酶聯免疫吸附法與金標快速檢測板法檢測乙肝五項血清標志物的價值

吳園

萬載縣人民醫院 （江西宜春 336000）

乙肝是由乙肝病毒引起的以肝臟病變為主的一種傳染病，具有較高的傳染性[1]。該病呈進行性加重，若不及時采取干預措施，病情可逐步惡化，發展為肝硬化、重型肝炎、肝癌等，對患者生命安全造成極大威脅[2]。但大多數乙肝患者初期并無明顯癥狀，因此，快速、準確的診斷尤為重要。乙肝五項血清標志物是發現乙肝病毒感染的最直接手段。現階段，酶聯免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）和金標快速檢測板法是乙肝五項常用的檢測手段，前者因靈敏度及特異度高被廣泛應用，后者具有快捷、簡便、無需使用特殊儀器的優點，上述方法均具有一定優勢，但采用何種方法準確度更高尚存在爭議[3]。鑒于此，本研究比較ELISA 與金標快速檢測板法檢測乙肝五項血清標志物對乙肝的診斷價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020 年1 月至2022 年6 月我院收治的68 例確診乙肝患者作為研究對象。男36 例，女32 例；年齡25～50 歲，平均（36.05±5.01）歲；文化程度，初中及以下15 例，高中或中專37 例，大專及以上16 例；體質量指數20.15～27.48 kg/m2，平均（23.52±1.10）kg/m2。本研究經醫院醫學倫理委員會批準（審批號：20191205001）。

納入標準：伴食欲不振、全身乏力、肝區疼痛等癥狀；臨床資料齊全；均已簽署研究知情同意書。排除標準：合并血液系統嚴重疾病；既往有肝臟手術史；合并肝臟其他病變；急慢性感染；合并惡性腫瘤、精神異常；妊娠期或哺乳期。

1.2 方法

采集所有參檢者3 ml空腹靜脈血，以4 000 r/min離心5 min，取上清液，置于-20 ℃下保存待測。所有參檢者均行ELISA、金標快速檢測板法檢測乙肝五項，即乙肝表面抗體（hepatitis B surface antibody，HBsAb）、乙 肝e 抗 體（hepatitis B e antibody，HBeAb）、乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）、乙肝e 抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）、乙肝核心抗體（hepatitis B core antibody，HBcAb）。采用中山生物工程有限公司生產的ELISA 試劑盒檢測HBcAb、HBeAb 樣本在450 nm 波長下的吸光度（optical density，OD ）值，計算樣本吸光度值比臨界值（sample 的OD 值/cut off，S/CO）≥陰性對照孔均值×0.5 為陰性結果，否則為陽性結果；檢測HBsAg、HBsAb、HBeAg 樣本在450 nm 波長下的OD 值，計算樣本吸光度值比/臨界值（sample 的OD 值/cut off，S/CO）≥陰性對照孔均值×2.1 為陽性結果，否則為陰性結果。金標快速檢測板法所使用的乙肝五項檢查卡購自英科創新（廈門）科技有限公司，在加樣區加入樣本，15 min 后觀察顏色變化，若質控區出現紫紅色條帶，則測試有效，否則須重新測試。HBsAg、HBeAg、HBsAb 檢測中，測試區若出現紫紅色條帶，則為陽性；HBcAb、HBeAb 檢測中，測試區若未出現紫紅色條帶，則為陽性。

1.3 觀察指標

比較兩種檢測方法對乙肝五項血清標志物的陽性檢出率及對乙肝的診斷準確度。

1.4 統計學處理

采用SPSS 22.0 統計軟件分析數據。計數資料以率表示，采用χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種檢測方法對乙肝五項血清標志物的陽性檢出率比較

兩種檢測方法對HBsAg、HBeAg 的陽性檢出率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；ELISA 檢測對HBsAb、HBeAb、HBcAb 的陽性檢出率高于金標快速檢測板法，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩種檢測方法對乙肝五項血清標志物的陽性檢出率比較[例（%）]

2.2 兩種檢測方法對乙肝的診斷準確度比較

ELISA 診斷乙肝的準確度為88.24%（60/68），高于金標快速檢測板法的73.53%（50/68），差異有統計學意義（χ2=4.755，P=0.029）。

3 討論

我國乙肝患者與乙肝病毒攜帶者數量較多，人群感染率較高，現已成為影響我國公共衛生安全的重大疾病，且其病情復雜，早期癥狀不明顯，易延誤最佳治療時機，造成病情加重，對患者生命安全造成極大威脅[4-5]。因此，早期對其診斷至關重要。乙肝五項檢測為早期發現乙肝的重要途徑，因此，行之有效的檢驗方法對疾病早期預防與控制具有十分重要的作用。

ELISA 與金標快速檢測板法是當前檢測乙肝五項血清標志物的主要手段。ELISA 具有較高的靈敏度和特異度，且重復性好[6]。金標快速檢測板法以膠體金作為標記物，采用免疫層析技術檢測抗原或抗體。本研究結果顯示，ELISA 法對HBsAb、HBeAb、HBcAb 的陽性檢出率高于金標快速檢測板法，ELISA 診斷乙肝的準確度高于金標快速檢測板法，差異有統計學意義（P＜0.05），說明使用ELISA 檢測乙肝五項血清標志物結果更可靠。金標快速檢測板法檢測中顯色往往需要較高濃度的標志物，且直徑較大的金顆粒才能獲得較高靈敏度，故其應用具有一定限制。同時此檢測方法使用了競爭抑制法，標本陽性時測試區無條帶出現，若標本中HBsAb、HBcAb、HBeAb 濃度較低，則可能導致測試區出現顏色比質控區稍淺的色帶，肉眼難以對其進行分辨，進而出現漏診[7-8]。ELISA 應用雙抗體夾心法和雙抗原夾心法進行檢測，采用二步法可降低“鉤狀效應”的影響，使陽性檢出率明顯升高[9-10]。臨床標本檢測中發現，對于ELISA 檢測HBsAb 顯色淺的標本，若使用金標快速檢測板法復檢，往往在限定時間內無法判斷出結果，故針對此情況不宜采用金標快速檢測板法[11-12]。本研究結果還顯示，兩種檢測方法對HBsAg、HBeAg 的陽性檢出率比較，差異無統計學意義（P＞0.05），說明ELISA 與金標快速檢測板法檢測HBsAg、HBeAg 的陽性檢出率相當。金標快速檢測板法操作方法簡單，不需要特殊儀器，對實驗人員及實驗室條件要求較低，且試劑穩定性好，保存方便[13-14]。金標快速檢測板法適用于急診標本及獻血前的快速篩查，也可用于健康體檢或流行病學的調查，對保護醫護人員安全及預防感染具有重要的作用，但其僅可作為醫護人員預防乙型肝炎病毒感染的手段，不可作為診斷結果。若想要明確診斷，應結合ELISA 復查。金標快速檢測板法成本更高，不適用于對準確性要求較高的診斷，故其應用具有一定局限性。在現階段臨床實驗中，ELISA 能夠很好地符合檢測要求，檢測準確性度較高。值得注意的是，ELISA 檢測時需對樣本進行稀釋，標本量應嚴格按照使用說明添加，避免結果出現假陰性，最大限度提高診斷準確度[15]。

綜上所述，ELISA 法對乙肝五項血清標志物中HBsAb、HBeAb、HBcAb 的陽性檢出率高于金標快速檢測板法，且對乙肝具有較高的診斷準確度，為臨床治療方案、判斷治療結果、評估預后提供科學依據。