學齡前珠蛋白生成障礙性貧血基因攜帶者外周血淋巴細胞亞群比例分析*

孔義華,王顯河,師海瑞,吳秋陽,吳治平,歐 陽,鄒遠芹

貴州醫科大學第二附屬醫院:1.檢驗科;2.口腔科,貴州凱里 556000

珠蛋白生成障礙性貧血(簡稱地貧)是一種遺傳性溶血性疾病,在我國南方特別是廣西最為高發,好發于嬰幼兒。可采用血紅蛋白電泳等血液學常規手段檢出中間型和重型地貧,但無癥狀地貧基因攜帶者通常在日常生活和工作中很難被發現[1-3],這部分患兒多以感染、發燒等癥狀入院就診,這些癥狀極易誘發急性溶血發作,導致患兒生長發育受影響[4-6]。地貧的發生、轉歸與免疫功能密切相關,故監測學齡前兒童地貧基因攜帶者的免疫功能是否存在異常就顯得尤為重要,加之有癥狀的患兒需反復、長期輸血維持生命,可能造成患兒免疫功能異常,但這方面鮮有報道。目前臨床評價機體免疫功能是否異常,主要是通過觀察其淋巴細胞亞群水平。基于此,本研究探討了學齡前地貧基因攜帶者外周血淋巴細胞亞群水平變化。現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2020年1月至2022年1月學齡前地貧基因攜帶者29例作為研究組,其中男17例,女12例;年齡1～5歲,平均(2.72±1.49)歲。另選擇本院同期學齡前非地貧基因攜帶者30例作為對照組,其中男21例,女9例;年齡3個月至5歲,平均(2.36±1.38)歲。研究組納入標準: (1)年齡≤6歲 ;(2)確診為攜帶地貧基因(包括輸血治療患兒);(3)β地貧基因CD41-42、CD43、IVS-II-654、CD17、CD14-15、-28、-29、-30、-32、CD71-72、βE、IVS1-1、CD27-28、CAP、Int、CD31、IVS1-5檢出為陽性;(4)α地貧基因--SEA、- α3.7、- α4.2、CS、QS、WS檢測為陽性。排除標準:除攜帶地貧基因外合并其他疾病。兩組患兒性別、年齡比較,差異無統計學意義(P>0.05),有可比性。

1.2方法 (1)分別向已編號的流式管中加入 50 μL 充分混勻的抗凝全血。(2)加入20 μL CD3+/CD8+/CD45+/CD4+/CD16+/CD56+/CD19+,渦旋混勻,室溫避光放置 15～20 min。流式細胞儀-6色試劑(BD生物科技有限公司)包括小鼠抗人CD3-FITC、小鼠抗人CD4-PE-Cy7、小鼠抗人CD8-APC-Cy7、小鼠抗人CD45-PerCP、小鼠抗人CD19-APC。(3)溶血: FACS Lysing Solution(按說明書進行原液10倍純凈水稀釋后使用)稀釋的溶血素每管加450 μL混勻后避光室溫放置,溶血15 min。(4)24 h內上機用 FACSCanto Clinical 軟件獲取 2 500 個淋巴細胞進行檢測,上機前應充分混勻。

1.3觀察指標 (1)觀察兩組T淋巴細胞亞群比例;(2)觀察兩組自然殺傷(NK)細胞比例;(3)觀察兩組B淋巴細胞比例。

2 結 果

2.1兩組T淋巴細胞亞群比例比較 兩組CD3+T淋巴細胞比例比較,差異無統計學意義(P>0.05);研究組CD3+CD4+T淋巴細胞比例和CD4+/CD8+比值低于對照組,而CD3+CD8+T淋巴細胞比例高于對照組,差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組T淋巴細胞亞群比例比較

2.2兩組CD16+CD56+NK細胞、CD19+B淋巴細胞比例比較 研究組CD16+CD56+NK細胞比例低于對照組(P<0.05);研究組CD19+B淋巴細胞比例高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組CD16+CD56+ NK細胞、CD19+B淋巴細胞比例比較

3 討 論

地貧是世界范圍內較常見的常染色體隱性單基因遺傳病,已被世界衛生組織列為危害人類健康的6種常見病之一,其主要是珠蛋白基因異常導致血紅蛋白中的一種或幾種珠蛋白肽鏈合成減少或不能合成,使血紅蛋白的α鏈和β鏈蛋白比例失衡,導致急、慢性進行性溶血性貧血,嚴重影響患兒身心健康[7-13]。有癥狀的地貧患兒需定期輸血維持生命,但長期輸血會造成患兒體內鐵超負荷,損害免疫系統,如降低補體系統活性、抑制中性粒細胞的吞噬作用等[14-17]。而這種疾病不僅造成患兒貧血、黃疸及生長遲緩等,甚至會產生肝脾腫大、髓外造血等嚴重并發癥,嚴重者甚至致死或致殘。同時患兒多次輸血治療,機體受抗原反復剌激后,免疫細胞處于疲憊狀態,易出現免疫反應異常,引起反復感染等。因此,檢測淋巴細胞亞群比例評估有癥狀和無癥狀地貧基因攜帶者的免疫狀態就顯得尤為重要。

淋巴細胞亞群作為機體免疫系統的重要組成部分,參與機體的體液免疫與細胞免疫反應。淋巴細胞亞群比例主要用于評估機體的免疫狀態,淋巴細胞總數與疾病發生及免疫功能強弱有關。正常情況下,淋巴細胞亞群比例在周圍組織中相對穩定,但若機體出現免疫狀態變化,則會導致淋巴細胞亞群比例隨之發生相應變化[18]。

檢測淋巴細胞亞群比例是檢測淋巴細胞中的CD3+T淋巴細胞(包含CD3+CD4+T淋巴細胞和CD3+CD8+T淋巴細胞)、CD19+B、CD16+56+NK 3類細胞亞群水平。目前有關學齡前地貧基因攜帶者淋巴細胞亞群比例及免疫狀態評估的研究較少見。有研究發現,成人的地貧患者與健康對照組相比,其CD3+T淋巴細胞比例、CD4+T淋巴細胞比例、CD4+/CD8+比值顯著低于對照組[19],而本研究結果發現學齡前地貧患兒CD3+T淋巴細胞比例與對照組比較,差異無統計學意義(P>0.05),CD3+CD8+T淋巴細胞和CD19+B淋巴細胞比例高于對照組,差異均有統計學意義(P<0.05)。這可能與患兒長期免疫系統功能降低,易受到外來病原體感染,進而刺激B淋巴細胞和CD3+CD8+T淋巴細胞增殖分化,其中CD19+B淋巴細胞增殖分化產生較多免疫球蛋白抵御感染。

本研究結果顯示,CD16+CD56+NK細胞、CD3+CD4+T淋巴細胞比例和CD4+/CD8+比值低于對照組,差異均有統計學意義(P<0.05),提示學齡前攜帶地貧基因患兒的免疫功能降低,可能是地貧患兒反復感染的原因之一。

檢測學齡前地貧基因攜帶者淋巴細胞亞群比例可以動態掌握其免疫狀態,并及時調整患兒抗感染及營養補充方案,避免患兒因反復感染和免疫力低下造成生長遲緩及臟器受損等。

綜上所述,學齡前地貧基因攜帶者外周血淋巴細胞亞群比例與健康兒童之間存在明顯差異,表明學齡前地貧基因攜帶者的免疫功能存在紊亂。臨床加強對CD3+CD4+T淋巴細胞和CD3+CD8+T淋巴細胞、CD16+56+NK、CD19+B淋巴細胞比例的檢測,監測其比例變化,有利于及時評估患兒免疫狀況并進行有針對性的干預治療,對降低患兒的感染風險、提高其生存質量意義重大。