小鼠伊文思藍(lán)尾靜脈或腹腔注射及視網(wǎng)膜鋪片技術(shù)的優(yōu)化

邢春濤,余 琦,張璐莎,李 玨,3,關(guān) 華,王 樂,李 蓉,4

0 引言

在眼科研究中,小鼠模型是廣泛應(yīng)用的實驗動物之一,常用于研究各種眼部疾病的發(fā)病機(jī)制以及新型治療方法的篩選[1-3]。然而,由于小鼠眼球較小,活體實驗很難對其進(jìn)行視網(wǎng)膜血管觀察,因此需要使用其他技術(shù)來觀察小鼠視網(wǎng)膜血管的變化。常見的小鼠視網(wǎng)膜血管觀察技術(shù)包括熒光素標(biāo)記[4-5]、光學(xué)相干斷層掃描血管造影[6-7]、熒光素血管造影[8-9]等方法,靜脈伊文思藍(lán)推注聯(lián)合視網(wǎng)膜鋪片是研究視網(wǎng)膜血管性疾病的常用技術(shù)方法[10-11]。該方法可以清楚地觀察到視網(wǎng)膜血管的走形、分布及滲漏情況[12-13],還能夠?qū)o灌注區(qū)的視網(wǎng)膜面積進(jìn)行估算[14-15],且具有成本低、易操作、高靈敏度等特點。但在視網(wǎng)膜鋪片染色過程中,由于伊文思藍(lán)注射后在體內(nèi)循環(huán)時間、小鼠眼球在4%多聚甲醛固定液中的固定時間、視網(wǎng)膜鋪片所用的時間等存在差異,加之使用的封片劑種類不同等技術(shù)問題,均會對實驗結(jié)果的分析比較產(chǎn)生影響。因此,為了獲得更好的實驗結(jié)果,本實驗中我們對上述問題進(jìn)行了比較分析,并總結(jié)了視網(wǎng)膜鋪片染色的實驗技巧,優(yōu)化了實驗方案,以期為視網(wǎng)膜血管性疾病的相關(guān)研究提供更為準(zhǔn)確、可靠的實驗技術(shù)支持。

1 材料和方法

1.1 材料C57BL/6雄性17周齡小鼠30只,購自西安交通大學(xué)實驗動物中心。所有動物實驗部分均由陜西省缺血性心血管疾病重點實驗室倫理委員會審核并批準(zhǔn)(SQXZDSYS202201)。1%伊文思藍(lán)溶液:0.3g伊文思藍(lán)(Evans blue,美國Sigma公司)溶于30mL生理鹽水中,震蕩溶解,過濾,4℃低溫避光保存,使用前取適量,且需水浴預(yù)熱至37℃?zhèn)溆谩！?br>