一例梅花鹿布氏桿菌病的診治

李文平，郭延輝，張 鴻，權心嬌，付曉霞，王雨千*

1.榆樹市畜牧總站，吉林榆樹 130400；2.長春市乾藝生物科技研究院，吉林長春 136100；3.吉林省畜牧獸醫科學研究院，吉林長春 130111；4.長春市農業科學院，吉林長春 130111

布氏桿菌病病原是布氏桿菌，該病是一種多種動物和人畜共患傳染病，不僅危害畜牧業發展而且損害人類健康，因此備受關注。而梅花鹿對牛、羊兩種類型的布氏桿菌最易感染。至今發現的病例中，以牛型占比最多，還沒有單獨的鹿型，這說明鹿布氏桿菌病應該是由其它動物傳播而發病，最可能就是從牛傳染給鹿。該病在一定條件下發生傳染，最主要經消化道或者是經皮膚傷口，或者是經過黏膜感染，可通過氣溶膠傳播，所以呼吸道也是傳染的一個重要渠道。動物或是人感染本病后，病菌主要侵害生殖系統和神經系統。感染公鹿通常發生睪丸炎和附睪炎，導致公鹿精子少，或是無精，從而失去配種能力。母鹿一般是發生流產和乳腺炎。母鹿流產大多是在第一胎，第二胎一般不表現流產癥狀，而是表現出胎兒弱小，或者畸形、病胎，仔鹿很難成活。分娩的物質和奶液中含有大量布氏桿菌病原。

伴隨牛、羊、豬和狗等動物布病被確診后，鹿的布氏桿菌病在1940 年被首次發現，并發展至今，全世界持續有報道的病例，并且該病發病率持續上升，發病的范圍逐漸擴大直至發展到170 多個國家。該病的致病力也發生了變異，變異方向向更隱蔽更大的范圍發展，這給全世界人民開展防治布氏桿菌病造成了很多的障礙和困難，也給全世界帶來了嚴重的經濟損失。筆者現將經歷的一例病例報告如下。

1 發病情況

2021 年5 月，在吉林省某鹿養殖戶的鹿群中，發現一頭初產的母鹿有生產癥狀，頻頻回顧腹部，四處游走，陰門有不清亮液體流出，過了2 h 還未產出，只有一個小蹄子時隱時現。決定助產，用吹針肌肉注射陸眠寧1 cm，母鹿在5 min 后麻醉臥倒后，術者雙手消毒并涂上液體石蠟后陰道探查，發現產道開口不全，打催產針后，手臂勉強伸進一半，發現有一只鹿腳可以碰到，將姿勢擺正，用產繩拴住鹿雙腿腕部，牽引助產，勉強牽引出仔鹿后，發現仔鹿已經死亡，有惡臭味，胎兒有敗血癥病變，胎衣有黃色膠樣浸潤。懷疑感染布氏桿菌，遂決定做布氏桿菌病檢測。

2 初步檢測

2.1 檢測原理

布氏桿菌抗體快速檢測試紙基于膠體金免疫層析技術。檢測時，樣品中的布氏桿菌抗體與膠體金包被的抗原結合形成抗原抗體復合物，并沿著試紙流向NC膜的另一端。當該復合物流到膜上的T區時，固定在膜上的特異性抗原捕獲該復合物并逐漸凝集成一條可見的T 線。C 線出現則表明免疫層析發生，即試紙有效；T 線出現則表明樣品中含有布氏桿菌抗體。

2.2 保存和穩定性

試紙卡于室溫陰涼干燥處保存，不可冷凍，避免陽光直曬，自生產日期起18 個月內有效。

2.3 測試步驟

2.3.1 采血1 mL，1 500 轉/min，離心(樣品若不能立即測試，應冷藏保存，超過24 h，應冷凍保存)。

2.3.2 將未開封的試紙卡和檢測樣品恢復至室溫。

2.3.3 用吸管吸取血清，向平坦放置的試紙卡加樣孔中緩慢滴入1 滴。

2.3.4 取出試紙卡包裝中的稀釋液，用吸管吸取，向試紙卡的加樣孔緩慢滴入2 滴。

2.3.5 5 min 判斷結果，10 min 后的結果無效。2.4 結果判斷

陽性：C 線顯示紅色的色帶，T 線也顯示紅色的色帶，無論顏色深淺結果均判斷為陽性。

陰性：C 線顯示紅色的色帶，T 線不顯示紅色的色帶，判為陰性。無效：C 線不顯示紅色的色帶，無論T 線是否顯示紅色的色帶，該試紙均判為無效。

該母鹿經檢測結果為陽性，初步判斷該母鹿感染了布氏桿菌病。

3 實驗室檢測

鑒于布氏桿菌病有可能由實驗室感染，所以，按照規定凡涉及本病的樣本檢測，均應在生物安全2 級實驗室進行，凡涉及本菌的培養，則需要在生物安全3 級實驗室內操作。因條件有限，該病細菌學檢查沒有去做。

3.1 血清學檢查

用已知抗體可以鑒定分離菌是否為布氏桿菌及其定型。普遍和實用的檢測方式目前還是依賴于血清學檢測。通常抗體在動物感染7 ～15 d 后出現。臨床癥狀出現后，證明感染已經達到可以檢測到抗體的時間。

首先利用虎紅平板凝集試驗（RBPT）檢測，虎紅平板凝集試驗使用的虎紅抗原（pH3.65 左右），能抑制引起非特異性反應的IgM 和增強特異性IgG的活性，特異性優于試管凝集試驗。一般血清凝集價達到1:100 時判為陽性。操作方法：病鹿頸靜脈采血5 mL 左右放置于試管中并離心，待分離血清后，在水浴鍋滅活后冷藏冰箱保存備用。經檢測該樣品結果為陽性。

3.2 ELISA 復檢

采取母鹿的全血5 mL,室溫自然凝固10 min，離心15 min（2 000 轉/min），小心收集上清液，保存過程中如果出現沉淀，再離心取上清液。用該樣本，采用ELISA 方法檢測布氏桿菌抗體檢測，檢測結果陽性。通過畜主詢問，得知該母鹿未接種過布氏桿菌疫苗。

綜合以上試驗檢測及臨床癥狀，可以判斷該鹿感染了布氏桿菌病野毒,其傳播途徑未知。

4 處理方法

4.1 該母鹿4 歲，初產母鹿，分析是近半年以來該母鹿感染了布氏桿菌病，除本次發生流產、難產癥狀以外，未發現明顯的其它癥狀。該鹿體重正常，在難產前經飼養員回憶，有過吃料不積極的現象，喜趴臥，有時在圈舍內疾走，總體表現癥狀不夠明顯。

4.2 首先將該圈鹿隔離飼養，將該圈原地隔離，周圍相鄰圈舍內鹿全部清空，保持該圈鹿和其它鹿不接觸；有專門的飼喂人員、飼喂的飼料，以及用具都單獨區分出來使用。

4.3 對該圈舍全體鹿采用布氏桿菌試紙條做布氏桿菌檢測，其中又發現一例陽性，經虎紅平板凝集試驗（RBPT）和ELISA 進一步檢測，確診該鹿也感染布氏桿菌病。4.4 因為布氏桿菌病是國家乙類傳染病，無特殊治療藥物，動物感染后，只能控制癥狀，并防止疾病傳播感染其它動物。所以，對患病的兩只母鹿做無公害處理。

4.5 對產出的流產胎兒、胎衣、羊水和少量產道分泌物通過深埋的方式進行處理。對全圈舍用3%的火堿徹底消毒，連續消毒3 d；取漂白粉2 kg，加水8 kg，充分攪勻，即為20%的漂白粉混懸液，消毒鹿糞及糞溝，連用3 d。

4.6 10 d 后，對該圈母鹿再做一次布氏桿菌試紙條檢測，結果全部是陰性。一個月后又檢測，還是陰性。以后每隔3 個月做一次布病檢測，直至連續6 個月內無新增的病例。同時，叮囑飼養人員重點觀察，并戴好口罩手套，做好個人防護。

5 討論

5.1 布氏桿菌病目前檢測手段主要有病原檢測、虎紅平板凝集（RBT）、試管凝集（SAT）、補體結合反應（CFT）、全乳環狀試驗、免疫層析（膠體金、銀光微球、彩色微球）、瓊脂擴散、熒光偏振（FPA）、ELISAD 等方法。目前臨床最實用就是膠體金試紙檢測技術和虎紅平板凝集方法，該方法優點是價格低、使用簡單、可操作性強；目前最先進的方法是熒光偏振的方法，該方法可以將免疫產生的抗體和野毒產生的抗體區別開來，從而辨別出該動物是否感染了布氏桿菌病野毒，特異性檢出率可以達到99.1%。

5.2 主要采取以預防接種布氏桿菌疫苗為主，檢疫隔離或淘汰為輔是我國布氏桿菌病的主要防制措施。當前使用比較多的疫苗有牛型19 號弱毒活苗和豬源菌株經培養基連續傳代致弱的S2 株弱毒活菌苗；滅活苗有牛布氏桿菌45/20 和羊布氏桿菌53H38 菌苗，鹿群防制布氏桿菌主要接種布氏桿菌S2 菌苗。

布氏桿菌病的疫苗研究還存在許多的問題。弱毒疫苗要注意免疫抑制問題，也就是說弱毒疫苗并非菌數越多產生的免疫效果越好。布氏桿菌的特點是會使機體產生免疫抑制，從而使機體在免疫后處于免疫低水平狀態，繼而繼發其它疾病。

無論是野毒感染還是弱毒疫苗免疫，其導致的免疫抑制問題會存在，必須值得注意，這也是該病流行多年，具有難治愈、難凈化、傳染快、隱形傳播的一種原因，值得獸醫臨床上考慮。

5.3 消滅或控制布氏桿菌病的傳播，首先應用疫苗免疫。在疫苗免疫的同時兼顧大型養殖鹿場的疾病凈化，切斷傳播的途徑，有規律的檢測梅花鹿群體，有計劃的撲殺病鹿，對易感染人群做好個人防護。這些所有的工作，也都需要大量的布病凈化技術培訓、推廣以及政策的引導和支持。