大午金鳳蛋雞禽流感和新城疫母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律的研究

王勝結(jié) 陸樸麗 袁海燕

摘 要：為研究大午金鳳蛋雞禽流感H5亞型Re-13株和Re-14株、H7亞型Re-4株、禽流感H9、新城疫母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律，本試驗(yàn)對(duì)10萬(wàn)只大午金鳳雛雞隨機(jī)抽取80只，于1、5、10、13、16日齡及20日齡采用血凝和血凝抑制試驗(yàn)進(jìn)行禽流感H5亞型Re-13株和Re-14株、H7亞型Re-4株、禽流感H9亞型以及新城疫的母源抗體跟蹤檢測(cè)。結(jié)果表明：父母代種雞禽流感和新城疫免疫抗體水平可以通過(guò)卵黃傳遞給雛雞，使其產(chǎn)生較高的母源抗體以抵抗病毒侵襲，其中雛雞在1日齡禽流感和新城疫母源抗體水平最高，均達(dá)到6log2以上，之后隨日齡增加母源抗體逐漸下降；10日齡時(shí)禽流感H5亞型Re-13株和Re-14株、H7亞型Re-4株母源抗體下降至抗體保護(hù)水平以下，16日齡時(shí)禽流感H9亞型母源抗體水平和13日齡時(shí)新城疫母源抗體水平均下降至抗體保護(hù)水平以下。因此，建議禽流感病毒H5亞型（Re-13株）、H5亞型（Re-14株）、H7亞型（Re-4株）在7～9日齡首免；H9亞型在13～15日齡首免，新城疫在10～13日齡首免。本試驗(yàn)結(jié)果為禽流感、新城疫疫苗首免日齡的確定提供了一定參考。

關(guān)鍵詞：禽流感；新城疫；母源抗體；首免日齡；大午金鳳蛋雞

中圖分類(lèi)號(hào)：S858.31 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1673-1085（2023）08-0015-05

禽流感（Avian influenza，AI）是由A型流感病毒（AIV）引起的一種侵害禽類(lèi)的急性傳染性疾病，是目前對(duì)雞群危害嚴(yán)重的傳染病，根據(jù)致病力不同分為無(wú)致病性、低致病性、高致病性。其中H5、H7亞型中的一些毒株致病力較高，引發(fā)禽類(lèi)高致病性禽流感，癥狀表現(xiàn)為急性高度致死性，也可表現(xiàn)為無(wú)癥狀隱性帶毒；不僅能感染禽類(lèi)，也能感染哺乳動(dòng)物，威脅人類(lèi)健康，給養(yǎng)殖業(yè)造成重大損失。新城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（NDV）引起雞的急性高度接觸性傳染病，是嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的另一重要疾病[1]。禽流感和新城疫自發(fā)現(xiàn)以來(lái)給我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2]，隨著我國(guó)規(guī)模化養(yǎng)殖程度越來(lái)越高，疫情一旦發(fā)生，波及范圍變廣，因此做好日常防控非常關(guān)鍵。免疫接種是預(yù)防工作的重中之重。因此，制定符合養(yǎng)殖場(chǎng)實(shí)際的科學(xué)免疫程序是免疫預(yù)防的重要一環(huán)。為有效防控AI和ND，給父母代種雞接種禽流感和新城疫疫苗，種母雞產(chǎn)生的抗體可以通過(guò)卵黃傳遞給雛雞[3]，使其獲得較高的母源抗體以抵抗病毒侵襲。本試驗(yàn)選擇大午金鳳雛雞作為研究對(duì)象，檢測(cè)雛雞體內(nèi)禽流感、新城疫母源抗體的消長(zhǎng)情況，了解母源抗體在雛雞體內(nèi)的衰減變化規(guī)律，為確定禽流感和新城疫的首免日齡提供可靠依據(jù)，同時(shí)為養(yǎng)殖場(chǎng)有科學(xué)地制定免疫程序提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

健康的大午金鳳蛋雛雞，購(gòu)自保定興芮農(nóng)牧發(fā)展有限公司，飼養(yǎng)在貴州韓偉蛋業(yè)有限公司養(yǎng)殖場(chǎng)。

1.2 試驗(yàn)材料

1.2.1 抗原 包括禽流感病毒H5亞型（Re-13株）抗原（批號(hào)為：2022004）、禽流感病毒H5亞型（Re-14株）抗原（批號(hào)為：2022004）、禽流感病毒H7亞型（Re-4株）抗原（批號(hào)為2022005）、禽流感病毒H9抗原（批號(hào)為：2021001），均由哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司提供；新城疫抗原（批號(hào)為：202102），由中國(guó)獸藥監(jiān)察所提供。

1.2.2 陽(yáng)性血清 包括禽流感病毒H5亞型（Re-13株）陽(yáng)性血清（批號(hào)為：2022004）、禽流感病毒H5亞型（Re-14株）陽(yáng)性血清（批號(hào)為：2022005）、禽流感病毒H7亞型（Re-4株）陽(yáng)性血清（批號(hào)為2021004）、禽流感病毒H9陽(yáng)性血清（批號(hào)為：2021001），均由哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司提供；新城疫陽(yáng)性血清（批號(hào)為：202007），由中國(guó)獸藥監(jiān)察所提供。用生理鹽水做對(duì)照。

1.2.3 器材與試劑 8道移液器 （艾本德）、單道移液器（艾本德）、振蕩器（杭州瑞誠(chéng)MS100）、高速離心機(jī)（知信H2016D）、96孔V形微量反應(yīng)板、生理鹽水、1%雞紅細(xì)胞懸液。

1.3 試驗(yàn)方法

從10萬(wàn)只大午金鳳蛋雞雛雞隨機(jī)抽取80只，分別于1、5、10、13、16、20日齡翅根靜脈采血，分離血清后，依照國(guó)家GB/T18936-2020高致病性禽流感診斷技術(shù)和GB/T 16550-2020 新城疫診斷技術(shù)的操作標(biāo)準(zhǔn)，采用血凝試驗(yàn)（HA）與血凝抑制試驗(yàn)（HI）對(duì)血清樣品檢測(cè)雞只H5、H7、H9亞型禽流感抗體水平以及新城疫抗體水平，計(jì)算平均值并繪制抗體消長(zhǎng)曲線(xiàn)。

1.4 判定標(biāo)準(zhǔn)

判斷標(biāo)準(zhǔn)按農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)，禽流感HI抗體效價(jià)≥4log2 判為合格，＜4log2 判為不合格；新城疫HI 抗體效價(jià)≥5log2 判為合格，＜5log2 判為不合格。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 禽流感病毒H5亞型（Re-13株）抗體水平

禽流感病毒H5亞型（Re-13株）抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1、消長(zhǎng)曲線(xiàn)見(jiàn)圖1。

1～20日齡，母源抗體平均效價(jià)隨日齡的增長(zhǎng)一直呈下降趨勢(shì)。從圖1抗體消長(zhǎng)規(guī)律曲線(xiàn)可以推測(cè)出，大約在8日之后母源抗體水平處于4log2附近，至10日齡時(shí)抗體平均效價(jià)降至3.55log2，至20日齡時(shí)抗體平均效價(jià)僅有0.36log2，接近0。

2.2 禽流感病毒H5亞型（Re-14株）抗體水平

禽流感病毒H5亞型（Re-14株）抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2、消長(zhǎng)曲線(xiàn)見(jiàn)圖2。

圖2顯示禽流感病毒H5亞型（Re-14株）母源抗體隨日齡的增長(zhǎng)逐步下降。10日齡時(shí)，母源抗體平均效價(jià)為2.91log2，低于保護(hù)病毒侵襲的最低水平；20日齡時(shí)，抗體平均效價(jià)低至0.36log2；5～10日齡母源抗體下降速度最快，10日齡后抗體平均效價(jià)下降趨勢(shì)較平緩。

2.3 禽流感病毒H7（Re-4株）抗體水平

禽流感病毒H7亞型（Re-4株）抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3、消長(zhǎng)曲線(xiàn)見(jiàn)圖3。

從圖3可以看出，禽流感病毒H7亞型母源抗體水平變化趨勢(shì)隨日齡的增長(zhǎng)而在下降，約在7日齡后抗體平均效價(jià)低于雞群免遭病毒侵襲的最低抗體水平（4log2），10日齡時(shí)抗體平均效價(jià)已降至3.18log2；母源抗體下降幅度最大的時(shí)間段在5～10日齡，10～16日齡母源抗體的消耗速度相對(duì)遲緩，之后迅速消耗，至20日齡左右基本消失。

2.4 禽流感病毒H9亞型抗體水平

禽流感病毒H9亞型抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4、消長(zhǎng)曲線(xiàn)見(jiàn)圖4。

從圖4可知，20日齡前，禽流感病毒H9亞型母源抗體隨日齡的增長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)，10日齡時(shí)抗體平均效價(jià)降至5.20log2；10～13日齡的抗體平均效價(jià)變化曲線(xiàn)出現(xiàn)一個(gè)平臺(tái)期，13日齡時(shí)檢測(cè)的抗體平均效價(jià)為4.91log2，低于5log2；13日齡后，母源抗體消耗的速度加快，20日齡時(shí)低至1.7log2。

2.5 新城疫抗體水平

新城疫抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表5、消長(zhǎng)曲線(xiàn)見(jiàn)圖5。

從圖5新城疫的抗體消長(zhǎng)曲線(xiàn)來(lái)看，1～20日齡期間雛雞體內(nèi)的新城疫母源抗體水平隨日齡的增長(zhǎng)而不斷下降，但分別在10～13、16～20日齡時(shí)抗體平均效價(jià)消長(zhǎng)曲線(xiàn)下降趨勢(shì)變緩（出現(xiàn)平臺(tái)期），且處于兩個(gè)平臺(tái)期間的13～16日齡抗體下降趨勢(shì)變化最快。10日齡時(shí)抗體平均效價(jià)降至5.00log2，之后抗體平均效價(jià)低于5log2。

3 討論

母源抗體的變化規(guī)律表明，雛雞出殼后，通過(guò)吸收體內(nèi)卵黃囊而從中獲取了大量的抗體，1日齡時(shí)，母源抗體水平基本能維持在6log2以上。由于母源抗體是被動(dòng)免疫抗體[4]，不具備持續(xù)產(chǎn)生的能力[5]，會(huì)隨時(shí)間不斷消耗和衰減。母源抗體具有雙重性，一方面可以幫助機(jī)體抵御外來(lái)病毒的侵襲，另一方面會(huì)干擾疫苗免疫，降低免疫效果[6]。因此，在制定免疫程序時(shí)，需綜合考慮母源抗體的雙重影響。

按農(nóng)業(yè)部相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)（禽流感HI抗體效價(jià)≥4log2 判為合格，＜4log2 判為不合格；新城疫HI 抗體效價(jià)≥5log2 判為合格，＜5log2 判為不合格）對(duì)本試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，大午金鳳禽流感病毒H5亞型（Re-13株）、（Re-14株）和H7亞型（Re-4株）5日齡之前抗體平均滴度都在5.45log2以上，H9亞型在13日齡之前抗體平均滴度在4.9log2以上；新城疫在10日齡之前抗體平均滴度在5log2以上。因此，本試驗(yàn)根據(jù)繪制的母源抗體消長(zhǎng)曲線(xiàn)，建議禽流感病毒H5亞型（Re-13株）、H5亞型（Re-14株）、H7亞型（Re-4株）在7～9日齡首免；H9亞型在13～15日齡首免，新城疫在10～13日齡首免。本試驗(yàn)結(jié)果對(duì)新城疫和禽流感首免日齡的確定具有一定的指導(dǎo)意義。

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Study on the Growth and Decline of Maternal Antibodies against Avian Influenza and Newcastle Disease in Dawu Jinfeng Laying Hens

WANG Shengjie，LU Puli，YUAN Haiyan

（Guizhou Han Wei Dan ye co.， ltd，Liupanshui ?Guizhou ?553000，China）

Abstract： This paper provides a reference for the age of first exemption of avian influenza and Newcastle disease vaccine by studying the growth and decline rules of H5 subtype Re-13 and Re-14 strains， H7 subtype Re-4 strains， avian influenza H9 and Newcastle disease maternal antibodies. In this trial， 80 of 100，000 Dawu jinfeng chicks were randomly selected and followed up for avian influenza H5 subtype Re-13 and Re-14， H7 subtype Re-4， avian influenza H9 and Newcastle disease maternal antibody at 1， 5， 10， 13， 16 days and 20 days of age. The results showed that the levels of immune antibodies to avian influenza and Newcastle disease in parent breeders could be transmitted to chicks through yolk， so that they could produce higher maternal antibodies to resist virus invasion. At the same time， it was found that chicks had the highest levels of maternal antibodies in one-day-old avian influenza and Newcastle disease， both reaching more than 6log2， and then the maternal antibodies gradually decreased. At 10 days of age， maternal antibodies to avian influenza H5 subtype Re-13， Re-14 and H7 subtype Re-4 decreased below the antibody protection level， at 16 days of age， maternal antibodies to avian influenza H9 subtype decreased below the antibody protection level， and Newcastle disease maternal antibodies also dropped below the antibody protection level at 13 days of age.Therefore， it is recommended that H5 subtype Re-13， H5 subtype Re-14 and H7 subtype Re-4 are exempted first at 7 to 9 days; H9 subtype is exempted first between 13 to 15 days and Newcastle disease at 10 to 13 days of age. The results of this test provide a certain reference for determining the first immunization age of avian influenza and Newcastle disease vaccine.

Keywords： Avian influenza; Newcastle disease; Maternal antibodies; First day free age; Dawu jinfeng laying hens