不同致敏類型的支氣管哮喘患兒外周血T淋巴細胞亞群的差異性研究

龔亮，劉歡，許磊

徐州醫科大學附屬徐州兒童醫院呼吸內一科，江蘇徐州 221000

支氣管哮喘是一種兒童非常常見的疾病，主要是由免疫細胞、炎癥因子以及氣道結構細胞共同參與引起的一種慢性炎癥疾病[1-3]。該病的主要病理特點為局部滲出增多、黏膜水腫高以及氣道上皮細胞脫落引起的反復氣促、咳喘、胸悶等癥狀[4]。隨著生活環境的變化，該疾病發生率也隨之上升[5-6]，給家庭與社會帶來較大的負擔。目前臨床醫學認為Th1/Th2失衡是誘發該病的重要基礎，近些年來隨著細胞學研究的深入，發現細胞亞群數目與支氣管哮喘的發生和進展存在密切的相關性[7-9]。T淋巴細胞大致可分為輔助性T細胞、細胞毒性T細胞以及抑制性T細胞等[10-11]，同時根據表面標志可分為CD4+和CD8+這兩個亞型，在免疫應答中具有重要作用。因此本文選取2021年1月—2023年1月徐州醫科大學附屬徐州兒童醫院100例因過敏引起的支氣管哮喘患兒、100例非過敏引起支氣管哮喘患兒和100例健康兒童進行對照分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院100例因過敏引起的支氣管哮喘患兒作為致敏哮喘組，同時選取100例非過敏引起支氣管哮喘患兒作為非致敏哮喘組，再選取100例健康兒童作為健康對照組。致敏哮喘組100例患兒中有男孩52例，女孩48例；年齡1～11歲，平均（5.2±1.3）歲；所有患兒經皮膚點刺試驗（skin prick test, SPT）檢測為陽性，且根據SPT檢出陽性變應原數目判斷單一致敏患兒64例，多重致敏患兒36例。非致敏哮喘組100例患兒中有男孩51例，女孩49例；年齡1～12歲，平均（5.3±1.2）歲；所有患兒SPT檢測為陰性。健康對照組100例兒童中男孩50例，女孩50例；年齡1～12歲，平均（5.5±1.4）歲；所有兒童經體檢未發現任何呼吸道疾病且SPT檢測為陰性。3組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。所有研究對象家屬均知情同意，并經醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①致敏哮喘組患兒均為過敏引起的支氣管哮喘；②臨床資料完整；③年齡≤12歲。排除標準：①重度哮喘；②4周內伴有呼吸道感染；③近3月使用過激素；④因故退出研究。

1.3 方法

入選兒童均在清晨空腹取4 mL肘靜脈血裝入乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraethylene acid,EDTA）抗凝管，同時使用流式細胞儀進行T細胞亞群測定，測定方法為：每支試管加入10 μl熒光素標記抗體，然后加入100 μl EDTA抗凝全血，混勻并避光室溫孵育20 min，之后取出食管加入500 mL溶血劑，避光孵育10 min上機。所有數據均采用儀器自帶軟件進行分析，并由同一技術員采用相同標準進行讀取。

1.4 觀察指標

對比3組外周血T淋巴細胞亞群的差異，并比較單一致敏組和多重致敏組外周血T淋巴細胞亞群的差異。

1.5 統計方法

采用SPSS 20.0統計學軟件進行數據分析，符合正態分布的計量資料用（±s）表示，采用t檢驗；計數資料運用例數（n）和率來表示，采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組別患兒T淋巴細胞亞群比較

3組患兒外周血CD3+、CD4+和CD8+表達水平以及CD4+/CD8+比值比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。致敏哮喘組與非致敏哮喘組、致敏哮喘組與健康對照組外周血CD3+、CD4+和CD8+表達水平以及CD4+/CD8+比值比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同組別患兒T淋巴細胞亞群比較(±s)

表1 不同組別患兒T淋巴細胞亞群比較(±s)

注：與致敏哮喘組比較，*P＜0.05。

組別致敏哮喘組（n=100）非致敏哮喘組（n=100）健康對照組（n=100）F值P值CD3+（%）46.80±10.60（59.50±12.28）*（67.85±12.02）*82.685＜0.001 CD4+（%）30.50±12.50（35.21±10.44）*（36.67±9.15）*8.935＜0.001 CD8++（%）28.30±8.60（25.69±9.09）*（20.68±6.81）*22.174＜0.001 CD4+/CD8+1.17±0.60（1.69±1.41）*（1.93±0.69）*16.033＜0.001

2.2 單一致敏組與多重致敏組患兒T淋巴細胞亞群比較

單一致敏組與多重致敏組在外周血CD3+、CD4+和CD8+表達水平以及CD4+/CD8+比值方面比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 單一致敏組與多重致敏組患兒T淋巴細胞亞群比較(±s)

表2 單一致敏組與多重致敏組患兒T淋巴細胞亞群比較(±s)

組別單一致敏組（n=64）多重致敏組（n=36）t值P值CD3+（%）53.22±7.43 35.39±3.02 13.749＜0.001 CD4+（%）32.81±11.58 26.39±13.17 2.532 0.013 CD8+（%）26.91±8.43 30.78±8.44-2.203 0.030 CD4+/CD8+1.28±0.46 0.90±0.51 3.808＜0.001

3 討論

支氣管哮喘是臨床常見疾病[12]，可引起廣泛可逆性氣流受限，引起患兒胸悶、氣促、喘息等癥狀，且在凌晨、夜間加重。隨著我國兒童生活環境的變化，支氣管哮喘的發生率也不斷地升高，有統計學指出，我國0～14歲兒童支氣管哮喘發生率為0.5%～6.3%，平均發生率為2.6%[13]。雖然有部分患兒可自行緩解或經治療后痊愈。但是仍有部分患兒出現反復發作的特點，對兒童的身心健康成長造成了較大的影響。因此，需要引起人們的關注和重視。

有學者認為CD8+細胞參與了支氣管哮喘的免疫調節，且通過近些年來的研究發現，免疫調節劑在支氣管哮喘兒童中的應用表現出較好的療效，其主要是通過糾正輔助性T淋巴細胞的表達水平，維持機體免疫平衡，有助于降低支氣管哮喘的發作次數以及持續時間，證明了細胞免疫參與了支氣管哮喘的發生與進展[14-15]。

何其瑞[16]選擇60例支氣管哮喘患兒，根據過敏原皮膚點刺試驗明確致敏模式，并采用流式細胞法檢測清晨空腹狀態外周血T淋巴細胞亞群水平，結果發現CD3+水平比較，非致敏組＞致敏組患兒[（59.41±13.78）% vs（44.19±12.52）%]（P＜0.05）。本研究中致敏哮喘組CD3+水平高于非致敏哮喘組患兒[（46.80±10.60）% vs （59.50±12.28）%]（P＜0.05）。這與本文的研究結果相符，本次研究中致敏哮喘組與非致敏哮喘組在外周血CD3+、CD4+和CD8+表達水平以及CD4+/CD8+比值方面比較，差異有統計學意義（P＜0.05），這說明哮喘本身會引起免疫失衡的狀態，表現在不同T細胞亞群失衡，且過敏原引起的變態反應會導致免疫應答介質的表達水平進一步升高，表現為CD4+/CD8+比值升高，由此可見，過敏引起的支氣管哮喘患兒更容易出現免疫應答反應。致敏哮喘患兒外周血CD3+、CD4+表達水平以及CD4+/CD8+比值低于非致敏哮喘患兒（P＜0.05），可能是因為致敏哮喘患兒體內的炎癥反應導致了免疫系統的異常。在炎癥反應的過程中，白細胞數量可能會增加，但其中的T細胞比例可能會改變。在哮喘患者中，CD4+T細胞通常參與呼吸道炎癥反應，并且可以引起過度反應。CD8+T細胞則主要參與對感染病原體和非自身抗原的細胞介導免疫反應。因此，致敏哮喘患兒中CD8+T細胞的百分比可能會升高，而CD4+T細胞比例會降低。T細胞是免疫系統最主要的效應細胞。T細胞活化后發揮免疫調節功能不同細胞因子間功能相互拮抗從而保證機體免疫自穩狀態的維持。

本次研究中單一致敏組與多重致敏組在外周血CD3+、CD4+和CD8+表達水平以及CD4+/CD8+比值方面的比較，差異有統計學意義（P＜0.05），可能是因為不同類型的敏感原對哮喘患兒的免疫系統產生的影響不同。多重致敏哮喘患兒接觸到不同的致敏原會導致免疫系統產生更廣泛的反應，因此可能會有較高的CD4+T細胞濃度。單一致敏哮喘患兒對于致敏原的反應可能就比較局限，因此CD8+T細胞可能比較少。多重致敏引起變態反應更加嚴重，導致下游免疫應答調節機制紊亂，從而引起局部甚至是全身炎癥反應。致敏哮喘患兒外周血CD3+、CD4+和CD8+表達水平以及CD4+/CD8+比值低于非致敏哮喘患兒（P＜0.05），可能是由于致敏原與其免疫系統中的T細胞相互作用，導致T細胞數量和活性發生改變，而非致敏哮喘患兒則不會出現這種情況。具體機制尚不清楚，需要進一步研究探討。此外，單一致敏患者可能具有更為明顯的致敏病史和臨床癥狀，因此可能會更早或更積極地就醫接受治療，從而也可能會影響其外周血CD3+、CD4+和CD8+表達水平以及CD4+/CD8+比值。

綜上所述，致敏引起的支氣管哮喘患兒外周血T淋巴細胞亞群與健康兒童以及未致敏的支氣管哮喘均存在明顯差異，且單一致敏引起支氣管哮喘與多重致敏支氣管哮喘兒童相比也存在較大差異，因此需要密切觀察致敏支氣管哮喘患兒的免疫指標。