用硅膠（200～300 目）為安徽良臣硅源材料有限公司生產，薄層層析硅膠板為青島海洋硅膠試劑廠生產。凝膠材料Sephadex LH-20 為Pharmacia 公司生產。生物堿顯色劑為改良碘化鉍鉀。所用試劑石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇均為工業級溶劑，經過重蒸后使用。

云南山橙（Melodinus yunnanensis Tsiang & P.T.Li）的果實于2020年1月采自云南省耿馬縣，經由劉成工程師鑒定，樣品標本存放于中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源持續利用國家重點實驗室，標本號為Cai20200107。

2 提取與分離

云南山橙（M.yunnanensis）的新鮮果實5 kg，切碎后用氯仿常溫浸提3 次（3×10 L），每次間隔2 d，提取液減壓回收，得到總浸膏。總浸膏用0.5%的HCl溶液溶解完全，調pH 到2～3，用等體積乙酸乙酯萃取3 次，除去非生物堿雜質；酸水部位用20%的氨水調節pH 到8～9，用等體積乙酸乙酯萃取3 次，合并濃縮乙酸乙酯層得到生物堿總堿（28.6 g）。用30 g RP-18反相硅膠拌樣，經C18MPLC 中壓柱10%～90%甲醇水溶液梯度洗脫，用TLC 薄層色譜法和碘化鉍鉀顯色劑檢測，合并為6 個組分（Fr.A-F）。

Fr.B（1.2 g），經Sephadex LH-20 葡聚糖凝膠柱用80%甲醇-水溶液等度洗脫，分為2 個組分，B-1～B-2。B-1 利用正相硅膠柱層析，石油醚-丙酮（4 ∶1 v/v）洗脫，進一步采用HPLC（乙腈-水：30 ∶70～45 ∶55，v/v）制備得到化合物14（12.9 mg）和17（9.2 mg）。B-2 經HPLC（乙腈-水：40 ∶60～55 ∶45，v/v）制備得到化合物1（8.1 mg）。

Fr.C（3.1 g）經C18MPLC 反相中壓（甲醇-水：20∶80～60 ∶40，v/v）梯度洗脫劃為7 段（C-1～C-7）。C-3經HPLC（乙腈-水：30 ∶70～40 ∶60，v/v）制備得到化合物4（100 mg）；C-5 經HPLC（乙腈-水：35 ∶65～50 ∶50，v/v）制備得到化合物15（43.9 mg）；C-6 經HPLC（乙腈-水：40 ∶60～55 ∶45，v/v）制備得到化合物18（12 mg）；C-7 經HPLC（乙腈-水：45 ∶55～60 ∶40，v/v）制備得到化合物16（17.5 mg）和19（3.2 mg）。

Fr.D（1.4 g），經Sephadex LH-20 葡聚糖凝膠柱用80%甲醇-水溶液等度洗脫，分為6 個組分（D-1～D-6）。D-2 先經正相硅膠柱層析，氯仿-丙酮（4 ∶1，v/v）洗脫，再采用HPLC（乙腈-水：40 ∶60～55 ∶45，v/v）分離純化得到化合物20（15 mg）和21（30.4 mg）。

Fr.E（5.5 g），先經C18MPLC 反相中壓（甲醇-水：30 ∶70～60 ∶40，v/v） 梯度洗脫劃段得到3 個組分（E-1～E-3），E-2（3.9 g）經過正相硅膠柱層析，石油醚-丙酮（9 ∶1，v/v）洗脫，得到化合物5（95 mg）、2（約1 g）和3（29.7 mg）。Ⅴ-3 經過正相硅膠柱層析，石油醚-丙酮（10 ∶1，v/v）洗脫，得到的組分再進一步用HPLC 純化（乙腈-水：50 ∶50～65 ∶35，v/v）得到化合物9（7.7 mg）、11（6.5 mg）和7（188 mg）。

Fr.F（1.6 g），先經C18MPLC 反相中壓（甲醇-水：30 ∶70～70 ∶30，v/v） 梯度洗脫劃段得到2 個組分（F-1～F-2），F-2 經HPLC（乙腈-水：60 ∶40～75：25，v/v）分離得到化合物6（3 mg）、8（13.3 mg）、10（90 mg）、12（13.4 mg）和13（12 mg）。

圖1 生物堿1～21 的化學結構

圖2 化合物1 主要的1H-1H COSY，HMBC 和ROESY 相關

3 結構鑒定

化合物1：淡黃色粉末。[α]24.6D+ 73.5（c，0.11，MeOH）；UV（MeOH）λmax（logε）297（2.87），247（3.28），205（3.80）nm。高分辨質譜（HREISMS）給出其分子離子峰m/z 367.1661（[M-H]-，計算值為367.1663）推斷其分子式為C21H24N2O4，不飽和度為11。1H NMR 譜（表1）顯示一組芳環質子信號[δH7.07（1H，d，J=7.8 Hz），6.62（1H，t，J=7.8 Hz），6.91（1H，t，J=7.8 Hz），6.58（1H，d，J=7.8 Hz）]，一個羥基信號[δH4.38（1H，br.s）]，一個甲氧基信號[δH3.49（3H，s）]，一個單峰的次甲基信號[δH1.87（1H，s）]以及一個二重峰的甲基信號[δH1.17（3H，d，J=7.4 Hz）]。13C NMR 和DEPT 譜（表1）圖顯示出21 個碳信號，包括1 個甲基信號，1個甲氧基信號、4 個亞甲基信號、8 個次甲基信號和7個季碳信號。低場區的碳譜信號能指認出一個酯羰基（δC171.6），一個未被取代的四氫喹啉環（δC142.2，128.1，127.2×2，118.5，115.8）。通過1D NMR 圖譜分析，發現化合物1 與已知化合物meloyunnanine A 相似，主要區別在于化合物1 的高場區出現兩個次甲基信號（δC53.4，53.2），而低場區未見碳碳雙鍵信號。1H-1H COSY 譜顯示H2-3/H-14/H-15 的自旋耦合片段，HMBC 譜給出H-15（δH3.05）與C-20（δC47.2）、C-21（δC79.7）的相關信號，再結合分子式，推測化合物1 的C-14、C-15 位為環氧取代。

表1 化合物1 的1H 和13C NMR 數據（500/125 MHz，acetone-d6）

化合物1 的相對構型由ROESY 譜圖分析推定。其中主要的ROESY 相關信號H-19/H-21 表明這兩個氫質子取向一致，為α 取向；相應地，H3-18/H-15之間以及Hb-17/H-15 之間的NOE 相關，表明18-CH3、Hb-17 和H-15 同處于平面的另一側，為β 取向。此外，C-2 位的-OH 以及C-16 位的-COOCH3沒有可靠的NOE 相關信號，但鑒于分子骨架的剛性，它們的構型可判定為β。另外，其構型的確定也可以通過CH3-18 的化學位移判定，由于受到OH 的γ-steric效應。鑒于meloyunnanines A-C 也是從同一植物中發現且已經發表，由此確定化合物1 結構并命名為meloyunnanine D。

化合物2：白色粉末。使用400 MHz 氫譜和500 MHz 碳譜分別測定，下同。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 9.80 （1H，s，NH），7.42（1H，d，J=7.7 Hz，H-9），7.03 （1H，t，J=7.7 Hz，H-10），7.16 （1H，t，J=7.8 Hz，H-11），6.90 （1H，d，J=7.8 Hz，H-12），5.72（1H，m，H-14），5.68（1H，d，J=12.8 Hz，H-15），5.60（1H，d，J=10.8 Hz，H-19），4.88（1H，d，J=17.5 Hz，H-18），4.78 （1H，d，J=10.8 Hz，H-18），3.56（3H，s，-OCH3）；13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ 168.6（s，C-2），48.7（t，C-3），54.1（t，C-5），41.8（t，C-6），58.5（s，C-7），129.8（s，C-8），128.1（d，C-9），124.2（d，C-10），128.3（d，C-11），115.8 （d，C-12），136.3（s，C-13），123.6（d，C-14），132.1（d，C-15），64.9（s，C-16），45.3（t，C -17），114.6（t，C -18），143.3（d，C -19），48.1 （s，C -20），85.2 （d，C -21），171.3 （s，COOCH3），52.4（q，-OCH3）。以上數據與文獻對比[8-9]，鑒定化合物2 為scandine。

化合物3：白色粉末。1H NMR（400 MHz，methanol-d4）δ 8.10（1H，d，J=7.8 Hz，H-9），7.08（1H，t，J=7.7 Hz，H-10），7.22（1H，t，J=7.8 Hz，H-11），6.87（1H，d，J=7.8 Hz，H-12），5.90（1H，dd，J=2.3，10.3 Hz，H-14），5.90（1H，overlap，H-15），5.86（1H，overlap，H-19），5.10（1H，d，J=17.4 Hz，H-18），5.06（1H，d，J=10.8 Hz，H-18），3.55（3H，s，-OCH3）；13C NMR（125 MHz，methanol-d4）δ 170.6（s，C-2），62.8（t，C-3），66.6（t，C-5），34.6（t，C-6），60.4（s，C-7），126.8（s，C-8），131.0（d，C-9），117.7（d，C-10），129.5（d，C-11），116.7（d，C-12），137.3（s，C-13），124.4（d，C-14），132.5（d，C-15），63.7（s，C-16），43.3（t，C-17），115.6（t，C-18），142.5（d，C-19），50.5 （s，C-20），93.1（d，C-21），170.6（s，COOCH3），53.5（q，-OCH3）。以上數據與文獻對比[10]，鑒定化合物3 為scandine N-oxide。

化合物4：白色粉末。1H NMR（400 MHz，methanol-d4）δ 6.86（1H，d，J=2.3 Hz，H-9），6.61（1H，dd，J=8.5，2.3 Hz，H-11），6.67（1H，d，J=8.5 Hz，H-12），5.73（1H，m，H-14），5.66（1H，overlap，H-15），5.62（1H，overlap，H-19），4.92（1H，d，J=17.5 Hz，H-18a），4.84（1H，d，J=10.8 Hz，H-18b），3.59（3H，s，-OCH3）；13C NMR（125 MHz，methanol-d4）δ 171.5（s，C-2），48.5（t，C-3），54.3（t，C-5），45.5（t，C-6），59.3（s，C-7），128.6（s，C-8），115.5（d，C-9），154.9（s，C-10），117.5（d，C-11），114.7（d，C-12），131.0（s，C-13），124.1（d，C-14），132.7（d，C-15），64.7（s，C-16），40.8（t，C-17），114.9（t，C-18），143.7 （d，C-19），48.8 （s，C -20），85.0 （d，C -21），170.0（s，COOCH3），53.0（q，-OCH3）。以上數據與文獻對比[11]，鑒定化合物4 為10-hydroxyscandine。

化合物5：白色粉末。1H NMR（600 MHz，acetoned6）δ 9.33（1H，s，NH），7.31（1H，d，J=7.4 Hz，H-9），6.87（1H，t，J=7.4 Hz，H-10），7.15（1H，t，J=7.4 Hz，H-11），7.04（1H，d，J=7.4 Hz，H-12），5.79（1H，m，H-14），5.70（1H，d，J=9.9 Hz，H-15），0.64（3H，d，J=7.3 Hz，H-18），3.70 （3H，s，COOCH3）；13C NMR（150 MHz，acetone-d6）δ 167.2（s，C-2），51.2（t，C-3），51.4（t，C-5），45.8（t，C-6），56.2（s，C-7），139.0（s，C-8），122.3（d，C -9），121.3（d，C -10），128.6（d，C -11），110.6（d，C-12），144.7（s，C-13），126.2（d，C-14），133.6（d，C-15），92.5（s，C-16），29.4（t，C-17），7.8（q，C-18），27.6（t，C-19），42.3（s，C-20），70.7（d，C-21），168.8（s，COOCH3），51.1（q，-OCH3）。以上數據與文獻對比[12]，鑒定化合物5 為tabersonine。

化合物6：白色粉末。1H NMR（600 MHz，acetoned6）δ 9.30（1H，s，NH），7.15（1H，d，J=8.2 Hz，H-9），6.39（1H，dd，J=7.3，8.2 Hz，H-10），6.66（1H，d，J=2.2 Hz，H-12），5.77 （1H，m，H-14），5.67 （1H，d，J=9.9 Hz，H-15），0.62（3H，t，J=7.5 Hz，H-18），3.29（1H，s，H -21），3.68 （3H，s，COOCH3），3.73 （3H，s，11 -OCH3）；13C NMR（150 MHz，acetone-d6）δ 167.8（s，C-2），51.2（t，C-3），51.4（t，C-5），45.8（t，C-6），55.6（s，C-7），131.2（s，C-8），122.6（d，C-9），106.0（d，C-10），161.2（s，C-11），97.8（d，C-12），145.9（s，C-13），126.2 （d，C-14），133.6 （d，C-15），92.7（s，C-16），23.0（t，C-17），7.8（q，C-18），27.5 （t，C-19），42.4（s，C-20），70.8（d，C-21），168.8（s，COOCH3），51.1（q，COOCH3），55.5（q，11-OCH3）。以上數據與文獻對比[13]，鑒定化合物6 為11-methoxytabersonine。

化合物7：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetoned6）δ 9.23（1H，s，NH），8.26（1H，s，OH），7.08（1H，d，J=8.0 Hz，H-9），6.33 （1H，dd，J=8.0，2.1 Hz，H-10），6.58（1H，d，J=2.1 Hz，H-12），0.62（3H，t，J=7.4 Hz，H -18），3.68 （3H，s，COOCH3）；13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ 167.8（s，C-2），51.0（t，C-3），51.2（t，C-5），45.7（t，C-6），55.4（s，C-7），129.9（s，C-8），122.2（d，C -9），107.5（d，C -10），158.5（s，C -11），98.8（d，C-12），145.6 （s，C-13），126.0 （d，C-14），133.4（d，C-15），92.2（s，C-16），29.2（t，C-17），7.6（q，C-18），27.3（t，C-19），42.2（s，C-20），70.7（d，C-21），168.7（s，COOCH3），51.0（q，COOCH3）。以上數據與文獻對比[14]，鑒定化合物7 為11-hydroxytabersonine。

化合物8：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 9.32（1H，s，NH），7.24（1H，d，J=7.4 Hz，H-9），6.87（1H，t，J=7.4 Hz，H-10），7.13（1H，t，J=7.4 Hz，H-11），7.03 （1H，d，J=7.4 Hz，H-12），0.73（3H，t，J =7.2 Hz，H -18），3.73（3H，s，COOCH3）；13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ 168.0（s，C-2），50.7（t，C-3），51.1（t，C-5），45.9 （t，C-6），56.0 （s，C-7），138.6（s，C -8），122.2（d，C -9），121.4 （d，C -10），128.6（d，C-11），110.7（d，C-12），144.5（s，C-13），54.3（d，C-14），57.3（d，C-15），91.1（s，C-16），24.2（t，C-17），7.5（q，C-18），25.6（t，C-19），41.9（s，C-20），68.7 （d，C -21），168.0 （s，COOCH3），51.1（q，COOCH3）。以上數據與文獻對比[15]，鑒定化合物8 為lochnericine。

化合物9：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 9.32（1H，s，NH），7.27（1H，d，J=7.4 Hz，H-9），6.86（1H，t，J=7.4 Hz，H-10），7.13（1H，t，J=7.4 Hz，H-11），7.03 （1H，d，J=7.4 Hz，H-12），0.70（3H，t，J =7.3 Hz，H -18），3.72（3H，s，COOCH3）；13C NMR（100 MHz，acetone-d6）δ 166.1（s，C-2），50.3（t，C-3），51.9（t，C-5），45.6 （t，C-6），56.1 （s，C-7），139.1 （s，C -8），122.7（d，C -9），121.6（d，C -10），128.9（d，C-11），110.8（d，C-12），144.9（s，C-13），52.7（d，C-14），56.5（d，C-15），91.7（s，C-16），24.9（t，C-17），7.8（q，C-18），27.5（t，C-19），38.1（s，C-20），71.8 （d，C -21），169.0 （s，COOCH3），51.3（q，COOCH3）。以上數據與文獻對比[16]，鑒定化合物9 為pachysiphine。

化合物10：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone -d6）δ 9.23 （1H，s，NH），8.26（1H，s，OH），7.01（1H，d，J=8.0 Hz，H-9），6.33（1H，dd，J=8.0，2.1 Hz，H-10），6.58（1H，d，J=2.1 Hz，H-12），0.72（3H，t，J=7.4 Hz，H-18），3.71 （3H，s，COOCH3）；13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ 166.6（s，C-2），51.0（t，C-3），52.0（t，C-5），45.4（t，C-6），55.6（s，C-7），129.9（s，C-8），122.8（d，C -9），107.6（d，C -10），158.6（s，C -11），98.8（d，C -12），145.7（s，C -13），52.4（d，C -14），56.2（d，C-15），91.3（s，C-16），24.5（t，C-17），7.5（q，C-18），27.1（t，C-19），38.0（s，C-20），71.7（d，C-21），168.7（s，COOCH3），51.5（q，COOCH3）。以上數據與文獻對比[10]，鑒定化合物10 為11-hydroxylochnericine。

化合物11：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 9.29（1H，s，NH），7.33（1H，d，J=7.4 Hz，H-9），6.86（1H，t，J=7.4 Hz，H-10），7.14（1H，t，J=7.4 Hz，H-11），7.03 （1H，d，J=7.4 Hz，H-12），5.85（1H，overlap，H-14），5.84 （1H，overlap，H-15），0.82（3H，d，J =6.3 Hz，H -18），3.67（3H，s，COOCH3）；13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ 166.6（s，C-2），51.2（t，C-3），51.4（t，C-5），45.8 （t，C-6），56.0 （s，C-7），138.5（s，C -8），122.0（d，C -9），121.2 （d，C -10），128.5（s，C-11），110.4（d，C-12），144.7（s，C-13），126.8（d，C-14），130.8（d，C-15），92.7 （s，C-16），28.3（t，C-17），18.8（q，C-18），65.8（d，C-19），47.6（s，C-20），67.3 （d，C-21），168.9（s，COOCH3），50.9（q，COOCH3）。以上數據與文獻對比[17]，鑒定化合物11 為19R-hydroxytabersonine。

化合物12：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 9.34（1H，s，NH），7.35（1H，d，J=7.3 Hz，H-9），6.87（1H，t，J=7.3 Hz，H-10），7.17（1H，t，J=7.3 Hz，H-11），7.07 （1H，d，J=7.3 Hz，H-12），5.96（1H，m，H-14），5.77 （1H，d，J=10 Hz，H-15），0.85（3H，d，J =6.4 Hz，H -18），3.67（3H，s，COOCH3）；13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ 166.4（s，C-2），50.8（t，C-3），51.2（t，C-5），45.5（t，C-6），56.2（s，C-7），138.3 （s，C-8），122.1 （d，C-9），121.3（d，C-10），128.7（s，C-11），110.7（d，C-12），144.7（s，C-13），128.1 （d，C-14），138.3（d，C-15），92.3（s，C-16），28.3（t，C-17），15.5（q，C-18），66.9（d，C-19），46.8（s，C-20），69.2 （d，C-21），168.3（s，COOCH3），50.9（q，COOCH3），169.8 （s，OCOCH3），20.8（q，OCOCH3）。以上數據與文獻對比[18]，鑒定化合物12 為19R-acetoxytabersonine。

化合物13：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 9.82（1H，s，NH），7.38（1H，d，J=7.6 Hz，H-9），6.93（1H，t，J=7.6 Hz，H-10），6.97（1H，t，J=7.6 Hz，H -11），7.25（1H，d，J =7.6 Hz，H -9），0.74（3H，t，J=7.4 Hz，H-18）.13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ 140.4（s，C-2），54.3（t，C-3），54.6（t，C-5），23.7（t，C-6），109.4（s，C-7），129.3 （s，C-8），118.0（d，C-9），118.9（d，C-10），120.8（d，C-11），110.9（d，C-12），136.9（s，C-13），52.4 （d，C-14），59.5（d，C-15），26.6（t，C-16），36.9（t，C-17），7.6（q，C-18），32.9（t，C-19），34.3（s，C-20），59.0（t，C-21）。以上數據與文獻對比[19]，鑒定化合物13 為voaphylline。

化合物14：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 7.02（1H，d，J=7.3 Hz，H-9），6.67（1H，t，J=7.3 Hz，H-10），6.93 （1H，t，J=7.3 Hz，H-11），6.63（1H，d，J=7.3 Hz，H-12），0.56（1H，d，J=7.3 Hz，H-18），3.64（3H，s，COOCH3）；13C NMR（125 MHz，acetone-d6）δ 81.8（s，C-2），50.9（t，C-3），58.1（t，C-5），38.1（t，C-6），58，7（s，C-7），139.2（s，C-8），122.5（d，C -9），119.9（d，C -10），128.0（d，C -11），110.4（d，C-12），151.7 （s，C-13），130.2（d，C-14），132.5（d，C-15），43.6（d，C-16），32.5 （t，C-17），10.7（q，C-18），59.6（d，C-19），45.6（s，C-20），76.5 （t，C-21），174.2（s，COOCH3），51.7（q，COOCH3）。以上數據與文獻對比[20]，鑒定化合物14 為19S-vindolinine。

化合物15：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 7.08（1H，d，J=7.3 Hz，H-9），6.68（1H，t，J=7.3 Hz，H-10），6.96 （1H，t，J=7.3 Hz，H-11），6.64（1H，d，J=7.3 Hz，H-12），0.99（1H，d，J=6.8 Hz，H-18），3.65（3H，s，COOCH3）；13C NMR（100 MHz，acetone-d6）δ 82.5（s，C-2），50.9（t，C-3），58.3（t，C-5），36.9（t，C-6），60.0（s，C-7），139.5（s，C-8），123.9（d，C-9），120.2（d，C-10），129.6（d，C-11），111.4（d，C-12），151.0（s，C-13），127.8（d，C-14），131.9（d，C-15），39.8（d，C-16），29.2（t，C-17），7.5（q，C-18），49.4（d，C-19），46.7（s，C-20），79.7（t，C-21），175.0（s，COOCH3），51.8（q，COOCH3）。以上數據與文獻對比[21]，鑒定化合物15 為19R-vindolinine。

化合物16：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 7.04（1H，d，J=7.2 Hz，H-9），6.64（1H，t，J=7.2 Hz，H-10），6.93 （1H，t，J=7.2 Hz，H-11），6.63（1H，d，J=7.2 Hz，H-12），5.70 （1H，m，H-14），5.49（1H，d，J =9.9 Hz，H -15），3.65（3H，s，COOCH3）；13C NMR（100 MHz，acetone-d6）δ 65.7（s，C-2），59.9（t，C-3），50.3（t，C-5），37.4 （t，C-6），56.8 （s，C-7），140.4（s，C -8），121.8（d，C -9），119.1 （d，C -10），127.5（d，C-11），111.1（d，C-12），151.1（s，C-13），127.8（d，C-14），133.9（d，C-15），44.4 （d，C-16），30.4（t，C-17），34.2（t，C-18），32.3（t，C-19），36.1（s，C -20），68.1（t，C -21），174.9（s，COOCH3），51.8（q，COOCH3）。以上數據與文獻對比[22]，鑒定化合物16 為venalstonidine。

化合物17：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 7.03（1H，d，J=7.2 Hz，H-9），6.61（1H，t，J=7.2 Hz，H-10），6.94 （1H，t，J=7.2 Hz，H-11），6.63（1H，d，J=7.2 Hz，H-12），5.77 （1H，m，H-14），5.93（1H，dd，J =9.9，1.9 Hz，H -15），3.67 （3H，s，COOCH3）；13C NMR（100 MHz，acetone-d6）δ 66.5（s，C-2），49.1（t，C-3），50.0（t，C-5），45.5（t，C-6），56.0（s，C-7），139.7（s，C-8），121.6（d，C-9），119.6（d，C-10），127.0（d，C-11），111.4（d，C-12），148.8（s，C-13），127.9 （d，C-14），129.4（d，C-15），42.8（d，C-16），71.2（t，C-17），25.8（t，C-18），35.9（t，C-19），40.2（s，C-20），65.2（t，C-21），174.0（s，COOCH3），51.9（q，COOCH3）。以上數據與文獻對比[23]，鑒定化合物17 為17α-hydroxyvenalstonine。

化合物18：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 9.15（1H，s，NH），7.25（1H，d，J=7.3 Hz，H-9），6.89（1H，t，J=7.3 Hz，H-10），7.09（1H，t，J=7.3 Hz，H-11），7.00 （1H，d，J=7.3 Hz，H-12），4.18（1H，s，H-21），3.08（1H，br s，H-15），0.85（3H，d，J=6.0 Hz，H-18），3.71 （3H，s，COOCH3），2.65（3H，s，19-OCH3）；13C NMR（100 MHz，acetone-d6）δ 168.3（s，C-2），45.7（t，C-3），54.6（t，C-5），45.0（t，C-6），56.2（s，C-7），138.1（s，C-8），121.4（d，C-9），121.0（d，C-10），127.7（d，C-11），110.6（d，C-12），145.0（s，C-13），29.2（t，C-14），30.0（d，C-15），95.8（s，C-16），16.2（q，C-18），76.6（d，C-19），46.9（s，C-20），63.0（d，C-21），172.0（s，COOCH3），51.2（q，COOCH3），55.7（q，19-OCH3）。以上數據與文獻對比[24]，鑒定化合物18 為19R-me-thoxytubotaiwine。

化合物19：白色粉末。1H NMR（400 MHz，acetone-d6）δ 9.12（1H，s，NH），7.40（1H，d，J=7.3 Hz，H-9），6.86（1H，t，J=7.3 Hz，H-10），7.11（1H，t，J=7.3 Hz，H-11），7.00 （1H，d，J=7.3 Hz，H-12），3.56（1H，s，H -21），0.90 （3H，d，J =5.5 Hz，H -18），3.67（3H，s，COOCH3）；13C NMR （100 MHz，acetone-d6）δ 168.3（s，C-2），46.1（t，C-3），51.2（t，C-5），45.6（t，C-6），59.2（s，C-7），135.6（s，C-8），121.0（d，C-9），121.2（d，C-10），128.3（d，C-11），110.9（d，C-12），144.5（s，C-13），25.0（t，C-14），36.8（d，C-15），95.6（s，C-16），14.5（q，C-18），59.2（d，C-19），64.4（s，C-20），62.1（d，C-21），172.0（s，COOCH3），51.2（q，COOCH3）。以上數據與文獻對比[25]，鑒定化合物19 為kopsiyunnanines F1。

化合物20：白色粉末。1H NMR（400 MHz，methanol -d4）δ 7.52 （1H，d，J =7.8 Hz，H -9），7.09（1H，t，J=7.8 Hz，H-10），7.14 （1H，t，J=7.8 Hz，H-11），7.39（1H，t，J=7.8 Hz，H-12），5.60（1H，q，J=6.8 Hz，H -19），4.33 （2H，m，H -17），3.78 （3H，s，COOCH3），1.79（3H，d，J=6.8 Hz，H-18）；13C NMR（125 MHz，methanol-d4）δ 135.2 （s，C-2），75.7（t，C-3），64.9（t，C-5），25.1（t，C-6），109.6（s，C-7），128.2（s，C-8），118.6（d，C-9），120.4（d，C-10），123.2（d，C-11），112.5（d，C-12），136.9（s，C-13），26.9 （t，C-14），34.9（d，C-15），61.4（s，C-16），69.4（t，C-17），14.4（q，C-18），132.0（d，C-19），129.7 （s，C-20），75.7（d，C-21），174.2（s，COOCH3），53.1（q，-OCH3）。以上數據與文獻對比[26]，鑒定化合物20 為stemmadenine N-oxide。

化合物21：白色粉末。1H NMR（400 MHz，methanol-d4）δ 10.0（1H，s，N-H），7.44（1H，d，J=7.8 Hz，H-9），6.95（1H，t，J=7.8 Hz，H-10），7.03（1H，t，J=7.8 Hz，H-11），7.39（1H，t，J=7.8 Hz，H-12），5.21（1H，q，J=6.8 Hz，H-19），4.18 （2H，m，H-17），3.68（3H，s，COOCH3），3.53（1H，dd，J=12.2，3.1 Hz，），3.11（1H，d，J=15.4 Hz，H-21a），2.44（1H，d，J=15.4 Hz，H-21b），3.02（1H，m，H-6a），2.88 （1H，m，H-6b），2.99（1H，m，H-5a），2.92（1H，m，H-5b），2.71（2H，m，H-3），2.22（1H，m，H-14a），1.95 （1H，m，H-14b），1.63（3H，d，J=6.8 Hz，H-18）；13C NMR（125 MHz，methanol-d4）δ 133.8（s，C-2），55.6（t，C-3），56.0（t，C-5），27.9（t，C-6），112.9（s，C-7），127.4（s，C-8），117.6（d，C-9），118.2（d，C-10），120.6（d，C-11），111.4（d，C-12），134.9（s，C -13），29.9（t，C -14），37.3（d，C-15），60.9（s，C-16），68.0（t，C-17），13.9（q，C -18），121.8（d，C -19），136.6（s，C -20），55.6（d，C-21），172.7（s，COOCH3），51.9（q，-OCH3）。以上數據與文獻對比[26]，鑒定化合物21 為16-epi-stemmadenine。