急性心肌梗死病人血清微RNA-1283表達(dá)與中醫(yī)證型的關(guān)系分析

林丹鳳，陳艷俏，牛衛(wèi)洲

急性心肌梗死是由冠狀動(dòng)脈病變導(dǎo)致心肌缺血而引起的心血管類(lèi)疾病，屬于中老年人常見(jiàn)疾病［1］。近年來(lái)隨著社會(huì)發(fā)展，急性心肌梗死的發(fā)病人群逐步年輕化，且發(fā)病率和病死率逐漸升高，給人類(lèi)生命健康帶來(lái)極大威脅［2］。急性心肌梗死在中醫(yī)學(xué)中被認(rèn)為屬于“真心痛”“卒心痛”“厥心痛”等范疇，其病位在心臟和血脈，病機(jī)為心脈痹阻，氣血不通而引發(fā)心痛。中醫(yī)證型復(fù)雜多樣，可分為實(shí)證、虛證和虛實(shí)夾雜證三類(lèi)，具體分為痰瘀互結(jié)型、寒凝心脈型、氣虛血瘀型、氣虛痰瘀互阻型、氣虛痰濁閉阻型、氣陰兩虛型、陰竭陽(yáng)脫型七大證型［3］。中醫(yī)常通過(guò)辨證分型了解不同病癥的病因病機(jī)，在不同的辨證方法中找到最適合的解決方案，有利于進(jìn)行針對(duì)性治療。微核糖核酸（miRNA，miR）是一種內(nèi)源性非編碼單鏈小分子，轉(zhuǎn)錄后對(duì)基因表達(dá)具有調(diào)控作用，有研究表明miRNA 參與急性心肌梗死的生理病理過(guò)程，是急性心肌梗死病人潛在的診斷生物標(biāo)志物［4］。miR-1283屬于miRNA家族的一員，參與細(xì)胞凋亡和血管生成，在多種疾病中發(fā)揮重要作用［5］。有研究報(bào)道，miRNA在妊娠期高血壓疾病中的表達(dá)差異與中醫(yī)證型的不同分型的臨床表現(xiàn)有關(guān)［6］。但目前關(guān)于急性心肌梗死病人血清miR-1283表達(dá)與中醫(yī)證型的關(guān)系尚少有文獻(xiàn)報(bào)道，鑒于此，本研究探究急性心肌梗死病人血清miR-1283表達(dá)與中醫(yī)證型的關(guān)系，以為臨床診治提供方向，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2018 年12 月至2021 年11 月在北京市懷柔區(qū)中醫(yī)醫(yī)院治療的急性心肌梗死病人236 例作為疾病組，其中男142 例，女94 例；年齡（67.61±12.15）歲，范圍為32～81 歲；體質(zhì)量（23.23±3.62）kg/m2，范圍為19～28 kg/m2；ST 段抬高型心肌梗死154 例，非ST 段抬高型心肌梗死82 例；合并高血壓113 例，合并高血脂78 例，合并糖尿病96 例。另選取同期在本院體檢中心體檢的健康人群230例作為健康組，其中男148 例，女82 例；年齡（67.22±12.18）歲，范圍為32～81 歲；體質(zhì)量（23.96±3.86）kg/m2，范圍為21～28 kg/m2。兩組研究對(duì)象的性別、年齡、體質(zhì)量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。本研究已經(jīng)通過(guò)北京市懷柔區(qū)中醫(yī)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批號(hào)201811-004）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合《急性心肌梗死診斷和治療指南》［7］中急性心肌梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn)；均經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療（PCI）；對(duì)照組均經(jīng)體檢確認(rèn)健康；所有對(duì)象均對(duì)本研究知情并簽署同意書(shū)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：合并先天性心臟病；急性肺栓塞、心肌炎等疾??；嚴(yán)重抑郁或其他精神病者；嚴(yán)重感染性疾病；嚴(yán)重肝、腎等器官功能損傷；患有惡性腫瘤。

1.2 方法血清miR-1283 的檢測(cè)方法：疾病組病人于確診時(shí)，健康人群于體檢當(dāng)天均空腹抽取外周血5 mL，置于無(wú)菌抗凝管中。采用TRIzol 裂解抽提法進(jìn)行總RNA 的提取，確定符合逆轉(zhuǎn)錄標(biāo)準(zhǔn)，并用分光光度計(jì)法檢測(cè)RNA 的完整性。根據(jù)Fermentas逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（北京瑞爾欣德科技有限公司）進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRTPCR）按照All-in-oneTMmiRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit 試劑盒進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，PCR 反應(yīng)條件：97 ℃反應(yīng)10 min，95 ℃反應(yīng)20 s、62 ℃反應(yīng)1 min，共35個(gè)循環(huán)，每個(gè)反應(yīng)重復(fù)3次以減少誤差，采用2-??Ct方法計(jì)算miR-1283 表達(dá)水平。引物序列：miR-1283正向：5′-CGCGCTCTACAAAGGAAAGCG-3′，反向：5′-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3′；內(nèi)參U6 正向：5′-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3’，反向：5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′。

中醫(yī)辨證分型的診斷方法：均符合《急性心肌梗死中西醫(yī)結(jié)合診療指南》［8］中急性心肌梗死中醫(yī)證型的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并由經(jīng)驗(yàn)豐富的副高職稱以上的資深中醫(yī)醫(yī)師確診中醫(yī)證型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 26.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 疾病組和健康組血清miR-1283 表達(dá)情況比較疾病組miR-1283 表達(dá)水平0.42±0.07 低于健康組0.98±0.18（t=44.47，P<0.001）。

2.2 疾病組中醫(yī)證型辨證結(jié)果疾病組236 例病人經(jīng)中醫(yī)辨證分型，分為實(shí)證99例、虛實(shí)夾雜證111例、虛證26 例三類(lèi)，其中痰瘀互結(jié)型、寒凝心脈型、氣虛血瘀型、氣虛痰瘀互阻型、氣虛痰濁閉阻型、氣陰兩虛型、陰竭陽(yáng)脫型占比分別為38.98%（92/236）、2.97%（7/236）、27.12%（64/236）、11.86%（28/236）、8.05%（19/236）、8.90%（21/236）、2.12%（5/236）。

2.3 疾病組不同中醫(yī)證型病人血清miR-1283 表達(dá)情況寒凝心脈型、氣虛血瘀型、氣虛痰瘀互阻型、氣虛痰濁閉阻型、氣陰兩虛型病人血清miR-1283表達(dá)水平兩兩對(duì)比均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；痰瘀互結(jié)型病人血清miR-1283 表達(dá)水平0.36±0.06 低于寒凝心脈型0.41±0.05、氣虛血瘀型0.42±0.07、氣虛痰瘀互阻型0.43±0.06、氣虛痰濁閉阻型0.44±0.07、氣陰兩虛型0.45±0.09 和陰竭陽(yáng)脫型0.55±0.08（P<0.05），陰竭陽(yáng)脫型病人血清miR-1283 表達(dá)水平均高于其他型（P<0.05），總體比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=20.18，P<0.001）。

3 討論

急性心肌梗死是臨床常見(jiàn)的急、危重病癥，也是世界范圍內(nèi)最主要的心血管疾病死亡原因之一［9］。臨床主要表現(xiàn)為突發(fā)性胸骨或心前區(qū)壓榨性疼痛，與中醫(yī)學(xué)中“胸痹”和“真心痛”等過(guò)程相一致，《靈樞·厥病》中曾記載：“真心痛，手足青至節(jié)，心痛甚，旦發(fā)夕死，夕發(fā)旦死”［10］，由此可見(jiàn)急性心肌梗死病人病情的嚴(yán)重性。中醫(yī)辨證分型治療的方法由來(lái)已久，但在實(shí)際的診斷和治療中，中醫(yī)辨證中“證”屬于動(dòng)態(tài)變化，其主觀、客觀等影響因素繁雜多樣，辨別困難［11］。因此，探討能夠輔助進(jìn)行急性心肌梗死中醫(yī)辨證分型的血清學(xué)客觀指標(biāo)對(duì)指導(dǎo)臨床工作具有重要意義。

本研究結(jié)果顯示疾病組miR-1283 表達(dá)水平低于健康組，提示血清miR-1283表達(dá)水平與急性心肌梗死的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。各種生物體內(nèi)都存在miRNA，當(dāng)其與mRNA 非編碼序列特異性結(jié)合時(shí)，可導(dǎo)致miRNA 降解或阻止蛋白編碼基因表達(dá)與翻譯成蛋白的過(guò)程，轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)基因和蛋白表達(dá)，從而調(diào)節(jié)機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育，在各種疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用［12］。miR-1283屬于miRNA 家族，能調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞增殖與凋亡，有研究報(bào)道，miR-1283 表達(dá)水平在缺血/復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞中降低，使心肌細(xì)胞活力下降并促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡，表明miR-1283表達(dá)水平可能促進(jìn)心血管疾病的發(fā)生發(fā)展［13］。

急性心肌梗死在中醫(yī)中被認(rèn)為發(fā)病位置在心脈，涉及腎、脾、肝等臟器，最常見(jiàn)的病理機(jī)制為本虛標(biāo)實(shí)，本虛為發(fā)病基礎(chǔ)，標(biāo)實(shí)為發(fā)病條件［14］。由于病人發(fā)病時(shí)間和誘發(fā)病因的不同，會(huì)表現(xiàn)出不同的證型，且證型分布較為復(fù)雜。中醫(yī)辨證分型是根據(jù)病人癥狀、舌脈象等依照中醫(yī)的思維方式，得出證型，然后根據(jù)證型給予相應(yīng)治療，急性心肌梗死辨證分型也是通過(guò)病人發(fā)生心肌梗死時(shí)的癥狀、舌脈象等辨證得出。本研究通過(guò)中醫(yī)辨證將疾病組236 例病人分為實(shí)證、虛實(shí)夾雜證、虛證三類(lèi)共7 種證型，以虛實(shí)夾雜證占比最高，實(shí)證占比稍微次之，虛證占比最次之，其中痰瘀互結(jié)型、寒凝心脈型、氣虛血瘀型、氣虛痰瘀互阻型、氣虛痰濁閉阻型、氣陰兩虛型、陰竭陽(yáng)脫型占比分別為38.98%、2.97%、27.12%、11.86%、8.05%、8.90%、2.12%，以痰瘀互結(jié)型，氣虛血瘀型病人占比較高，與朱新峰［15］等研究結(jié)果一致。王琦的體質(zhì)學(xué)說(shuō)中提到氣虛質(zhì)易受寒邪和熱邪，血瘀質(zhì)易患血癥、痛癥，痰濕質(zhì)易患中風(fēng)、胸痹［16］。急性心肌梗死存在長(zhǎng)期慢性病史，本虛突出，五臟氣血虧虛，心氣不足，心陽(yáng)不振，氣血運(yùn)行不利，心脈推行無(wú)力，以致心脈瘀阻，出現(xiàn)血瘀；氣血推行受阻，出現(xiàn)氣滯；水液氣化無(wú)力，聚而生痰，出現(xiàn)痰濁；痰濁重濁黏膩，久病難除，遇寒邪容易寒凝化寒濕，遇熱邪容易化火轉(zhuǎn)痰熱，視為標(biāo)實(shí)，痰濁瘀血互結(jié)，導(dǎo)致瘀血祛除更加困難［17-18］。據(jù)此可知，虛證為急性心肌梗死的病因，隨著病程延長(zhǎng)病情逐漸加重，血瘀貫穿整個(gè)急性心肌梗死的發(fā)病過(guò)程，達(dá)到痰濁瘀血互結(jié)時(shí)，病人病情更為危重。本研究比較痰瘀互結(jié)型、寒凝心脈型、氣虛血瘀型、氣虛痰瘀互阻型、氣虛痰濁閉阻型、氣陰兩虛型、陰竭陽(yáng)脫型病人血清miR-1283表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)以陰竭陽(yáng)脫型表達(dá)最高，以痰瘀互結(jié)型表達(dá)最低，而寒凝心脈型、氣虛血瘀型、氣虛痰瘀互阻型、氣虛痰濁閉阻型、氣陰兩虛型兩兩比較無(wú)顯著差異，說(shuō)明急性心肌梗死不同證型病人血清miR-1283 表達(dá)水平存在差異，提示血清miR-1283表達(dá)水平可能對(duì)急性心肌梗死中醫(yī)辨證分型提供一定的客觀依據(jù)。分析原因：miRNA 在機(jī)體細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、分化和凋亡等過(guò)程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，不同證型急性心肌梗死病人血清miR-1283表達(dá)水平不同，其表達(dá)水平越低，病人的病情越嚴(yán)重。楊澤民等［19］研究報(bào)道，血清miRNA 可作為脾虛證病人脾虛證臨床辨證分型的潛在標(biāo)志物，為脾虛證病人發(fā)病機(jī)制的研究提供依據(jù)，賈敏等［20］研究報(bào)道，循環(huán)microRNA 在急性冠脈綜合征中可協(xié)助判斷血瘀證的輕重。miR-1283來(lái)自miRNA 家族，急性心肌梗死氣血虛弱是發(fā)病基礎(chǔ)，陰陽(yáng)失調(diào)是病變基礎(chǔ)，痰瘀互結(jié)是最終產(chǎn)物，而miR-1283 參與細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育及凋亡，調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞增殖分化和血管內(nèi)皮功能，且與急性心肌梗死發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，故其在不同證型急性心肌梗死病人中差異顯著。既往何鈴［21］研究也報(bào)道了miR-1283 在冠心病血瘀證、高血壓血瘀證等心血管疾病中表達(dá)異常，通過(guò)調(diào)控PERK/ATF4 信號(hào)通路來(lái)影響血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，參與糖脂代謝和動(dòng)脈硬化的形成，并通過(guò)分泌炎性因子影響細(xì)胞的增殖、分化與凋亡，可能是冠心病血瘀證、高血壓血瘀證等心血管疾病血瘀證形成的相關(guān)特異性miRNA。

綜上所述，急性心肌梗死病人血清miR-1283 表達(dá)水平降低，在急性心肌梗死病人中醫(yī)不同證型表達(dá)存在差異，有望成為急性心肌梗死病人不同中醫(yī)證型的分型依據(jù)。