微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)血型IgG抗體效價(jià)及血清C反應(yīng)蛋白、血紅蛋白在新生兒ABO溶血病早期診斷中的價(jià)值分析

陳 平,葛利麗,趙瑩瑩

(1.淮安市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,江蘇 淮安 223002;淮安市第二人民醫(yī)院血液凈化中心,江蘇 淮安 223002)

新生兒ABO溶血病(ABO hemolytic disease of the newbor,ABO-HDN)指的是因母嬰ABO血型不合引發(fā)的新生兒溶血癥狀,這種情況多發(fā)生于母親O型血,嬰兒則為A、B型血時(shí)。其具體致病機(jī)理為母體內(nèi)產(chǎn)生與胎兒血型抗原不匹配的抗體,且抗體通過胎盤進(jìn)入新生兒體內(nèi),進(jìn)而引發(fā)嬰兒免疫性溶血[1-4]。相關(guān)數(shù)據(jù)顯示,我國(guó)ABO-HDN發(fā)病概率在0.8%左右,ABO-HDN患兒以不同程度黃疸、水腫以及貧血為典型特征,對(duì)機(jī)體健康存在一定影響[5]。光照、靜脈注射免疫球蛋白等方式是減輕溶血的主要手段,部分病情嚴(yán)重患兒可能需要進(jìn)行換血治療。醫(yī)務(wù)人員建議對(duì)ABO-HDN進(jìn)行早期診治,確保患兒能夠獲得較好的預(yù)后,截至目前,ABO-HDN診斷的公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)仍需要以新生兒時(shí)期的檢查為主[6]。但部分基層醫(yī)院設(shè)備不完善,醫(yī)務(wù)人員預(yù)防意識(shí)薄弱,可能在患兒表現(xiàn)出具體癥狀后才進(jìn)行相應(yīng)檢查,容易延誤病情,對(duì)患兒身體與家庭帶來負(fù)擔(dān)[7-8]。本研究擬從母血以及臍帶血標(biāo)本出發(fā),通過對(duì)107例高風(fēng)險(xiǎn)人群母血中的免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)抗體效價(jià)以及臍血血清C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)、血紅蛋白(Hemoglobin,Hb)進(jìn)行檢測(cè),分析其在早期ABO-HDN診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性收集2020年4月至2022年4月淮安市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科收入的按時(shí)產(chǎn)檢且正常分娩的107例孕婦(O型血且與丈夫ABO血型不合)臨床資料。其中,孕婦年齡為20～40歲,平均(28.70±7.01)歲;分娩時(shí)孕周為36～41周,平均(38.34±1.70)周;產(chǎn)婦類型為經(jīng)產(chǎn)婦29例,初產(chǎn)婦78例;新生兒性別為男60例,女47例;分娩方式為順產(chǎn)61例,剖宮產(chǎn)46例。本研究符合《赫爾辛基宣言》內(nèi)容。診斷標(biāo)準(zhǔn):參照《新生兒疾病診療規(guī)范》[9]中關(guān)于ABO-HDN定義擬定診斷標(biāo)準(zhǔn),即母嬰血型不合,新生兒出生后黃疸出現(xiàn)過早且隨病情加重,出生后新生兒外周靜脈血溶血三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)為ABO-HDN。溶血三項(xiàng)試驗(yàn):于新生兒出生后3 d空腹?fàn)顟B(tài)下抽取外周靜脈血,進(jìn)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)(Direct antiglobulin test,DAT)、游離與放射試驗(yàn)以及紅細(xì)胞抗體散射試驗(yàn)。當(dāng)DAT或游離與放射試驗(yàn)單項(xiàng)陽(yáng)性時(shí)判斷為疑似HDN,需根據(jù)患兒黃疸情況以及總膽紅素確診;當(dāng)患兒DAT、游離與放射試驗(yàn)、紅細(xì)胞抗體散射試驗(yàn)均為陽(yáng)性存在2～3項(xiàng)陽(yáng)性或者紅細(xì)胞抗體散射試驗(yàn)單項(xiàng)陽(yáng)性時(shí)可確診為ABO-HDN。病例納入標(biāo)準(zhǔn):①孕期于本院按時(shí)產(chǎn)檢且在本院生產(chǎn);②母體為O型血,且存在與丈夫ABO不合情況;③分娩時(shí)孕周在36周以上(含36周);④單胎妊娠且分娩時(shí)未出現(xiàn)宮內(nèi)窘迫、窒息等;⑤完成相應(yīng)母血血型IgG抗體效價(jià)檢測(cè)以及臍血血清檢測(cè),新生兒出生后進(jìn)行三項(xiàng)溶血檢查。排除標(biāo)準(zhǔn):①新生兒除A、B、AB外其他血型,有其他同族免疫溶血;②新生兒合并其他感染疾病或存在敗血癥等血液系統(tǒng)疾病;③合并先天發(fā)育不良、先天心臟疾病、免疫功能異常等;④母體存在兩個(gè)以上性伴侶;⑤臨床資料缺失或檢查結(jié)果不清晰。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 母血血型IgG抗體效價(jià)檢測(cè):采用微柱凝膠技術(shù)在分娩前對(duì)孕晚期產(chǎn)婦進(jìn)行血清IgG抗-A(B)抗體效價(jià)檢測(cè),具體操作步驟如下:于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下取受試者靜脈血6 ml,3000 r/min離心15 min,取上層血清并加入樣本釋放劑,混合搖勻,37 ℃水浴30 min破壞血清內(nèi)免疫球蛋白M抗體,將標(biāo)本用0.9%氯化鈉溶液倍比稀釋(1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512),配置標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液加入抗人球蛋白檢測(cè)卡,將倍比稀釋后標(biāo)本加入該卡,于37 ℃孵育15 min,取出后1500 r/min離心9 min。結(jié)果≥1∶64可擬定為HDN陽(yáng)性。

1.2.2 臍血血清CRP、Hb檢測(cè):取新生兒臍帶血3 ml,3000 r/min離心10 min,選全自動(dòng)免疫及時(shí)檢測(cè)分析儀(貝克曼庫(kù)爾特有限公司,型號(hào):UniCel DxI800)以乳膠增強(qiáng)透射免疫比濁法測(cè)CRP水平,試劑盒選儀器配套;選全自動(dòng)血液分析儀(雷度米特醫(yī)療設(shè)備有限公司,型號(hào):ABL90)以比色法測(cè)Hb水平。

2 結(jié) 果

2.1 107例新生兒靜脈血溶血三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果分析 在依據(jù)納入排除規(guī)則選取的107例新生兒中,總共有50例確診為ABO-HDN,發(fā)生率為46.73%。母嬰血型為O-A型、O-B型、O-AB型的新生兒分別有49、46、12例,通過溶血三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)合臨床體征確診為ABO-HDN的分別有24例(54.55%)、22例(53.66%)、4例(23.53%)。見表1。

表1 107例新生兒靜脈血溶血三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果分析[例(%)]

2.2 兩組受試者IgG抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果比較 根據(jù)新生兒出生后3～5 d外周靜脈血溶血三項(xiàng)結(jié)果將其分為ABO-HDN組(50例)與無ABO-HDN組(57例)。兩組IgG抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,ABO-HDN組患兒IgG抗體效價(jià)≥1∶64的占比顯著高于無ABO-HDN組受試者,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組受試者IgG抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果比較[例(%)]

2.3 兩組血清CRP、Hb檢測(cè)結(jié)果比較 ABO-HDN組臍血血清CRP水平顯著高于無ABO-HDN組,Hb水平顯著低于無ABO-HDN組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組血清CRP、Hb檢測(cè)結(jié)果比較

2.4 相關(guān)指標(biāo)診斷ABO-HDN的ROC曲線分析 對(duì)IgG抗體效價(jià)檢測(cè)、血清CRP、Hb水平做ROC曲線分析可知,IgG抗體效價(jià)檢測(cè)、血清CRP、Hb水平診斷ABO-HDN的AUC為0.861、0.868、0.910,截?cái)嘀禐?.500、0.305 mg/L、127.955 g/L,見表4。

表4 相關(guān)指標(biāo)診斷ABO-HDN的ROC曲線分析

3 討 論

ABO-HDN發(fā)生于胎兒時(shí)期,由于母親與胎兒血型不合,胎兒擁有母體不具備的父源性血型抗原,當(dāng)這種抗原經(jīng)胎盤進(jìn)入母體后,母體產(chǎn)生抵抗性血型IgG抗體,這種抗體與胎兒紅細(xì)胞表面抗原結(jié)合后會(huì)被溶酶體破壞從而導(dǎo)致溶血[10]。截至目前,人類已知的400多種血型抗原中,有60多種可發(fā)生溶血反應(yīng),其中以ABO血型不合導(dǎo)致的HDN最為常見。據(jù)統(tǒng)計(jì),約有20%的新生兒有ABO血型不合的情況[11-12]。黃疸是ABO-HDN的典型病癥,與其他原因?qū)е碌狞S疸相比,ABO-HDN引發(fā)的黃疸出現(xiàn)時(shí)間早且進(jìn)展快,極易發(fā)展為高膽紅素血癥,嚴(yán)重危害新生兒健康[13-14]。臨床治療ABO-HDN方式較多,妊娠期血液抗體干預(yù)、宮內(nèi)血管內(nèi)輸血等對(duì)降低溶血風(fēng)險(xiǎn)均有一定作用,但想要最大程度地改善ABO-HDN干預(yù)效果,還需要盡可能地實(shí)現(xiàn)對(duì)該病的早期診斷。

溶血三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)是臨床應(yīng)用頻率最高且最為精準(zhǔn)的ABO-HDN診斷方案,但其多用于出生3～5 d胎兒,對(duì)部分病情進(jìn)展較快患兒而言,由于其診斷較晚,在接受人工干預(yù)前患兒可能已經(jīng)產(chǎn)生了不可逆的神經(jīng)功能損害[15]。在本研究中,溶血三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,依據(jù)納入排除規(guī)則選取的107例新生兒中,共有50例確診為ABO-HDN,發(fā)生率為46.73%。母嬰血型為O-A型、O-B型、O-AB型分別有49、46、12例,通過溶血三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)合臨床體征確診為ABO-HDN的分別有24例(54.55%)、22例(53.66%)、4例(23.53%)。本研究結(jié)果顯示,ABO-HDN組、無ABO-HDN組IgG抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,ABO-HDN組患兒IgG抗體效價(jià)≥1∶64的占比為88.00%顯著高于無ABO-HDN組受試者的15.79%。這說明IgG抗體效價(jià)與ABO-HDN有緊密聯(lián)系,原因?yàn)槟阁w受到胎兒紅細(xì)胞產(chǎn)生的外源性抗原刺激時(shí)可出現(xiàn)IgG升高,因此在多數(shù)情況下,IgG抗體效價(jià)升高意味著新生兒出現(xiàn)ABO-HDN的風(fēng)險(xiǎn)升高[16-17]。

此外,在本研究中,ABO-HDN組臍血血清CRP水平為(0.46±0.21)mg/L顯著高于無ABO-HDN組,Hb水平為(110.62±18.37)g/L顯著低于無ABO-HDN組,這說明臍血血清CRP水平與Hb水平同樣與ABO-HDN發(fā)病有一定聯(lián)系,這與劉娟等[8]研究所得結(jié)論一致。推測(cè)原因在于當(dāng)胎兒出現(xiàn)ABO-HDN時(shí),紅細(xì)胞大量、迅速被破壞,紅細(xì)胞破裂后Hb溢出至血液中,無法與合適珠蛋白結(jié)合從而變?yōu)橛坞x的Hb,此時(shí)游離的Hb無法被檢測(cè)到,因此在臍帶血中檢測(cè)的Hb水平會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)降低[18-19]。CRP作為臨床常用炎癥指標(biāo),多在機(jī)體感染、創(chuàng)傷時(shí)出現(xiàn)異常表達(dá)。目前關(guān)于CRP與ABO-HDN發(fā)病的關(guān)系尚未研究透徹,但有學(xué)者認(rèn)為,當(dāng)母體IgG抗體經(jīng)胎盤進(jìn)入胎兒血液循環(huán)時(shí),單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)開始工作,免疫與調(diào)節(jié)免疫功能被激發(fā),CRP可以出現(xiàn)快速升高[20]。

綜上所述,與無ABO-HDN新生兒相比,ABO-HDN患兒IgG抗體效價(jià)以及血清CRP、Hb存在異常表達(dá),采用微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)血型IgG抗體效價(jià)以及檢測(cè)臍血血清CRP、Hb對(duì)診斷早期ABO-HDN有一定臨床參考價(jià)值。本研究不足之處在于納入樣本較少,且來源單一,未來還需開展大樣本,多中心研究證實(shí)結(jié)論。