非小細(xì)胞肺癌患者外周血T 淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)及其臨床意義

董惠霞，王 茜

（1.南京市胸科醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 南京 210029；2.南京醫(yī)科大學(xué)附屬腦科醫(yī)院胸科院區(qū)檢驗(yàn)科，江蘇 南京 210029）

肺癌（lung cancer）是目前世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一[1]，其發(fā)病率和病死率居惡性腫瘤首位。T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的特異性細(xì)胞免疫為機(jī)體抗腫瘤免疫的主要方式，T 淋巴細(xì)胞及其亞群可反映機(jī)體細(xì)胞免疫的水平[2-4]。當(dāng)機(jī)體存在免疫功能紊亂時(shí)，免疫細(xì)胞則不能有效的識別、排斥和殺滅腫瘤細(xì)胞[5]，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。根據(jù)病理類型的不同可將肺癌分為小細(xì)胞肺癌（Small cell lung cancer，SCLC）和非小細(xì)胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC），非小細(xì)胞肺癌包括鱗癌和腺癌。本研究擬通過比較非小細(xì)胞肺癌患者與健康人群外周血T 淋巴細(xì)胞亞群的水平，以及不同病理類型非小細(xì)胞肺癌的外周血T 淋巴細(xì)胞亞群水平，進(jìn)一步了解機(jī)體細(xì)胞免疫的狀態(tài)，為患者病情的診療提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016 年6 月-2017 年9 月在南京市胸科醫(yī)院就診經(jīng)病理學(xué)和細(xì)胞學(xué)確診為非小細(xì)胞肺癌的患者30 例作為非小細(xì)胞肺癌組（NSCLC組）。根據(jù)病理分型分為腺癌22 例，鱗癌8 例。30 例患者中男21 例，女9 例；年齡29～82 歲，平均年齡（49.03±6.18）歲。同時(shí)選取同期健康體檢者和志愿者20 名作為健康對照組。其中男15 名，女5 名；年齡31～57 歲，平均年齡（46.10±6.29）歲。兩組年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)，所有參與者均知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑與儀器 貝克曼公司的Tritest CD4FITC/CD8PE/CD3PerCP 試劑、免洗溶血素、0.9%生理鹽水和BECKMAN COULTER cytomics FC 500 流式細(xì)胞儀。

1.2.2 標(biāo)本預(yù)處理 清晨抽取患者空腹外周靜脈全血2 ml 至EDTA-K2 抗凝的真空采血管中。另取一支12×75 mm 試管，在其中加5 μl Tritest CD4-FITC/CD4-RD1/ CD8-ECD/CD3-PC5 試劑，再加50 μl EDTA-K2 抗凝的患者外周靜脈血樣本，渦旋混勻后，室溫避光孵育20 min。加入250 μl 紅細(xì)胞裂解液試劑，渦旋混勻，室溫避光20 min。待溶血后加入250 μl 生理鹽水平衡。

1.2.3 標(biāo)本檢測 依次檢查鞘液桶、廢液桶、清洗液桶完畢后，打開cytomics FC500 流式細(xì)胞儀的電源，啟動計(jì)算機(jī)。啟動流式細(xì)胞儀。打開電源箱門，檢查并確認(rèn)空氣過濾器和真空過濾器干燥無水、汽水分離器液體不超過1/3、真空聚集槽液體不超過1/4、檢查系統(tǒng)的真空計(jì)量表，確認(rèn)讀數(shù)在-30～-17 英寸汞柱，檢查系統(tǒng)的壓力計(jì)量表，確認(rèn)讀數(shù)在28～32 PSI后，執(zhí)行灌注排除管路中氣泡。最后激光器預(yù)熱10～15 min，待儀器主機(jī)面板指示燈變?yōu)榫G色后且提示“等待樣本”后，可以開始實(shí)驗(yàn)。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組外周血T 淋巴細(xì)胞及其亞群表達(dá)情況，比較腺癌和鱗癌患者外周血T 淋巴細(xì)胞及其亞群表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)或單因素方差分析，以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NSCLC 組和健康對照組外周血T 淋巴細(xì)胞及其亞群表達(dá)比較 NSCLC 組CD3+、CD4+細(xì)胞水平低于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；NSCLC組CD8+細(xì)胞水平略高于健康對照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。NSCLC 組CD4+/CD8+低于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1、圖1。

圖1 NSCLC 組與健康對照組CD3+、CD4+和CD8+T 細(xì)胞表達(dá)的流式細(xì)胞圖

表1 NSCLC 組和健康對照組外周血T 淋巴細(xì)胞及其亞群表達(dá)比較（±s）

表1 NSCLC 組和健康對照組外周血T 淋巴細(xì)胞及其亞群表達(dá)比較（±s）

2.2 NCSLC 組不同病理分型與健康對照組T 淋巴細(xì)胞水平比較 腺癌和鱗癌患者CD3+、CD4+水平均低于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；腺癌、鱗癌患者CD8+細(xì)胞水平均略高于對照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。腺癌與鱗癌患者T 淋巴細(xì)胞亞群水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。腺癌患者CD4+/CD8+比值低于健康對照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；鱗癌患者CD4+/CD8+比值低于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 NCSLC 組不同病理分型與健康對照組T 淋巴細(xì)胞水平比較（±s）

表2 NCSLC 組不同病理分型與健康對照組T 淋巴細(xì)胞水平比較（±s）

注：與健康對照組比較，*P＜0.05

3 討論

非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后與機(jī)體的免疫功能有密切的聯(lián)系。其中T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫起著重要作用。T 淋巴細(xì)胞及其亞群CD3+、CD4+T 細(xì)胞能夠通過分泌細(xì)胞因子活化并誘導(dǎo)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和NK 細(xì)胞發(fā)生免疫應(yīng)答[6]，進(jìn)而發(fā)揮抗腫瘤功能[7-9]。CD4+T 細(xì)胞還可以分泌IL-2 作為第二信號活化CD8+T 細(xì)胞，然后參與對抗腫瘤的免疫應(yīng)答[10]。流式細(xì)胞測定技術(shù)因具有可以直接測定腫瘤患者體內(nèi)T 淋巴細(xì)胞亞群的水平和比值[11]、客觀反映患者腫瘤機(jī)體細(xì)胞免疫的狀態(tài)等優(yōu)點(diǎn)而廣泛用于臨床實(shí)踐[12]。

本研究發(fā)現(xiàn)，非小細(xì)胞肺癌患者外周血中T 淋巴細(xì)胞及其亞群CD3+、CD4+比例以及CD4+/CD8+均低于健康對照組，CD8+細(xì)胞水平則無明顯改變，這與文獻(xiàn)報(bào)到的結(jié)論相一致[13]。研究還發(fā)現(xiàn)，無論是腺癌和鱗癌患者，其CD3+、CD4+水平均低于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這與前述非小細(xì)胞肺癌患者的CD3+、CD4+水平均低于健康對照組的結(jié)論相一致。腺癌和鱗癌患者的CD8+細(xì)胞水平略高于健康對照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），腺癌與鱗癌患者的T 淋巴細(xì)胞亞群水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。但鱗癌患者的CD4+/CD8+較腺癌下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），具體原因尚不明確。但有研究表明肺腺癌患者的外周血T 淋巴細(xì)胞亞群水平對預(yù)測治療效果及預(yù)后具有一定的價(jià)值[14]。CD4+/CD8+比值包含了兩種類型的T 淋巴細(xì)胞，更能反映CD4+和CD8+的綜合作用情況[15]。有研究表明腫瘤患者的CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞水平以及CD4+/CD8+比值存在一定程度的失衡。近年來，有研究表明存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的非小細(xì)胞肺癌患者CD4+T細(xì)胞水平降低而CD8+T 細(xì)胞水平升高。隨疾病進(jìn)展，輔助機(jī)體完成抗腫瘤免疫的輔助性T（CD4+T）細(xì)胞表達(dá)明顯降低，抑制免疫反應(yīng)及抗體形成的細(xì)胞毒性T（CD8+T）細(xì)胞卻顯著升高[16]。但對于處于化療敏感期的非小細(xì)胞肺癌患者，CD4+細(xì)胞水平明顯上升而CD8+細(xì)胞水平下降[17，18]。因此，檢測T 淋巴細(xì)胞及其亞群的水平對判斷非小細(xì)胞肺癌治療效果和預(yù)后有著積極的意義[19，20]。

綜上所述，非小細(xì)胞肺癌患者機(jī)體細(xì)胞免疫功能嚴(yán)重受損，無論是腺癌還是鱗癌患者外周血T 淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+水平均低于健康人。因此，臨床治療非小細(xì)胞肺癌應(yīng)采取針對提高機(jī)體細(xì)胞免疫功能的方案，并將檢測患者T 淋巴細(xì)胞亞群的變化作為評價(jià)療效和預(yù)后的參考指標(biāo)。