微柱凝膠免疫檢測技術在臨床血型鑒定與輸血中的應用分析

范雪明 林建 李麗紅

輸血治療是目前臨床治療中的常用方法，在大出血、剖宮產、出血性休克等患者中應用較多，但輸血前需進行血型鑒定和交叉配血試驗，才能保證輸血質量的安全性[1]。血型鑒定與交叉配血試驗，可快速篩查出相同血型的人群，交叉配血能夠預防血型不同導致的相互排斥現象。在傳統輸血治療前，一般采用抗人球配血檢驗，進而篩查出不完全抗體，但這種方法操作復雜性高，容易出現假陰性情況[2]。因此臨床急需探索一種新型的交叉配血及血型鑒定技術，提高不完全抗體檢出率及交叉配血成功率。微柱凝膠檢驗技術是目前臨床輸血前的常用技術，可同時輔助檢驗血型和交叉配血，均以抗人球蛋白為基礎展開檢驗，檢驗精確性較高，因此受到臨床醫師的歡迎。也有報道提示在血型鑒定和交叉配血過程中，需輔助應用聚凝胺法、鹽水試管法等，可有效提升血型鑒定準確性和交叉配血成功率[3]。聚凝胺法可中和紅細胞表面負電荷，縮短細胞間距，形成可逆性的紅細胞凝聚現象，此方法可離心查看結果，為輸血提供安全保障，集操作簡便、快速等優點于一身。鹽水試管法操作簡便，但只能檢出不配合的完全抗體。為進一步分析微柱凝膠檢驗技術的臨床應用價值，本研究以2021年1月—2022年6月龍巖市第二醫院輸血科收治的60 例患者為對象，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究以2021年1月—2022年6月龍巖市第二醫院輸血科收治的60 例患者為對象，男性36 例，女性24 例；年齡19 ～62 歲，平均（42.50±3.26）歲；病程1 ～12 個月，平均（6.50±0.50）個月；體質量52 ～80 kg，平均（60.50±1.25）kg；身體質量指數（body mass index，BMI）18 ～28 kg/m2，平均（22.50±1.50）kg/m2；血型：A 型15 例，B 型20 例，AB 型20 例，O 型5 例。所有患者均采集靜脈血進行微柱凝膠檢驗，資料齊全，可進行后續分析。研究經醫院倫理委員會批準。

納入標準：（1）患者知情同意。（2）精神狀態正常，可配合醫護工作的患者。（3）近期未服用藥物的患者。（4）無先天性疾病的患者。（5）嚴重貧血、失血性休克，需輸血治療的患者。

排除標準：（1）合并肝腎功能不全的患者。（2）無法配合長期隨訪的患者。（3）輸注其他血液制品。（4）溝通障礙的患者。

1.2 方法

血型鑒定：（1）微柱凝膠檢驗技術：取患者靜脈血3 mL，采用全自動生化分析儀（濟南愛來寶醫療科技公司，BK600）進行高速離心處理，分離血漿、紅細胞。室溫保存血型鑒定卡，制作5% 紅細胞懸液，懸液制作完成后取10 μL 倒入微孔管進行正定型處理；反定型處理：準備10 μL 5%濃度A 型標準紅細胞、B 型標準紅細胞，與50 μL 血漿共同加入微孔板，離心處理后快速讀取結果。（2）鹽水試管法：所有血液樣本離心處理，參照相應的國家標準進行血型鑒定。正定型處理：將2滴抗血清滴入5% 的紅細胞懸液中，完全搖勻后高速離心處理15 s，設置轉速3 000 r/min，處理完成后觀察并記錄結果。反定型處理：抽取2 滴血液樣本血清，加入1 滴紅細胞混懸液到血清中，完全搖勻后高速離心處理15 s，設置轉速3 000 r/min，處理完成后觀察并記錄結果。設置陰性對照管，排除冷凝集。

交叉配血：（1）微柱凝膠檢驗技術：高速離心處理后分離血液樣本的血漿、紅細胞。血型鑒定卡靜置一段時間達到室溫，制備紅細胞懸液（北京市斑珀斯技貿有限責任公司，血型分析用稀釋液 DG Gel Sol，國械備20160416號），標記微柱孔主次。主側孔試劑：供血者紅細胞懸液（50 μL，1%）+血漿25 μL，均從供血者血液樣本中提??；次測孔：受血者紅細胞懸液（50 μL，1%）+供血者血漿25 μL，均從受血者血液樣本中提取。高速離心處理后，讀取并記錄結果。（2）聚凝胺檢驗：A 管：受血者血漿2滴，供血者紅細胞鹽水懸液1 滴（3%）；B 管：供血者血漿2 滴+受血者紅細胞鹽水懸液1 滴（3%）。分別在受血者、供血者樣本中加入0.8 mL 的低離子介質，充分混合均勻后放置2 min；分別在2 份混合液中加入1 滴凝聚胺，高速離心處理15 s，設置3 000 r/min 轉速，倒出上清液后扣搖，可肉眼見到凝集狀提示處理成功，在管底加1 滴重懸液，輕輕搖勻后，判定檢測結果。判斷標準：凝塊在1 min 內消失，提示陰性，否則為陽性。

1.3 觀察指標

（1）記錄微柱凝膠法、鹽水試管法的檢測結果，包括正反定型不符合率和正反定型符合率。

（2）記錄交叉配血成功率。

（3）統計兩種血型鑒定結果的陽性檢出率。

（4）計算不同血清鑒定方法的靈敏度、特異度、準確率、陽性預測值、陰性預測值。

1.4 統計學方法

數據錄入采用Excel 表格，利用SPSS 24.0 統計學軟件對數據進行處理。計量資料以（±s）表示，符合正態分布的計量資料采用t檢驗，不符合正態分布的計量資料，轉化為正態分布后，采用t檢驗；計數資料以n（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，多組或不符合兩組檢驗標準的數據，采用校正χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血型鑒定結果分析

兩種方法鑒定血型結果相比，正反定型符合率差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 血型鑒定結果分析[例（%）]

2.2 交叉配血成功率

兩種方法的交叉配血成功率相比，微柱凝膠法較高（P＜0.05）。見表2。

表2 交叉配血成功率[例（%）]

2.3 檢驗結果分析

鹽水試管法、微柱凝膠法檢驗結果顯示，微柱凝膠法的靈敏度、特異度、準確度均較高（P＜0.05）；微柱凝膠法陽性預測值和陰性預測值（100%、90.91%）均高于鹽水試管法（81.63%、9.09%）（P＜0.05）。見表3 ～表4。

表3 檢驗結果分析[例（%）]

表4 靈敏度、特異度及準確度比較（%）

3 討論

輸血治療是急救治療中的常用方法，能夠快速提升患者血容量，維持機體正常血液循環，避免機體血液流失過多，進而出現休克、昏迷、缺氧等癥狀。但輸血需要保證供血者和受血者的血型相同，否則血型不符會導致輸血排斥[4]。血型鑒定和交叉配血試驗，是輸血治療前必須進行的準備工作，能夠有效提升輸血效率。

鹽水試管法是傳統的血型鑒定方法，也是最早最簡單的鑒定方法，紅細胞懸浮于鹽水介質中，能夠和相應抗體分子快速結合，形成凝集狀，肉眼可見。1 min 內凝集狀是否消散，是主要的鑒別標準。完全抗體用鹽水試管法檢驗，具有較高的準確性，用于血型初次鑒定，不要求較高的儀器精準度，能夠保證一定的檢測準確度。但鹽水試管法也有缺陷性，儀器無法檢測大量血液標本，需要手工進行復雜操作，自動化程度低且無法保證檢驗結果的準確性，容易出現假凝集現象[5]。為降低假凝集發生率，必須保證試管清洗干凈，時刻核查血清是否漏加，嚴格按照先后順序加入血清和紅細胞懸液，且整個檢測過程需在光線充足環境下進行。鹽水試管法離心處理必須保證轉速和離心時間，檢測后立即觀察并記錄結果，避免長時間放置導致檢驗結果準確性下降。但實際操作過程中，很難避免某些影響檢測結果的因素，如加錯試劑、順序錯誤等，都會導致鑒定結果錯誤[6]。

本研究用60 例患者作為研究對象，分析微柱凝膠檢驗技術在血型鑒定和輸血中的應用價值。研究結果顯示，微柱凝膠法和鹽水試管法鑒定血型結果相比，正反定型符合率差異不大；與聚凝胺法相比，微柱凝膠法的交叉配血成功率顯著提高（P＜0.05）。提示微柱凝膠法能夠準確檢測血液中的不規則抗體，可有效提升交叉配血的成功率?；颊邔ρ丸b定和交叉配血的結果都比較滿意，微柱凝膠法在血型鑒定和交叉配血中都有應用，可見其在提高檢驗準確率中起到關鍵性作用。

微柱凝膠法目前在臨床中的應用相當廣泛，輔助完成血型鑒定、交叉配血試驗的同時，快速協助醫生進行輸血治療，臨床療效顯著。微柱凝膠法可快速檢出血液中的不規則抗體，有利于提升交叉配血的精確性[7]。高速離心處理過程中，凝膠顆粒濾網配合分子抗阻層析原理，迫使紅細胞在膠表面或膠中大量聚集（這類紅細胞能夠與抗體發生反應），而在膠尖底位置的紅細胞，不與抗體相互反應[8]。經過長期臨床實踐證實，微柱凝膠法使用的檢測試劑量少，且操作簡便，能夠快速得到結果，檢驗人員容易判讀檢驗結果。整個檢驗過程基本為儀器操作，大幅降低主觀因素對檢驗結果的影響，反應結果圖譜穩定，保存方便，因此可推薦在臨床上應用[9]。此外，微柱凝膠檢驗還具有以下優勢：結果清晰、穩定、易于判讀，檢測結果可拍照存盤以備查找；實驗步驟標準化，自動化程度高；靈敏度高，特異性強，重復性好；結合條形碼技術上機檢測，可以減少標記，避免錯誤。

本研究還對鹽水試管法、微柱凝膠法檢驗下的血型鑒定結果進行分析，結果顯示，微柱凝膠法的靈敏度、特異度、準確度均較高（P＜0.05）。提示微柱凝膠法在血型鑒定中具有顯著優勢，可提高血型鑒定準確率，但該方法也存在局限性。本研究采用微柱凝膠檢驗技術，發現2 例患者的正反定型不符，導致正反定型不相符的可能原因為：離心不徹底，樣本存在細菌污染，紅細胞懸液新鮮程度低，都會導致檢驗結果失效，出現假陽性或假陰性的情況。為保證檢驗結果的準確性，有必要控制紅細胞濃度和細胞懸液質量。對2 例正反定型不相符進一步分析發現，1 例患者存在凝血功能障礙，另1 例患者患有自身免疫性溶血性貧血。結合以往相關報道，說明血型鑒定中，自身疾病也會對微柱凝膠檢驗結果產生影響，因此檢驗前需嚴格查對患者有無疾病。

本研究交叉配血試驗比較微柱凝膠檢驗和聚凝胺法的成功率，提示微柱凝膠法交叉配血符合率高，可見微柱凝膠檢驗技術在輸血檢驗中具有明顯優勢。本研究聚凝胺檢驗中有8 例存在交叉配血不合情況，其中3 例交叉配血不合是由自身抗體導致的，反應為次側（-），主側（+），抗體篩選（+），直接抗球蛋白試驗（direct antiglobulin test，DAT）（-）。分析可能原因是供血者和患者血清中的抗原抗體存在對立情況，患者血清抗體與提供血液的紅細胞發生拮抗反應，經過復查ABO 血型（ABO blood group，ABO）及RH 血型（RH blood group，RH）（D）血型，糾正錯誤鑒定結果，并選擇正確的血液輸入治療。3 例患者交叉配血不合適為自身存在免疫性疾病導致的，反應為次側（+），主側（-），DAT（+），自身（-），抗體篩選（-）。分析可能原因為供血者和患者血清中的抗原抗體拮抗，因此重新復查患者血型并排除亞型，輸注主側相合的血液。剩余2 例患者交叉配血不合的主要原因為長期使用抗生素，受青霉素、頭孢菌素等藥物的干擾，紅細胞受膜狀態改變，導致紅細胞膜大量吸引蛋白，最終造成DAT 陽性[10]。這2 例患者有明確的藥物使用史，無輸血史和自身免疫性疾病史，同時血漿總蛋白正常，無纖維蛋白原增高和血球蛋白比例倒置，考慮為藥物致敏。

與微柱凝膠檢驗技術相比，聚凝胺法的交叉配血不合格率較高，分析原因：聚凝胺法通過陰離子溶液、凝聚胺作用，會加快紅細胞表面陽離子層電位剝離，加快紅細胞、IgG 的結合，快速聚集紅細胞，產生細胞凝集反應[11]。故配血結果可依據是否順利散開進行判定，但在肝素、低濃度抗體等因素影響下，也會導致紅細胞散開[12]。此外，聚凝胺檢驗技術受人為影響因素大，搖勻力度、解聚時間都會對檢測結果產生影響，處理完成后需在1 min 內完成結果判讀和記錄，若凝集反應較弱，用力振搖會導致凝集狀態消失，導致判定結果錯誤。因此臨床血型鑒定和輸血過程中，需應用微柱凝膠檢驗技術進行判別。為控制檢驗質量，需做好以下工作：做好患者的健康宣教，讓患者清楚血型鑒定和交叉配血的重要性，從而配合相關工作；提高醫護人員的綜合能力，采血一次性成功，檢驗一次到位，避免二次采血給患者帶來更大傷害；與患者做好溝通，及時解答患者疑惑，避免患者滋生焦慮、抑郁等不良情緒，提高患者檢驗工作的依從性。

綜上所述，在臨床患者血型鑒定與輸血過程中，采用微柱凝膠檢測技術能夠有效提升交叉配血成功率，提高血型鑒定的敏感度、特異度和準確性，建議在臨床上推廣應用。