神經(jīng)源性絲氨酸蛋白酶抑制劑在自發(fā)性腦出血患者中的表達(dá)與作用

宮萍 錢希岷 徐黎明 吳衛(wèi)文△

(復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院青浦分院,(1.神經(jīng)內(nèi)科;(2.檢驗(yàn)科,上海 201700)

自發(fā)性腦出血是一種常見的腦卒中疾病,具有高發(fā)病率、高死亡率、高致殘率的特點(diǎn),給社會(huì)和家庭都帶來了沉重的負(fù)擔(dān)[1]。其中血腦屏障(BBB)損傷是腦出血后水腫形成的重要機(jī)制之一,而腦水腫是腦出血患者病情惡化和死亡的重要原因。因此,控制腦水腫、降低顱內(nèi)壓是腦出血治療的重點(diǎn)之一。神經(jīng)源性絲氨酸蛋白酶抑制劑(NSP)主要在中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元中表達(dá),是一種眾所周知的組織型纖溶酶原激活物(t-PA)抑制劑[2]。研究[3]發(fā)現(xiàn),外源性NSP能夠減少腦缺血后腦血管通透性的增加從而減少BBB損傷。目前關(guān)于NSP的神經(jīng)保護(hù)作用已有很多研究,但主要是在缺血性卒中、癲癇等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病,在腦出血中的作用研究較少。本研究希望通過測定ICH患者的NSP濃度,探討NSP在ICH患者中的表達(dá)及與臨床預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年11月至2021年7月我院神經(jīng)內(nèi)科住院的自發(fā)性腦出血患者65例納入腦出血組。納入標(biāo)準(zhǔn):診斷為自發(fā)性腦出血,參考中國腦出血診治指南(2019)[1];發(fā)生腦出血至入院時(shí)間<24 h;幕上出血者出血量<30 mL,幕下出血者出血量<10 mL;GCS評分≥5分;同意加入本次研究;簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn):合并其他急性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病;合并惡性腫瘤、嚴(yán)重心、肝、腎功能不全及血液系統(tǒng)疾病等;病例資料缺失。選取同期我院醫(yī)護(hù)人員及來院體檢的社區(qū)居民50例納入對照組。入組標(biāo)準(zhǔn):年齡、性別與腦出血組匹配;既往無中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病病史;簽署知情同意書。

1.2方法 血清NSP的檢測:腦出血組于入院次日,抽血時(shí)間距發(fā)病(38.6±10.7)h,對照組體檢當(dāng)日,均為清晨空腹抽取肘靜脈血3 mL,室溫血液自然凝固10～20 min,離心20 min左右(2 000～3 000 r/min),分離血清后置-20℃冰箱保存,待所有標(biāo)本收集完成后集中進(jìn)行檢測。應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中NSP水平,用純化的NSP捕獲抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被的微孔中依次加入NSP,再與辣根過氧化物(HRP)標(biāo)記的檢測抗體結(jié)合,經(jīng)過徹底洗滌后加底物四甲基聯(lián)苯胺(TMB)顯色,用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中NSP含量。

1.3觀察指標(biāo) 選擇美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表(NIHSS)評估腦出血患者病情的嚴(yán)重程度[4];選擇格拉斯哥昏迷評分(GCS)評估腦出血患者意識狀態(tài),GCS評分<15分為意識障礙[4];選擇改良Rankin量表(mRS)評估腦出血患者神經(jīng)功能恢復(fù)情況[6],將mRS≥2分者作為預(yù)后不良組,mRS<2分為預(yù)后良好組。

2 結(jié) 果

2.1一般資料情況比較 腦出血組共納入病例65例,3例因3月后失訪,最終完成研究62例,其中男38例,女24例;平均年齡(57.51±14.49)歲;有高血壓史48例,糖尿病史11例。對照組納入50例,其中男29例,女21例;平均年齡(60.82±14.18)歲;有高血壓史15例,糖尿病史6例。兩組在性別、年齡、糖尿病史方面對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),腦出血組有高血壓史占比高于對照組(P<0.001)。

2.2腦出血組與對照組NSP濃度比較 腦出血組入院次日NSP濃度為(2.57±0.47)ng/mL,對照組NSP濃度為(2.03±0.78)ng/mL。腦出血組NSP濃度明顯高于對照組(P<0.001)。

2.3腦出血組預(yù)后不同患者的臨床資料及NSP水平比較 腦出血患者發(fā)病3個(gè)月后行改良Rankin量表評分,其中預(yù)后良好組37例,預(yù)后不良組25例。兩組在性別、年齡、高血壓史、糖尿病史、首診舒張壓水平、腦出血部位(基底核區(qū)與非基底核區(qū))、腦出血是否破入腦室等方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。預(yù)后良好組在入院時(shí)NIHSS評分、是否存在意識障礙、腦出血量、首診收縮壓水平均低于預(yù)后不良組(P<0.05),預(yù)后良好組NSP濃度高于預(yù)后不良組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組預(yù)后不同腦出血患者臨床資料及NSP濃度比較

2.4自發(fā)性腦出血預(yù)后相關(guān)因素Logistic回歸分析 對腦出血組患者預(yù)后不同兩組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的指標(biāo)進(jìn)行Logistic回歸分析,結(jié)果顯示入院時(shí)NIHSS評分、腦出血量是影響自發(fā)性腦出血患者預(yù)后的獨(dú)立因素(P<0.05)。見表2。

表2 影響ICH患者預(yù)后的相關(guān)因素Logistic回歸分析

3 討 論

NSP是絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族中的一員,主要抑制t-PA、尿激酶型纖溶酶原激活劑和纖維蛋白溶酶活性,對tPA作用最強(qiáng)[7]。體外實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)現(xiàn)腦缺血后腦組織中NSP表達(dá)上調(diào),外源性給予NSP可減小缺血梗死灶體積、減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡、阻止小膠質(zhì)細(xì)胞激活、降低血腦屏障通透性減輕腦水腫,而細(xì)胞凋亡、腦水腫、血腦屏障破壞等在缺血和出血性卒中機(jī)制中存在共同之處[8-9]。臨床研究[10-11]表明,急性缺血性卒中患者血清NSP水平在入院時(shí)高表達(dá)預(yù)示較好臨床結(jié)局。W.Li等[12]在非t-PA誘導(dǎo)的腦出血小鼠中發(fā)現(xiàn)NSP在其腦組織中表達(dá)增加,在出血后48 h達(dá)高峰,血腫周圍局部注射NSP可減輕腦血腫及血腦屏障通透性,證實(shí)NSP在非t-PA誘導(dǎo)的腦出血小鼠中存在神經(jīng)保護(hù)作用,文中推測NSP可能在修復(fù)血管內(nèi)皮中發(fā)揮作用,改善腦出血時(shí)血腦屏障完整性從而緩解腦水腫。

為研究NSP在臨床腦出血患者中的表達(dá),本研究檢測62例在發(fā)病24 h內(nèi)入院的自發(fā)性腦出血患者的血清NSP水平,通過與50例健康體檢者對比,自發(fā)性腦出血患者發(fā)病后血清NSP水平明顯升高(P<0.05),與W.Li等[12]在腦出血小鼠中觀察的結(jié)果一致。進(jìn)一步研究NSP濃度與ICH患者預(yù)后的相關(guān)性,對腦出血患者在發(fā)病3個(gè)月后采用改良Rankin量表評分進(jìn)行預(yù)后評估,其中37例預(yù)后良好,25例預(yù)后不良,對兩組患者進(jìn)行臨床相關(guān)資料及NSP濃度比較,發(fā)現(xiàn)預(yù)后良好組在入院時(shí)NIHSS評分、發(fā)病時(shí)存在意識障礙、腦出血量、首診收縮壓水平等方面均較預(yù)后不良組低(P<0.05),而NSP濃度預(yù)后良好組高于預(yù)后不良組(P<0.05),提示NSP可能對腦出血患者預(yù)后有保護(hù)作用;對兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的指標(biāo)進(jìn)Logistic回歸分析,結(jié)果顯示入院時(shí)NIHSS評分、腦出血量是影響自發(fā)性腦出血患者預(yù)后的獨(dú)立因素(P<0.05),NSP濃度暫未得到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,考慮可能因樣本量過小有一定關(guān)系,需進(jìn)一步增加樣本量明確NSP與腦出血預(yù)后的相關(guān)性。

綜上所述,本研證實(shí)自發(fā)性腦出血患者發(fā)病后血清NSP水平升高,雖然回歸分析未得到NSP與自發(fā)性腦出血患者預(yù)后的顯著性關(guān)系,但預(yù)后良好組NSP水平高于預(yù)后不良組,提示可能對預(yù)后有一定保護(hù)作用,后期可進(jìn)一步增加樣本量進(jìn)行分析。NSP在自發(fā)性腦出血中的作用可以為腦出血治療提供一種可嘗試的治療思路。