胸腺五肽對AA肉雞免疫器官發育的影響

許輝 張樂 劉小琬 張晶晶 王寒

摘 要：本試驗旨在研究胸腺五肽對AA肉雞免疫器官發育的影響。選用125只14日齡健康AA肉雞，按體重、性別隨機分為5個處理，每個處理25只。從第14天開始，對照組注射生理鹽水，4個試驗組分別通過胸大肌注射50、150、300、500 μg/kg體重的胸腺五肽，1次/d，連續注射5 d。試驗分別于用藥5 d（19日齡）及停藥5 d（24日齡）測定各組肉雞的胸腺、脾臟和法氏囊的干濕比。結果表明：在19日齡，各處理組間肉雞脾臟及法氏囊干濕比無顯著差異，但50、150 μg/kg 組肉雞胸腺g干濕比顯著高于300、500 μg/kg組及對照組（P<0.05）。在24日齡，各處理組間肉雞脾臟及法氏囊干濕比仍無顯著差異，而50、150 μg/kg 組肉雞胸腺干濕比依舊顯著高于300、500 μg/kg組及對照組（P<0.05）。高劑量胸腺五肽（500 μg/kg）并未對肉雞胸腺、法氏囊、脾臟、肝臟及腎臟造成損傷。綜上所述，注射低劑量（50、150 μg/kg）胸腺五肽可促進肉雞胸腺發育，增強機體免疫，且對脾臟和法氏囊無不良影響。

關鍵詞：胸腺五肽；AA肉雞；免疫器官發育

中圖分類號：S831 文獻標識碼：B 文章編號：1673-1085（2023）08-0009-06

胸腺肽是由胸腺組織分泌的具有生理活性的一組多肽，可通過誘導淋巴細胞的分化、增殖促進T細胞的成熟，提高巨噬細胞的抗原呈遞及吞噬功能，增強細胞免疫，從而提高機體抵抗病原的能力[1]。1949年，胸腺肽粗提液首次被制備出來，此后國內外學者們一直致力于胸腺肽的研究，并在提取、分離、純化及功能探究等方面均取得極大進展[2]。當前在臨床上，胸腺肽已廣泛應用于輔助治療各種腫瘤性疾病[3]。此外，胸腺肽無明顯的種屬特異性，對多種動物也均有增強免疫的功能。

近年來，隨著人們對動物疾病預防、治療的重視程度不斷提高，胸腺肽在獸醫臨床上逐步被研究、應用及推廣，為病毒性疾病的治療帶來新的希望[4]。有研究表明，胸腺肽可以用于治療患有新城疫及傳染性喉氣管炎雙重強毒感染的小雞；而且飼糧中添加或肌注胸腺肽，能促進肉雞抗體生成，提高免疫功能和生長性能[5-6]。然而，目前胸腺五肽在肉雞上的應用研究多集中在對飼料轉化率、生化指標及血常規等影響方面，而關于胸腺五肽對肉雞胸腺、脾臟等免疫器官發育的影響還沒有相關研究報道。胸腺及脾臟是禽類最重要的免疫器官，其發育狀態及機能直接決定禽類機體的免疫水平。免疫器官指數可在一定程度上反映藥物對器官的影響，是毒性的重要指標。免疫器官指數增加則說明器官可能有充血、水腫、肥大等變化，免疫器官指數下降表明器官可能有萎縮、退行性變化等。因此，本試驗旨在探究胸腺五肽對肉雞免疫器官干濕重比及其組織形態學的影響，為胸腺五肽在獸醫臨床上的應用提供一定的理論基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料和動物

本試驗中注射用胸腺五肽（50 mg/瓶）購自河北征宇制藥有限公司（石家莊）。試驗動物購自正大公司的1日齡健康AA肉仔雞。

1.2 試驗設計

選用125只1日齡健康AA肉雞，正常飼養14日后隨機分為5個處理（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V組），每個處理25只。I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組分別通過胸大肌注射50、150、300、500 μg/kg體重的胸腺五肽，而V組（陰性對照組）注射等體積的生理鹽水。每日注射1次，連續注射5 d。

1.3 飼養管理

試驗雞采用高床平養，雞舍內通風良好，溫度、濕度等按飼養規程控制，并按常規程序進行衛生清理與消毒。所有雞飼喂相同的飼料，飼料按NRC（1998）肉雞營養需要標準配制，不添加任何藥物添加劑。試驗期間所有雞自由采食和飲水。第7天，雞群進行首免雞新城疫-傳染性支氣管炎二聯苗免疫。第14天，雞群進行傳染性法氏囊疫苗免疫。每日觀察并記錄雞群的臨床表現（包括注射部位紅腫、痛、壞死等）。

1.4 測定指標

1.4.1 免疫器官干濕比測定 于用藥5 d（19日齡）及停藥5 d（24日齡），分別從各組AA肉雞隨機選取5只解剖，收集胸腺、脾臟、法氏囊并稱重，隨后將其置于100℃干燥箱干燥再稱其干重，計算干濕比。

1.4.2 組織病理學檢查 試驗結束后選擇陰性對照組和Ⅳ組的雞只，采集肝臟、腎臟、脾、胸腺、法氏囊等組織，10%中性福爾馬林固定24 h后，進行石蠟包埋、切片、HE染色、鏡檢，進行組織病理學檢查。

1.5 統計分析

采用EXCEL對試驗數據進行初步整理，用SPSS 22.0軟件中ANOVA程序進行單因素方差分析，差異顯著時采用Duncan氏方法進行多重比較，結果以平均數±標準差（Mean±SD）表示，以P<0.05為差異顯著。

2 試驗結果

2.1 胸腺五肽對肉雞免疫器官干濕比的影響

表1為胸腺五肽對肉雞免疫器官干濕比的影響。由表1可知，在19日齡（即注射胸腺五肽5 d后），各處理組間肉雞脾臟及法氏囊干濕比無顯著差異（P>0.05）。但是，Ⅰ組和Ⅱ組胸腺干濕比顯著高于Ⅲ、Ⅳ及V組（P<0.05），而Ⅲ、Ⅳ組和對照組之間差異不顯著（P>0.05）。結果說明注射低劑量胸腺五肽（50、150 μg/kg）可能促進胸腺發育，顯著提高肉雞胸腺干濕比，但對脾臟、法氏囊無顯著影響；而使用高劑量胸腺五肽（300、500 μg/kg）對肉雞胸腺、脾臟、法氏囊干濕比無顯著影響。

在24日齡（即停止注射胸腺五肽5 d后），觀察到的結果同19日齡相似。各處理組間肉雞脾臟及法氏囊干濕比仍無顯著差異（P>0.05）。Ⅰ、Ⅱ組肉雞胸腺干濕比仍顯著高于Ⅲ、Ⅳ及V組（P<0.05），而Ⅲ、Ⅳ組胸腺干濕比和V組間依舊差異不顯著（P>0.05）。結果表明，停藥5日后低劑量胸腺五肽（50、150 μg/kg）對肉雞胸腺的發育仍具有一定的促進效果。

2.2 胸腺五肽對肉雞組織器官組織形態學的影響

在19 d（即注射胸腺五肽5 d后）和24 d（即停止注射胸腺五肽5 d后），Ⅳ組（500 μg/kg胸腺五肽注射組）肉雞胸腺、法氏囊、脾臟、肝臟各器官均未觀察到明顯的病理組織學變化。胸腺細胞無明顯變化，染色均質，內有大量淋巴細胞正在分化（圖1）。法氏囊細胞均一、干凈，顆粒感明顯，有大量正在分化的B淋巴細胞和巨噬細胞（圖2）。脾臟組織有少量的充血、出血，部分細胞核碎裂，可能與剖殺雞只過程中的操作不當有關（圖3）。肝臟核大而圓、居中，胞漿染色質豐富，胞質嗜酸性，少量炎細胞浸潤（圖4）。腎臟細胞結構完整，細胞核清晰可見，胞質、胞漿對比鮮明，有小部分的細胞脫落、腫脹，細胞分布不均一（圖5）。

3 討論

近年來，隨著養禽業向規模化、集約化不斷發展，禽病也越來越多樣化，如何提高家禽的免疫功能、減少病毒性疾病及其他免疫抑制性疾病的發生，是當前獸醫工作者們熱切關心的問題，各種免疫調節劑在臨床上的使用是大勢所趨。因此，研究免疫調節劑在雛雞胸腺、法氏囊、脾臟等免疫器官的影響意義重大。

3.1 胸腺五肽對AA肉雞免疫器官干濕比的影響

在實際生產過程中，肉雞抗應激能力較差，受刺激后極易發生脂質過氧化，產生過量的自由基，進而造成氧化應激，影響免疫系統功能，造成雞群抵抗力下降。王志強等[5]研究表明200 μg/kg胸腺五肽能拮抗環磷酰胺對T淋巴細胞增殖的抑制作用，促進免疫雛雞胸腺的生長發育，促進外周T淋巴細胞的增殖和脾淋巴細胞分泌IL-2，顯著提高免疫抑制雛雞血清中的新城疫抗體效價。鄧夢玲[7]研究表明注射高劑量的胸腺五肽可能增強AA肉雞的免疫力，對其他各項血常規指標沒有明顯的不良影響。本試驗中，注射50、150 μg/kg胸腺五肽能促進肉雞胸腺的發育，對脾臟、法氏囊等免疫器官的增重無顯著影響；注射500 μg/kg胸腺五肽對正常肉雞免疫器官及肝腎組織無明顯的病理損害作用。本試驗中僅觀察到胸腺五肽對胸腺發育的積極作用，可能與其靶向性有關，胸腺五肽主要作用于胸腺，誘導和促進T淋巴細胞的成熟，因此對法氏囊、脾臟等免疫器官發育影響和調節作用有限。

3.2 胸腺五肽對AA肉雞免疫器官功能的影響

胸腺是重要的淋巴器官，是T細胞發育分化和成熟的場所，可以分泌多種激素，有增強細胞免疫功能、調節免疫平衡、抗感染等作用[8]。免疫器官的發育狀態和機能強弱，是對禽類免疫水平判定的一項重要指標[9]，家禽的淋巴器官包括胸腺、法氏囊、淋巴結和脾臟等，淋巴器官的發育和機體免疫力均離不開T淋巴細胞的參與，胸腺作為最重要的細胞免疫中樞器官，為外周淋巴器官正常發育和機體免疫所必需。研究發現胸腺五肽能刺激特異性淋巴細胞的活性[10]，能替代胸腺的功能，誘導前體淋巴細胞轉變為具有免疫功能的T細胞。同時老齡動物的胸腺萎縮及功能退化，胸腺五肽可以提高胸腺的抗氧化酶活力，降低氧自由基和脂質過氧化物的生成，從而提高動物機體抗氧化能力，延緩部分老年性疾病的出現，故其在抗衰老方面有著極其廣闊的前景[11]。

目前已有胸腺肽制劑在獸醫臨床的應用報道，有研究表明，胸腺五肽注射濃度分別為0.2、0.4、0.8 mg/kg時，對正常大鼠的脾臟、胸腺進行病理組織學觀察無明顯影響，說明其沒有免疫毒性[12]。而本試驗中注射高劑量（500 μg/kg）胸腺五肽對正常肉雞免疫器官及肝腎組織無明顯的病理損害作用，與上述結果相一致。

4 ?小結

在本試驗條件下，注射劑量為50、150 μg/kg時，胸腺五肽可促進肉雞胸腺發育，增強機體免疫，且對脾臟和法氏囊無不良影響，有作為免疫增強劑的潛力。

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Effects of Thymopentin on Immune Organs Development

in Arbor Acres Broilers

XU Hui1， ZHANG Le2， LIU Xiaowan1， ZHANG Jingjing1， WANG Han1

（1.Sichuan Water Conservancy Vocational College， Sichuan ?611200， China;

2.Qilu Animal Health Products Co.， Ltd.， Jinan ?250100， China）

Abstract： This experiment was conducted to study the effects of thymopentin on immune organ development of AA broilers. A total of 125 14-day-old healthy AA broilers were randomly divided into 5 groups according to body weight and sex， with 25 broilers per group. At age of 14 days， the control group was injected with normal saline， and the 4 experimental groups were injected with 50， 150， 300， 500 μg/kg body weight thymopentin once a day in the pectoral major muscle， respectively， for consecutive 5 days. The organ indices of thymus， spleen and bursa of fabricius were determined at age of 19 days and 24 days. The results showed that there was no significant difference in spleen and bursa of fabricius index among treatments at age of 19 days. But 50 μg/kg and 150 μg/kg thymopentin significantly increased the thymus index compared with other treatments （P<0.05）. At age of 24 days， there was also no significant difference in spleen and bursa index among treatments. The thymus index of broilers in treatments of 50 μg/kg and 150 μg/kg thymopentin was still significantly higher than those in other treatments. Besides， high dose of thymopentin （500 μg/kg） did not damage thymus， bursa of fabricius， spleen， liver and kidney of broilers. In conclusion， low dose （50，150 μg/kg） of thymopentin can promote the development of thymus， enhance the immune function， and has no adverse effect on spleen and bursa of fabricius.

Keywords： Thymopentin; Arbor Acres broilers; Immune organ development