一起肉番鴨感染致病性大腸桿菌和鴨疫里默氏桿菌病的診治

李建平

中圖分類號：S858.32 文獻標識碼：C 文章編號：1673-1085（2023）08-0065-04

禽致病性大腸桿菌是養殖業常見的一種病原，可以感染雞、鴨和鵝等多種禽類，使發病禽產生敗血癥、腹膜炎、氣囊炎、輸卵管炎、腫頭綜合征等癥狀。各種日齡的禽均可感染，對雛禽的致病力較強，每年給養殖業造成嚴重經濟損失。該病流行沒有明顯的季節性，一年四季均可發生，主要發生在以冬春氣溫較低及氣溫變化較頻繁和空氣濕度較大的季節。大腸桿菌的主要傳播途徑為呼吸道傳播，還可通過垂直傳播、消化道傳播等。鴨疫里默氏桿菌（RA）主要侵害雛鴨，急性發病引起食欲和飲水明顯減少、精神萎靡、排黃綠色糞便、死前呈現角弓反張等神經癥狀；慢性發病鴨耐過后會出現生長緩慢、體積小、淘汰率較高。臨床上常與大腸桿菌混合感染，而且在臨床癥狀和病理變化和流行病學等方面，二者容易混淆，增加了診斷和防控的難度。

2023年2月，江西黎川社平鄉某鴨場10日齡雛番鴨發生包心、包肝和歪脖、轉頭等明顯癥狀，綜合臨床診斷、病理變化以及細菌分離和PCR分子技術等手段，最終確診為大腸桿菌和鴨疫里默氏桿菌感染。現將這起混合感染診治情況報告如下：

1 發病情況

2023年2月一場主從安徽某種鴨場引進5 000羽肉番鴨苗，已在3 d內注射過鴨肝+大舌二聯抗體，進苗后7 d養殖戶接種了鴨黃病毒+禽流感H9亞型二聯滅活苗。第10天，發現鴨苗精神沉郁，部分出現神經癥狀，并死亡50羽左右。養鴨場主緊急使用鴨細小病毒抗體注射1 mL/羽，并用氟苯尼考+某中藥拌料4 d，病情沒有好轉，死鴨數量持續上升，第15天死鴨數增加到一天100羽左右。

2 臨床癥狀

發病鴨精神沉郁，有明顯歪脖、轉頭神經癥狀（圖1），網床下面白色糞便偏多，糞便稀薄，增料不明顯。

3 病理變化

現場解剖病死鴨，典型病變集中在心臟和肝臟上。肝臟出血、腫大，心包膜增厚、外覆一層纖維素性膜，見圖2；有的心臟、肝臟均被一層白色纖維素膜包裹，呈典型的包心、包肝（圖3）；腹膜炎，小腦內膜出血等病癥。

4 實驗室診斷

4.1 細菌分離與鏡檢

細菌分離：將無菌采集的病鴨肝臟劃線接種于麥康凱平板，在37 ℃培養24～48 h，在平板上生長出表面光滑的圓形粉紅色菌落（圖4）。

4.2 革蘭氏染色鏡檢

按上述操作，挑取單個菌落在麥康凱培養基進行劃線培養，然后挑出純培的單個菌落進行涂片、干燥、固定。滴加結晶紫染色約1 min，水洗；用碘液沖去殘水，并用碘液覆蓋約1 min；滴加95%酒精，脫色約30 s，立即水洗；最后，用番紅液復染約1 min，水洗；干燥后，用油鏡觀察。鏡檢結果為革蘭氏陰性、兩端鈍圓的小桿菌，單個或成對存在（圖5）。符合大腸桿菌形態特征。4.3 PCR診斷

將無菌采集的4個鴨頭送往南京農業大學動物醫學院進行PCR檢測。

4.3.1 樣品處理 將鴨頭接種于血-麥康凱平板上，放置 CO2 培養箱37 ℃培養24～48 h，培養基上長出許多菌落，見圖6。

4.3.2 PCR檢測 引物設計與合成：以鴨疫里默氏桿菌ompA基因為模板設計種屬特異性引物，引物序列：F： TTAACTAAGAACTTTG，R： CAGATGCAGCTCTTT，預期擴增片段大小684 bp，引物由北京擎科生物有限公司合成。

PCR反應條件：預變性95 ℃ 5 min，變性95 ℃ 30 s，退火55 ℃ 30 s，延伸72 ℃ 15 s，循環30次，最后72 ℃再延伸7 min。取PCR產物經1%瓊脂糖凝膠電泳，以Marker 2000作為標準DNA分子量，觀察擴增片段大小。

PCR檢測結果：結果顯示在2-4和4所在的684 bp處有一特異性條帶，與預期片段大小一致。結果見圖7。

根據血-麥分離培養結果和PCR鑒定結果，判斷4個送檢的鴨頭樣品中有2個存在鴨疫里默氏桿菌。

4.4 診斷結果

根據臨床癥狀、病理變化以及實驗室診斷結果，最終確認此次番鴨場發病是大腸桿菌和鴨疫里默氏桿菌混感引起。

5 藥敏試驗

將經過分離純培養的菌株使用K-B紙片法進行藥敏試驗，37 ℃培養 24 h，測量氨芐西林、鏈霉素、氟苯尼考、磷霉素、利福平等15種藥物藥敏紙片的抑菌圈直徑大小，結果按美國臨床和實驗室標準協會 （ CLSI） 的標準判斷。藥敏試驗結果顯示，該菌對環丙沙星、氧氟沙星和磷霉素比較敏感。藥敏試驗結果見表1。

6 小結與討論

6.1 經調查發現，此次鴨場發病主要是因為養殖戶盲目保溫致使棚內出現高溫高濕，以及未及時清除網床下面糞便，導致舍內環境惡劣而誘發。

6.2 大腸桿菌和鴨疫里默氏桿菌屬于條件性致病菌，在自然界和動物體內廣泛存在，當飼養管理不當、環境衛生差以及氣候突變、免疫接種等應激都會增加番鴨對這兩種菌的易感性。因此，加強飼養管理、防應激、改善環境衛生是預防大腸桿菌和鴨疫里默氏桿菌病的重要措施。

6.3 在臨床上，大腸桿菌對多種藥物耐藥，給防治帶來很大困難，因此用藥治療前應先進行細菌分離和藥敏試驗篩選高敏藥物。本試驗藥敏結果顯示，大腸桿菌對環丙沙星、氧氟沙星和磷霉素比較敏感，由于氧氟沙星已被禁止在所有動物中使用，可以選擇環丙沙星或磷霉素治療大腸桿菌。

7 治療

本次治療選用10%乳酸環丙沙星（1 L水加0.8 g）與硫酸粘菌素（1 L水添加0.6 g）集中混飲，每日1次，當餐用完，連用藥3 d；治療同時額外給病鴨補充優質維生素、微生態制劑，提高機體抵抗力和修復腸道粘膜；及時清除糞便，加強環境消毒，用聚維酮碘、戊二醛按1：300比例兌水交替噴灑使用，每日1次。鴨群死亡數得到控制，病情好轉，采食量明顯增加。