對(duì)比分析不同免疫檢驗(yàn)方法檢測(cè)乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的效果

寧云云

（徐州市睢寧縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 徐州 221200）

乙型病毒性肝炎（乙型肝炎）在臨床上具有較高的發(fā)病率。患者發(fā)病后可出現(xiàn)黃疸、消化道癥狀、肝區(qū)疼痛、肝脾腫大及肝纖維化等臨床表現(xiàn)，少數(shù)患者還會(huì)出現(xiàn)發(fā)熱癥狀。乙型肝炎久治不愈可導(dǎo)致患者病情惡化，進(jìn)展為重型肝炎、肝硬化或肝癌，嚴(yán)重威脅患者的生命安全[1]。在乙型肝炎發(fā)病的早確給予明確診斷并及早治療，可阻止疾病的進(jìn)展，改善患者的預(yù)后。鑒于乙型肝炎病毒（乙肝病毒）具有較強(qiáng)的變異性，加之感染后早期癥狀缺乏特異性，容易被忽略，因此第一時(shí)間檢出受檢者是否感染乙肝病毒意義重大[2]。乙肝病毒目前的臨床檢測(cè)技術(shù)有酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）、電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)（Electrical chemiluminescent immunoassay，ECLIA）等，二者在臨床上均有較高的使用率，但現(xiàn)階段臨床缺乏這兩種檢驗(yàn)技術(shù)效能的對(duì)比，在優(yōu)先選擇檢驗(yàn)方案上仍有較多爭(zhēng)議。基于此，本次研究將2018 年9 月至2021 年9 月徐州市睢寧縣人民醫(yī)院接診的疑似乙型肝炎患者86 例作為研究對(duì)象，對(duì)比分析ECLIA、ELISA 在檢測(cè)乙肝病毒感染血清標(biāo)志物中的應(yīng)用效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年9 月至2021 年9 月于徐州市睢寧縣人民醫(yī)院就診的疑似乙型肝炎患者86 例作為研究對(duì)象。其中男44 例，女42 例；年齡22 ～68 歲，平均年齡（46.93±5.74）歲；體重43 ～77 kg，平均體重（51.23±5.73）kg。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均表現(xiàn)為肝臟腫大、腹水、惡心、肝區(qū)疼痛等；患者及其家屬對(duì)研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病者；存在精神、認(rèn)知異常者；合并其他肝病者；處于特殊生理階段（如哺乳者或妊娠期）者。

1.3 方法

1.3.1 ELISA 采集患者清晨空腹?fàn)顟B(tài)下的肘靜脈血5 mL，進(jìn)行離心處理（轉(zhuǎn)速為3000 r/min，時(shí)間為10 min），分離出血清。取酶免疫吸附測(cè)試試劑，放置在室溫環(huán)境中，等待30 min 后將血清滴入試劑的微孔反應(yīng)條中進(jìn)行封閉，然后在恒溫水浴箱中放置1 h，將反應(yīng)條取下，同時(shí)將條帶上的液體清除干凈，注意需要反復(fù)清洗5 遍，之后再次放回水浴箱中，等待30 min，取出并滴入終止液，使用酶標(biāo)儀讀取檢測(cè)結(jié)果。

1.3.2 ECLIA 采集患者清晨空腹?fàn)顟B(tài)下的肘靜脈血5 mL，進(jìn)行離心處理（轉(zhuǎn)速為3000 r/min，時(shí)間為10 min），分離出血清。將血清置入聚苯乙烯試管當(dāng)中，以100 μL 的辣根過氧化酶實(shí)施抗體標(biāo)記，再將其置于恒溫環(huán)境中，保存2 h 后重復(fù)沖洗（以磷酸鹽緩沖鹽水為緩沖液）3 次，隨后加入0.1 mol/L 氫氧化鈉與30 mol/L 魯米諾，放置10 min 左右，在雅培i2000 化學(xué)發(fā)光分析儀中進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)。

1.4 觀察指標(biāo)

以實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time Quantitative PCR，RQ-PCR）的檢測(cè)結(jié)果為“金標(biāo)準(zhǔn)”，比較ECLIA、ELISA 診斷乙肝病毒感染的效能，包括診斷的準(zhǔn)確性、靈敏度、特異度。比較ECLIA、ELISA 對(duì)乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的陽(yáng)性檢出情況，血清標(biāo)志物包括乙型肝炎病毒核心抗體（Hepatitis B virus core Antibody，HBcAb）、乙型肝炎病毒表面抗體（Hepatitis B virus surface Antibody，HBsAb）、乙 型肝炎病毒表面抗原（Hepatitis B virus surface antigen，HBsAg）、乙型肝炎病毒e 抗體（Hepatitis B virus e Antibody，HBeAb）及乙型肝炎病毒e 抗原（Hepatitis B virus e antigen，HBeAg）。各指標(biāo)在不同檢測(cè)方法中的陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：（1）ECLIA：以臨界值指數(shù)（Cut off index，COI）為參照，若HBsAg、HBeAg的COI ≥1.0，則表示為陽(yáng)性；若HBeAb、HBcAb的COI ＜1.0，則表示為陽(yáng)性；若HBsAb 水平≥10 IU/L，則表示為陽(yáng)性。（2）ELISA：以COI 為參照，若HBsAg、HBeAg、HBsAb 三項(xiàng)指標(biāo)的COI ≥1.0，則表示為陽(yáng)性；若HBeAb、HBcAb 兩項(xiàng)指標(biāo)的COI ＜1.0，則表示為陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以%表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ECLIA、ELISA 診斷乙肝病毒感染的效能

對(duì)86 例患者進(jìn)行RQ-PCR 檢測(cè)的結(jié)果顯示，其中乙肝病毒陽(yáng)性患者75 例，陰性患者11 例；對(duì)86例患者進(jìn)行ECLIA 檢測(cè)的結(jié)果顯示，其中乙肝病毒陽(yáng)性患者73 例，陰性患者13 例；對(duì)86 例患者進(jìn)行ELISA 檢測(cè)的結(jié)果顯示，其中乙肝病毒陽(yáng)性患者67 例，陰性患者19 例。詳見表1。ECLIA、ELISA 診斷乙肝病毒感染的準(zhǔn)確性、靈敏度、特異度相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表2。

表1 乙肝病毒的陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果

表2 ECLIA、ELISA 診斷乙肝病毒感染準(zhǔn)確性、靈敏度、特異度的對(duì)比[例（%）]

2.2 ECLIA、ELISA 對(duì)乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的陽(yáng)性檢出情況

ECLIA、ELISA 在HBsAb、HBcAb 的 陽(yáng) 性 檢出率方面相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；ECLIA 對(duì)HBsAg、HBeAb、HBeAg 的 陽(yáng) 性 檢 出 率分 別 為82.67%、38.67%、40.00%，均 高 于ELISA的68.00%、18.67%、21.33%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.341、7.335、6.145，P均＜0.05）。詳見表3。

表3 ECLIA、ELISA 對(duì)乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的陽(yáng)性檢出情況[例（%）]（n=75）

3 討論

乙型肝炎是一種傳染性較強(qiáng)的疾病，由乙肝病毒感染所致。乙型肝炎如不及時(shí)診治，會(huì)導(dǎo)致肝臟出現(xiàn)嚴(yán)重病變，極大危害患者的生命健康。對(duì)乙肝病毒感染人群進(jìn)行血清標(biāo)志物檢測(cè)，是當(dāng)前臨床篩查乙型肝炎的常用手段[3]。例如，當(dāng)患者的血清HBsAg 呈陽(yáng)性時(shí)，表明其機(jī)體已經(jīng)感染了乙肝病毒，因?yàn)槿梭w在感染乙肝病毒后會(huì)產(chǎn)生一定量的抗-HBs 抗體，該抗體可以在機(jī)體感染乙肝病毒后啟動(dòng)自我保護(hù)功能，因此當(dāng)該指標(biāo)呈陽(yáng)性時(shí)，表示機(jī)體出現(xiàn)了免疫反應(yīng)。另外，當(dāng)人體感染乙肝病毒后，肝細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生HBeAg，當(dāng)該指標(biāo)呈陽(yáng)性時(shí)，說明患者的病情已經(jīng)發(fā)展至病毒復(fù)制活躍的階段，該階段乙肝病毒的傳染性極強(qiáng)[4]。HBsAg 是乙肝病毒的外殼蛋白，雖不具傳染性，但該指標(biāo)呈陽(yáng)性是機(jī)體感染乙肝病毒的重要標(biāo)志之一。HBcAb 是一種免疫球蛋白，由乙肝核心抗原刺激肝細(xì)胞產(chǎn)生，不會(huì)對(duì)人體起到保護(hù)作用，該指標(biāo)主要反映的是人體內(nèi)乙肝病毒的活動(dòng)情況，HBcAb 水平越高，說明病毒的傳染性越強(qiáng)，該指標(biāo)可以長(zhǎng)期甚至終生保持陽(yáng)性。綜上，通過檢測(cè)乙肝病毒血清標(biāo)志物，可以實(shí)現(xiàn)在乙型肝炎的早期診斷，為后續(xù)治療提供科學(xué)依據(jù)。從當(dāng)前臨床常用的乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)方法來看，ELISA、ECLIA 的使用率最高，已在臨床上得到推廣。大量研究指出，ECLIA 不僅擴(kuò)大了臨床檢驗(yàn)的適用范圍，還優(yōu)化了操作步驟，且重復(fù)性較好，反應(yīng)時(shí)間短，可以在較短的時(shí)間內(nèi)獲得結(jié)果，被臨床廣泛認(rèn)可[5]。患者在感染乙肝病毒的早期，血液中可檢出HBsAg，此時(shí)臨床通常優(yōu)先使用ECLIA 進(jìn)行HBsAg 檢驗(yàn)[6]。ELISA 用于乙肝病毒血清學(xué)檢驗(yàn)的原理是利用抗體與抗原存在的特異性，當(dāng)待測(cè)血清與酶結(jié)合時(shí)會(huì)產(chǎn)生特異性反應(yīng)，最后完成目標(biāo)檢測(cè)，其具體原理如下：（1）患者血清中的抗原或抗體可以與酶產(chǎn)生連接，形成具有較好免疫活性和較高活力的酶標(biāo)抗原和抗體。（2）當(dāng)患者體內(nèi)產(chǎn)生抗原和抗體時(shí)，可與特定的固相載體黏附，保證了其活性，且不會(huì)被輕易破壞。ELISA 的檢測(cè)速度較快且檢測(cè)成本低，故其在既往的臨床病毒檢測(cè)中得到了廣泛應(yīng)用，并且有較高的安全性，不會(huì)破壞環(huán)境及造成機(jī)體損傷。但從整體上來看，ELISA 的靈敏度要比ECLIA 差一些，在臨床檢驗(yàn)中漏診或假陽(yáng)性的問題時(shí)有發(fā)生[7]。ECLIA作為一種新型的檢驗(yàn)技術(shù)，充分結(jié)合了電化學(xué)發(fā)光和免疫檢驗(yàn)兩種檢驗(yàn)方式的優(yōu)勢(shì)，并借助電化學(xué)發(fā)光劑來標(biāo)記受檢者體內(nèi)的抗體，然后經(jīng)分離技術(shù)精準(zhǔn)分離抗原與抗體，對(duì)于乙型肝炎具有較高的檢出率[8]。另外，ECLIA 的特點(diǎn)在于重復(fù)性較好，通過有效利用電磁鐵效應(yīng)來實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化檢驗(yàn)操作，不僅可以減少人為操作產(chǎn)生的誤差，提高檢測(cè)的精確度，還可以避免出現(xiàn)標(biāo)本處理不當(dāng)?shù)那闆r，預(yù)防標(biāo)本溶血或污染對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，在準(zhǔn)確檢測(cè)血清學(xué)相關(guān)指標(biāo)的陽(yáng)性反應(yīng)中有較高的應(yīng)用價(jià)值[9]。本研究對(duì)比分析了ECLIA、ELISA 在檢測(cè)乙肝病毒感染血清標(biāo)志物中的應(yīng)用效果，結(jié)果顯示，ECLIA、ELISA 診斷乙肝病毒感染的準(zhǔn)確性、靈敏度、特異度相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；ECLIA、ELISA 在HBsAb、HBcAb 的陽(yáng)性檢出率方面相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；ECLIA 對(duì)HBsAg、HBeAb、HBeAg 的 陽(yáng) 性 檢 出 率分 別 為82.67%、38.67%、40.00%，均 高 于ELISA的68.00%、18.67%、21.33%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.341、7.335、6.145，P均＜0.05）。在常楠[10]的研究中，疑似乙肝病毒感染患者采用ECLIA 檢測(cè)HBsAg、HBeAb、HBeAg 三項(xiàng)血清標(biāo)志物，陽(yáng)性檢出率分別為97.87%、44.68%、55.33%，明顯高于ELISA檢 測(cè) 的80.00%、22.22%、28.89%（P＜0.05），但ECLIA 與ELISA 對(duì)HBsAb、HBcAb 兩項(xiàng)血清標(biāo)志物的陽(yáng)性檢出率對(duì)比無顯著差異（P＞0.05），這與本研究結(jié)果相一致。由此可見，ECLIA 在乙肝病毒感染血清標(biāo)志物檢測(cè)中的應(yīng)用效果優(yōu)于ELISA。本研究的局限性在于納入的樣本量較小，可能因個(gè)體差異對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生影響，在今后的工作中將繼續(xù)收集更多的患者資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，為乙型肝炎的準(zhǔn)確診斷提供參考。

綜上所述，在HBsAg、HBeAb、HBeAg 的陽(yáng)性檢出方面，ECLIA 優(yōu)于ELISA，因此，對(duì)于疑似乙型肝炎的患者可優(yōu)先選擇ECLIA 進(jìn)行血清學(xué)檢驗(yàn)，有利于診斷患者的病情，為后續(xù)盡早展開治療提供科學(xué)依據(jù)，值得推廣。