利伐沙班顆粒的制備及影響因素考察

陸紀宏,張 濤,林 琳,王麗春,姚建標

1.浙江金華康恩貝生物制藥有限公司,金華 321016;2.浙江康恩貝制藥股份有限公司,金華 321100

利伐沙班(rivaroxaban)[1-6]是一種具有生物利用度的凝血因子Ⅹa的選擇競爭性抑制劑,其能夠選擇性地阻斷Ⅹa因子的活性位點,且不需要輔因子(如抗凝血酶Ⅲ)參與就可以發揮作用。利伐沙班通過口服給藥,進入機體后,通過內源性及外源性途徑將Ⅹ因子活化為Ⅹa因子(FⅩa),在凝血級聯反應中發揮重要作用。其由Bayer AG和美國強生公司(Johnson)共同開發,其中美國強生公司負責美國市場,Bayer AG擁有除美國以外全球其他市場的銷售權。目前在國內上市的原研藥劑型主要為片劑,商品名為Xarelto。為了提高部分人群(如吞咽障礙者)的用藥順應性,于2015年在日本推出的原研藥——利伐沙班細粒劑(fine granules),商品名為Xarelto,規格分別為10、15 mg。2017年Bayer AG以2.2類在國家藥品監督管理局藥品評審中心(center for drug evaluation, CDE)申請國內進口注冊,目前還在審批中。目前,利伐沙班片劑一般采用濕法制粒,制得的顆粒比較緊實,在水中的溶解性差,溶出度偏低,故本研究未借鑒片劑的制粒工藝。有研究將利伐沙班過200目篩,用黏合劑先對利伐沙班原料進行制粒,再將處理過的利伐沙班顆粒與一水乳糖一起用流化床制粒[7],該工藝比較繁瑣,利伐沙班原料過篩難度大,制得的顆粒容易含量不均勻。本研究將利伐沙班原料直接溶于含十二烷基硫酸鈉的黏合劑中,用流化床制粒,將含有原料的漿液直接噴霧到水溶性的填充劑等輔料上,工藝簡單,改善了產品的流動性、溶出度、含量均勻性。以日本市售利伐沙班顆粒作為參比制劑,對自制利伐沙班顆粒的體外溶出行為進行研究,同時對自制利伐沙班顆粒和原研藥進行高溫、高濕以及光照條件影響因素考察。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Pilotlab L型流化床[博世包裝技術(杭州)有限公司];SYH-10 L型三維運動混合機(常州軒宇干燥設備有限公司);TM30-04型四列充填包裝機(江蘇僅一聯合智造有限公司);XPE105型分析天平、FE28型pH計均購自梅特勒-托利多儀器有限公司;Acquity Arc 2998PDA型高效液相色譜儀(Waters);KQ800 KDE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);SNTR-8400A型智能溶出儀(SHIMADZU Excellence in Science);UN110 Plus型自然對流烘箱(Memment);KBF115型恒溫恒濕箱、KBF720型恒溫恒濕箱、KBF-LQC240E5.2型光照箱均購自德國賓德公司(BINDER);FT2000A型顆粒和粉末特性分析儀(瑞柯儀器有限公司)。

1.2 試藥

利伐沙班原料藥、利伐沙班對照品、利伐沙班雜質對照品,質量分數≥99.8%,均為自制;原研利伐沙班顆粒(Bayer AG,商品名為Xarelto);羥丙甲纖維素E5(美國陶氏化學公司);顆粒乳糖F100(德國Meggle公司);甘露醇(廣西南寧化學制藥有限責任公司);乙腈(色譜純,默克股份兩合公司);磷酸(色譜純)、磷酸鈉(色譜純)均購自TEDIA公司;鹽酸[色譜純,賽默飛世爾科技(中國)有限公司];醋酸(色譜純)、醋酸鈉(色譜純)均購自國藥集團化學試劑有限公司;十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate,SDS,色譜純,Scharla公司)。

2 方法

2.1 溶出行為考察

按照2020年版《中華人民共和國藥典》(以下簡稱《中國藥典》)中的方法對樣品的溶出行為進行考察。取原研產品,分別以0.1 mol·L-1氯化氫(HCl)溶液、6.94 mmol·L-1SDS-pH 4.5醋酸鹽緩沖液、1.73 mmol·L-1SDS-pH 4.5醋酸鹽緩沖液、1.73 mmol·L-1SDS-pH 6.8磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer saline, PBS)、pH 4.5醋酸鹽緩沖液和pH 6.8 PBS 900 mL[7]作為溶出介質,用槳法(75 r·min-1),于5、10、15、20、30、45、60、90、120 min取樣(6.94 mmol·L-1SDS-pH 4.5醋酸鹽緩沖液介質取樣到45 min),取溶液適量,過濾,取續濾液作為供試品溶液。另精密稱取利伐沙班對照品適量,加乙腈溶解,用溶出介質溶解制成每1 mL中約含11 μg利伐沙班的溶液作為對照品溶液。用高效液相色譜法檢測利伐沙班的含量[8-10]。以十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑,以乙腈-水(40∶60)作為流動相,檢測波長為250 nm,柱溫為40 ℃,精密量取10 μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,同法測定自制產品的溶出量。用外標法以峰面積計算溶出量。

2.2 含量均勻度測定方法

取利伐沙班顆粒1袋,置于量瓶中,加溶劑[0.01 mol·L-1的磷酸溶液-乙腈(40∶60)]溶解,超聲使顆粒溶解完全,冷卻至室溫,用溶劑定容,過濾,取續濾液適量,用溶劑溶解并稀釋,制成每1 mL中約含利伐沙班0.2 mg的溶液,作為供試品溶液;另精密稱取利伐沙班對照品適量,用溶劑[0.01 mol·L-1的磷酸溶液-乙腈(40∶60)]稀釋制成每1 mL中含0.2 mg利伐沙班的溶液,作為對照品溶液。精密量取上述溶液5 μL注入液相色譜儀中,用外標法以峰面積計算含量。取原研利伐沙班顆粒用相同的方法進行含量檢測。

2.3 有關物質檢測方法

2.3.1色譜條件 C18色譜柱(4.0 mm×55 mm,3 μm);流動相:流動相A為0.01 mol·L-1的磷酸溶液,流動相B為乙腈;檢測波長:250 nm;流速:1.0 mL·min-1;進樣量:5 μL;柱溫:40 ℃。

2.3.2檢測方法 取利伐沙班顆粒細粉適量,精密稱定,加混合溶劑溶解制成每1 mL中約含利伐沙班0.5 mg的溶液,超聲,過濾,取續濾液作為供試品溶液;精密量取供試品溶液1 mL,置于100 mL量瓶中,用溶劑稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液。稱取雜質A、雜質B、雜質C、雜質D、雜質E和雜質F各適量,用供試品溶液溶解并稀釋,制成約含各雜質5 μg的溶液,作為系統適用性溶液。用高效液相色譜法《中國藥典》2020年版四部通則0512)測定[11-13]。取系統適用性溶液5 μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,各物質峰的分離度應符合要求,再精密量取對照品溶液和供試品溶液各5 μL,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖,供試品溶液的色譜圖中如有雜質峰,扣除溶劑峰后,雜質A(乘以校正因子2.8)、雜質B(乘以校正因子1.4)、雜質C(乘以校正因子1.3)、雜質D、雜質E(乘以校正因子1.4)和雜質F(乘以校正因子1.2)的峰面積均不得大于對照品溶液主峰面積的0.2倍(0.2%),其他單個未知雜質峰面積不得大于對照品溶液主峰面積的0.1倍(0.1%),各雜質峰面積經校正后的總和不得大于對照品溶液主峰面積的0.5倍(0.5%)。

3 結果

3.1 外觀和規格的選擇

原研利伐沙班顆粒的規格有2種,分別為10和15 mg。考慮到規格的增加只是包裝內容物質量的等比例增加,故選擇規格為10 mg的利伐沙班顆粒進行研究。

3.2 自制利伐沙班顆粒的處方工藝與質量

3.2.1樣品制備 稱取處方量的原料藥及輔料,將羥丙甲纖維素與十二烷基硫酸鈉溶于水中。在該溶液中加入微粉化的利伐沙班,制得混懸液[14-16]。在流化床造粒機中將該懸浮液噴到乳糖、甘露醇粉末上,制得含藥顆粒。將含藥顆粒加入多向運動混合機中,加入膠態二氧化硅與草莓香精,混合15 min,出料,用充填包裝機進行包裝。

3.2.2利伐沙班顆粒粉體學參數的考察 對原研及自制利伐沙班顆粒的松密度、振實密度、休止角、卡爾指數等粉體學指標進行檢測。結果見表1、表2。根據對原研利伐沙班顆粒的檢測結果,將自制利伐沙班顆粒的休止角暫定為25°～35°,卡爾指數暫定為12%～20%[17-18]。

表1 原研利伐沙班顆粒的粉體學檢測結果

表2 自制利伐沙班顆粒的粉體學檢測結果

3.2.3含量均勻度測定 根據2.2項下的方法,對原研利伐沙班顆粒和自制利伐沙班顆粒的含量和含量均勻度進行檢測。經檢測,原研利伐沙班顆粒含量的平均值為99.6%(3次樣品檢測結果分別為99.8%、100.2%、99.6%),含量均勻度的平均值為6.1(3次樣品檢測結果為初試6.3、初試5.8、初試6.2)。自制利伐沙班顆粒含量的平均值為100.2%(3次樣品檢測結果分別為100.2%、99.8%、100.5%),含量均勻度的平均值為5.0(3次樣品檢測結果分別為初試4.6、初試4.9、初試5.5)。自制利伐沙班顆粒的含量及含量均勻度與原研利伐沙班顆粒相當。

3.2.4原研利伐沙班顆粒的溶出行為考察 根據2.1項下的方法對原研利伐沙班顆粒的溶出行為進行考察。在0.1 mol·L-1HCl溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖液和pH 6.8 PBS中,30 min的溶出度均低于80%;在6.94 mmol·L-1SDS-pH 4.5醋酸鹽緩沖液、1.73 mmol·L-1SDS-pH 4.5醋酸鹽緩沖液、1.73 mmol·L-1SDS-pH 6.8 PBS中,30 min的溶出度均在80%以上。結果見圖1。

圖1 原研利伐沙班顆粒在不同溶出介質中的溶出曲線

3.2.5原研利伐沙班顆粒與自制利伐沙班顆粒在不同溶出介質中的溶出曲線比較 根據2.1項下的方法,比較原研利伐沙班顆粒和自制利伐沙班顆粒在不同介質中的溶出曲線,結果見圖2。原研利伐沙班顆粒和自制利伐沙班顆粒溶出曲線相似因子f2值結果見表3。

注:A.0.1 mol·L-1 HCl溶液;B.6.94 mmol·L-1 SDS-pH 4.5醋酸鹽緩沖液;C.1.73 mmol·L-1 SDS-pH 4.5醋酸鹽緩沖液;D.1.73 mmol·L-1 SDS-pH 6.8 PBS;E.pH 4.5醋酸鹽緩沖液;F.pH 6.8 PBS。

表3 自制利伐沙班顆粒與原研利伐沙班顆粒的溶出曲線相似因子f2值

溶出曲線是評價口服固體制劑質量的重要依據,對原研利伐沙班顆粒和自制利伐沙班顆粒溶出曲線進行比較,2種制劑在各溶出介質中,溶出行為的相似因子f2均大于50,表明二者在0.1 mol·L-1HCl溶液、6.94 mmol·L-1SDS-pH 4.5醋酸鹽緩沖液、1.73 mmol·L-1SDS-pH 4.5醋酸鹽緩沖液、1.73 mmol·L-1SDS-pH 6.8 PBS、pH 4.5醋酸鹽緩沖液和pH 6.8 PBS中的溶出行為基本一致。

3.3 原研利伐沙班顆粒和自制利伐沙班顆粒的影響因素考察

3.3.1高溫實驗 稱取利伐沙班原研顆粒和自制顆粒置于稱量瓶中,保存于40、60 ℃條件下,分別于0、5、10 d取樣,對樣品溶出度、含量及有關物質進行考察[19-21],結果見表4。由表4可見,在高溫條件下,自制利伐沙班顆粒的含量和溶出度均合格,有關物質無顯著變化,與原研利伐沙班顆粒相當。

表4 高溫實驗的結果

3.3.2高濕實驗 稱取利伐沙班原研顆粒和自制顆粒置于稱量瓶中,保存于濕度分別為75%、92.5%條件下,分別于0、5、10 d取樣,對樣品含量、溶出度及有關物質進行考察,結果見表5。

表5 高濕實驗的結果

由表5可見,在高濕條件下,自制利伐沙班顆粒的含量和溶出度均合格,有關物質無顯著變化,與原研利伐沙班顆粒相當。

3.3.3光照實驗 稱取原研利伐沙班顆粒和自制利伐沙班顆粒置于稱量瓶中,保存于(4 500±500) lx條件下,分別于0、5、10 d取樣,對樣品含量、溶出度及有關物質進行考察,結果見表6。

表6 光照穩定性實驗的結果

由表6可見,在光照條件下,自制利伐沙班顆粒的含量和溶出度均合格,有關物質無顯著變化,與原研利伐沙班顆粒相當。

4 討論

利伐沙班是難溶性藥物,而利伐沙班顆粒又是小規格制劑,單劑含量稍有變化將影響用藥的安全性,因此制備利伐沙班顆粒的關鍵問題是解決顆粒的流動性及含量的均勻度問題。采用流化床制粒,將利伐沙班分散到含有SDS的溶液中制成混懸液,噴霧到乳糖、甘露醇等載體上,既解決了含量的均勻性問題,又解決了顆粒的流動性及溶出度等問題。用該工藝制備的顆粒流動性、含量均勻度及溶出度均良好。同時影響因素實驗結果表明,與原研利伐沙班顆粒相比,自制利伐沙班顆粒在高溫、高濕、光照條件下的含量、溶出度、有關物質均無顯著變化,性質穩定。