血清血小板反應蛋白2、尿素氮及肌酐水平與增殖性糖尿病視網膜病變相關性研究

覃彥平 黃紅波 何建明 韓光杰 柯柳華 覃振仲

1柳州市紅十字會醫院檢驗科，柳州 545001；2柳州市紅十字會醫院眼科，柳州 545001；3柳州市紅十字會醫院內科，柳州 545001；4柳州市中醫醫院檢驗科，柳州 545001

糖尿病是一種常見的以高血糖為特點的代謝性疾病［1］。長期的糖尿病會引起各種并發癥，糖尿病視網膜病變（diabetic retinopathy，DR）是其中一種以視網膜微血管炎性病變為特點的并發癥。隨著DR病情不斷進展，患者血-視網膜屏障受到損傷，新血管增生導致增殖性糖尿病視網膜病變（proliferative diabetic retinopathy，PDR）的發生。嚴重的PDR會對患者視功能造成不可逆轉的損害。PDR的發病機制非常復雜，影響因素眾多。目前，已有許多細胞因子與PDR發病相關的文獻報告［2-3］，而血小板反應蛋白2（thrombospondin-2，TSP-2）是一種具有抗血管生成、抗炎等功能的細胞因子［4］。本地區患者血清TSP-2水平與PDR發生是否相關尚有待證實。另外，繼發于糖尿病的全身性微血管損傷不僅會引發PDR，還會影響患者的腎臟功能。目前，腎功能的常用監測指標為血清尿素氮（urea nitrogen，BUN）、肌酐（creatinine，Cr）。本研究對血清TSP-2、BUN及Cr水平與PDR的相關性進行檢測分析，以期揭示這些指標與PDR發病的關系，結果報道如下。

資料與方法

1.一般資料

研究對象為柳州市紅十字會醫院收治的2型糖尿病（type 2 diabetes，T2DM）患者和門診正常體檢者。T2DM患者共117例，52例不伴PDR患者為觀察1組［男26例，女26例，年齡60（33，69）歲］，65例伴PDR患者為觀察2組［男31例，女34例，年齡58（37，79）歲］。T2DM診斷標準按照2014年糖尿病視網膜病變臨床診療指南進行［5］。正常對照組（對照組）共52例，男25例，女27例，年齡56（40，87）歲，均為門診體檢健康合格的正常人，無心、肝、腎等重要臟器疾患，無糖尿病病史。排除標準：排除1型糖尿病及其他特殊類型糖尿病患者、急慢性感染、甲狀腺等內分泌代謝疾病及惡性腫瘤等。3組一般資料比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05）。本研究已獲柳州市紅十字會醫院倫理委員會審核批準，本研究方案及試驗標本的獲取均符合倫理學原則。

2.方法

采取試驗者空腹靜脈血標本，分離血清后檢測。（1）血清TSP-2測定：采用酶聯免疫分析法，試劑盒由上海聯碩生物工程有限公司提供，嚴格按說明書進行實驗操作。在檢測標本的同時做空白對照樣品、陰性對照樣品及標準品，測量各孔的吸光度（OD值）。根據標準品濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。（2）血清BUN、Cr水平測定：采用羅氏生化分析儀，使用其配套試劑進行檢測。

3.觀察指標

觀察并比較3組研究對象的血清TSP-2、BUN、Cr水平。

4.統計學處理

應用SPSS 20.0軟件進行統計學分析，不符合正態分布的計量資料采用M（P25，P75）表示，采用Mann-WhitneyU檢驗。多組間比較采用單因素方差分析；計數資料采用χ2檢驗。OD值計算標準曲線采用ELISACalc軟件。P＜0.05表示差異有統計學意義。

結果

對照組、觀察1組及觀察2組的TSP-2、BUN、Cr水平見表1。觀察2組與對照組TSP-2值比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；觀察1組與觀察2組、對照組TSP-2值兩兩相比較，差異均無統計學意義（均P＞0.05）。觀察2組與觀察1組、對照組BUN值兩兩相比較，差異均有統計學意義（均P＜0.05）；觀察1組與對照組BUN值相比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。觀察2組與觀察1組、對照組Cr值兩兩相比較，差異均有統計學意義（均P＜0.05）；觀察1組與對照組Cr值比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

表1 3組研究對象的TSP-2、BUN、Cr水平比較[M（P25，P75）]

討論

當前，嚴重的PDR已成為我國主要的致盲性眼疾。DR的誘發因素包括病程、年齡、高血糖、高血壓等，其發病的主要因素有山梨醇和糖基化終末產物的積聚、氧化應激、蛋白激酶C的激活及炎癥［6-7］。這些因素均嚴重影響視網膜血管自動調節功能，導致血管調節功能喪失，血管基底膜增厚，細胞外基質蛋白降解，周細胞缺失，出現無功能血管。而毛細血管非灌注造成視網膜缺血、缺氧，缺氧的視網膜組織釋放促血管增殖物質，引起內皮細胞增殖、遷移，繼而出現微血管芽，生成新血管［7-8］引發PDR。

TSP-2是血小板反應蛋白家族中的重要成員之一，屬于上皮來源組織中的細胞外基質糖蛋白［9］。TSP-2由成纖維細胞、內皮細胞、視網膜上膜等多類型細胞分泌。TSP-2對Ca+敏感，具有二硫鍵維系的三聚體結構。TSP-2可結合各種配體，如纖維粘連蛋白、纖溶酶原激活劑等，參與細胞黏合、遷移和增殖等細胞行為。TSP-2具有抑制血管生成、抗炎并維持細胞外基質完整性的作用。研究表明，TSP-2可明顯抑制促血管生成的血管內皮生長因子（VEGF）的表達，抑制VEGF的信號通路，從而抑制VEGF的生物活性，達到抑制血管化的目的［10］。TSP-2通過與CD47相互作用，激活抗炎調節性T細胞來發揮抗炎作用。TSP-2還可通過抑制降解細胞外基質的基質金屬蛋白酶2、9來維護細胞外基質完整性［9］。本研究發現，觀察2組的TSP-2總體水平較對照組低，這兩組TSP-2值比較差異有統計學意義（P＜0.05）。推測多數觀察2組患者由于病情持續進展，TSP-2分泌減少，其抗炎、維持細胞外基質完整性等作用減弱，VEGF信號通路抑制及生物活性作用下降，導致VEGF促進PDR患者視網膜血管增生；少數患者TSP-2升高可能因病程等不同，抑制視網膜血管化的能力也不同。

有研究者證實隨著DR嚴重程度的增加，腎臟功能也隨之下降［11］。Wu等［12］研究發現血清BUN、年齡≤45歲和吸煙是中國東北地區PDR患者進行性纖維血管增殖的獨立危險因素。Zhang等［13］發現較高水平的收縮壓、高水平的BUN和Cr均與DR的發病有關。本研究顯示血清BUN及Cr水平在觀察2組與觀察1組、對照組兩兩相比較時，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。本結果提示隨著DR病情進一步發展到PDR時，患者血清BUN和Cr水平逐漸增加，腎臟功能受損日益嚴重。

綜上所述，在PDR患者中血清TSP-2、BUN及Cr水平的變化均與PDR的疾病進展有關。因此，臨床醫生應注意檢測PDR患者TSP-2、BUN及Cr水平，將有助于防治PDR。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻聲明覃彥平：設計試驗，實施研究，采集數據，分析/解釋數據，起草文章，統計分析，獲取研究經費；黃紅波：采集數據，分析/解釋數據，統計分析，技術、材料支持；何建明：對文章的知識性內容作批評性審閱，統計分析，行政、技術支持指導；韓光杰：采集數據，分析/解釋數據，統計分析，技術、材料支持；柯柳華：分析/解釋數據，統計分析；覃振仲：實施研究，采集數據