不同頻次電針對壓力性尿失禁大鼠膀胱尿道功能的影響?

蔡明星,楊 丹,莫 倩,張薇薇,丁 斗,甘 媛,申莉鑫

(1.貴州中醫(yī)藥大學,貴陽 550000;2.遵義醫(yī)藥高等?？茖W校,貴州 遵義 563000)

壓力性尿失禁(stress urinary incontinence,SUI)是泌尿外科的常見疾病,多見于女性,嚴重影響患者的生活質(zhì)量[1-3]。膀胱尿道功能的正常運行需要大腦、脊髓、盆底肌肉組織及周圍神經(jīng)的共同參與[4],盆神經(jīng)、陰部神經(jīng)、盆底相關(guān)組織受損導致膀胱尿道功能失衡,是SUI發(fā)生的主要危險因素[5-7]。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)針刺(電針)能夠通過“體表-臟腑”刺激參與神經(jīng)-免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié),為其治療臟腑相關(guān)疾病提供了科學依據(jù)[8-9]。有研究發(fā)現(xiàn)電刺激骶部神經(jīng)可拮抗SUI癥狀,改善膀胱功能[10-11]。還有研究證明刺激體表腧穴可引起內(nèi)臟器官生理病理變化(腧穴-臟腑),對內(nèi)臟功能起到調(diào)節(jié)作用[12-14]。中醫(yī)臨床研究發(fā)現(xiàn)固定治療周期介入下,電針刺激體表可優(yōu)化膀胱及控尿功能,從而改善SUI的癥狀[15-16]。針刺(電針)治療SUI的療效已得到廣泛認可,但“不同頻次電針”對SUI患者膀胱尿道功能的影響尚不清楚。針刺“量-效”關(guān)系揭示針刺效應(yīng)與留針時間的相關(guān)性,說明針刺(電針)留針時間可能是針刺(電針)正效應(yīng)的重要因素之一[17-18]。本次研究基于“針刺時效性”,觀察“不同頻次電針”對SUI模型大鼠膀胱尿道功能的調(diào)控作用,擬揭示電針的時間效應(yīng)機制,為擇時電針治療SUI提供參考。本研究已通過貴州中醫(yī)藥大學倫理委員會審查,編號:2016097。

1 材料

1.1 動物

SPF級SD 雌性大鼠 60 只,體質(zhì)量(200±20)g,由北京華阜康生物科技有限公司提供,動物許可證號:SCXK (京) 2019-0008。飼養(yǎng)環(huán)境為濕度50%,溫度25 ℃,晝夜周期12 h,自由飲水、攝食,所有大鼠正式實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d。

1.2 主要試劑與儀器

氨基甲酸乙酯(貨號30191228),國藥集團化學試劑有限公司;異氟烷(貨號20191901),深圳市瑞沃德生命科技有限公司;1%呂氏堿性美藍染色液(貨號PH1337)、青霉素G鈉鹽(貨號P8420),貴州凱信生物科技有限公司。

BIOPAC MP160型AcqKnowledge 5.0數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)、DA100C型放大器、TSD104A型壓力傳感器,北京普升達科貿(mào)有限公司;WZS-50F6型微量注射泵,浙江史密斯醫(yī)學儀器有限公司;BYC-310型藥品冷藏柜、DHP-9054型熱恒溫培養(yǎng)箱,山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司;69001型恒溫控制板,深圳市瑞沃德生命科技有限公司;HGZF-101-1型電熱鼓風干燥箱,上海躍進醫(yī)療器械有限公司;華佗牌SDZ-Ⅱ型電針儀、0.20 mm×25 mm一次性針灸針,蘇州醫(yī)療用品廠有限公司。

2 方法

2.1 分組

采用隨機數(shù)字表法將60只雌性大鼠隨機分為正常組12只、模型組48只,除正常組大鼠外均給予卵巢切除+陰道擴張造模。造模成功后,再將48只雌性模型大鼠隨機分為SUI模型組、電針治療(電針)A組、電針治療B組和電針治療C組,每組各12只。

2.2 造模

2.2.1 卵巢切除 大鼠采用異氟烷誘導麻醉后,再使用10% 氨基甲酸乙酯注射液進行腹腔注射麻醉(10 mL/kg),刺激大鼠大腿如未出現(xiàn)疼痛反射,但存在角膜反射,則視為麻醉成功。將大鼠側(cè)臥位放在恒溫控制板上,鋪墊無菌紗布,側(cè)腹部常規(guī)消毒、備皮,確定大鼠后肢肌肉最高點與最下方肋骨弓緣中點,以兩點連線的中點為中心,沿背部后正中線作1.0～1.5 cm的縱行皮膚切口。沿子宮角向上探及卵巢,分離、結(jié)扎后切除雙側(cè)卵巢,縫合創(chuàng)口,用40萬單位青霉素溶于1 mL無菌0.9 % 氯化鈉溶液腹腔內(nèi)沖洗預防感染,然后依次縫合肌肉和皮膚[19]。

2.2.2 陰道擴張 卵巢切除后恢復7 d,模擬分娩使陰道擴張[20]。麻醉方法同上,大鼠仰臥固定于恒溫控制板上,操作者大拇指緩慢輕柔按壓大鼠下腹部,導尿排空膀胱尿液,陰道常規(guī)消毒,用8 F雙腔導尿管(頂部帶有氣囊)插入大鼠陰道2～3 cm,在氣囊內(nèi)注入4 mL 0.9% 氯化鈉溶液,行陰道縫合防止導尿管脫落,將大鼠骶尾部緊靠在手術(shù)臺邊,尿管下垂并用100 g砝碼進行懸吊,維持該狀態(tài)4 h后拔出尿管,術(shù)后以40萬單位青霉素腹腔注射預防感染[21]。

2.3 電針治療

造模成功后第2天開始電針治療。治療期間用異氟烷呼吸麻醉大鼠。正常組、SUI模型組大鼠正常飼養(yǎng),不給予任何治療干預。電針治療各組大鼠選取“次髎/中髎”穴(位于第2骶后孔中,約髂后上棘與背正中線之間)進行治療[22-23]。其中電針A組大鼠隔2日治療1次;電針B組大鼠隔1日治療1次;電針C組大鼠每日治療1次。針具均采用0.20 mm×25 mm毫針,垂直進針15 mm。電針儀參數(shù)設(shè)置:頻率2 Hz,疏密波,強度1 mA,時間持續(xù)20 min。治療周期均為2周。

2.4 指標檢測

2.4.1 儀器設(shè)置 本次實驗使用TSD 104A型壓力傳感器與大鼠膀胱相連,接入微量注射泵及1 mm硬膜醫(yī)用導管,注射器裝入0.9%無菌美藍氯化鈉溶液50 mL,排空導管內(nèi)空氣,注射速度設(shè)為12 mL/h,系統(tǒng)壓力調(diào)至為零。采用實驗動物生理數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)AcqKnowledge 5.0-DA 100C通道進行大鼠膀胱尿動力學數(shù)據(jù)收集。DA 100C參數(shù)設(shè)置如下,Gain:200; 10 HzLP:off; LP:300 Hz; HP:DC; Connected to:blood pressure。

2.4.2 檢測方法 各組大鼠先以異氟烷誘導呼吸麻醉,后改用10% 氨基甲酸乙酯腹腔注射麻醉,確保大鼠膀胱反射存在,排空尿液,仰臥于恒溫控制板上,碘伏消毒尿道口,將硬膜導尿管經(jīng)尿道口插入膀胱約3 cm,打開AcqKnowledge 5.0采集系統(tǒng),同時采用0.9%無菌美藍氯化鈉溶液行膀胱灌注,記錄各組大鼠尿動力學數(shù)據(jù)。本實驗于電針治療前后分別進行大鼠尿動力學檢測,記錄各組大鼠的基礎(chǔ)膀胱壓、漏尿點壓、最大膀胱容量、排尿時間間隔。

2.5 統(tǒng)計學方法

3 結(jié)果

3.1 不同頻次電針對SUI大鼠膀胱尿動力學的影響

電針治療前后,各組大鼠基礎(chǔ)膀胱壓比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。電針治療前,與正常組比較,SUI模型組大鼠漏尿點壓、最大膀胱容量、排尿時間間隔均顯著下降(P<0.01),提示造模成功。電針治療后,與正常組比較,SUI模型組大鼠漏尿點壓、最大膀胱容量、排尿時間間隔均顯著下降(P<0.01);與SUI模型組比較,電針A組、B組、C組大鼠漏尿點壓、最大膀胱容量、排尿時間間隔均顯著上升(P<0.05,P<0.01)。組內(nèi)與治療前比較,電針A組、B組、C組大鼠電針治療后漏尿點壓、最大膀胱容量、排尿時間間隔均明顯上升(P<0.05),見表1。

表1 各組大鼠膀胱尿動力學檢測指標比較

3.2 不同頻次電針對SUI大鼠漏尿點壓的影響

SUI狀態(tài)下,電針治療2周后,與電針A組比較,電針B組、電針C組大鼠漏尿點壓顯著上升(P<0.01);與電針B組比較,電針C組大鼠漏尿點壓明顯升高(P<0.05),見圖1。

注:與電針A組比較**P<0.01;與電針B組比較#P<0.05

3.3 不同頻次電針對SUI大鼠最大膀胱容量的影響

SUI狀態(tài)下,電針治療2周后,與電針A組比較,電針C組大鼠最大膀胱容量顯著上升(P<0.01),電針B組大鼠最大膀胱容量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);與電針B組比較,電針C組大鼠最大膀胱容量明顯上升(P<0.05),見圖2。

注:與電針A組比較**P<0.01;與電針B組比較#P<0.05

3.4 不同頻次電針對SUI大鼠排尿時間間隔的影響

SUI狀態(tài)下,電針治療2周后,與電針A組比較,電針B組、電針C組大鼠排尿時間間隔明顯延長(P<0.05);與電針B組比較,電針C組大鼠排尿時間間隔顯著延長(P<0.01),見圖3。

注:與電針A組比較*P<0.05,**P<0.01;與電針B組比較##P<0.01

4 討論

SUI屬于中醫(yī)學“遺溺”范疇,《素問·宣明五氣篇》記載“五氣所病……膀胱不利為癃,不約為遺溺”。SUI降低了女性的生活質(zhì)量[24],發(fā)病機制尚不清楚,但主要與年齡、盆底肌肉組織松弛、妊娠及陰道分娩、絕經(jīng)后雌激素水平減退、盆底神經(jīng)損傷、盆腔器官脫垂等相關(guān)[25-27]。下尿路的神經(jīng)調(diào)控機制復雜,各種傷害性刺激、損傷、化學刺激均可導致下尿路功能障礙,出現(xiàn)SUI、膀胱過度活動癥、慢性尿潴留等病證,且臨床一直缺乏特效療法。下尿路的外周神經(jīng)傳入機制與內(nèi)臟神經(jīng)活動密切相關(guān),具體的神經(jīng)傳入主要包括盆神經(jīng)、腹下神經(jīng)與陰部神經(jīng),膀胱尿道功能的協(xié)調(diào)運行完全依賴于神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)控,并且在不同神經(jīng)反射調(diào)節(jié)下完成儲尿和排尿的相位性轉(zhuǎn)化[28-29]。膀胱的傳入信號主要通過盆神經(jīng)傳入脊髓,尿道感覺信號主要受盆神經(jīng)和陰部神經(jīng)傳導。膀胱排尿反射通過來自T11～L2的腹下神經(jīng)叢(交感神經(jīng))、盆神經(jīng)(副交感神經(jīng))及來自脊髓S2～S4的軀體神經(jīng)共同完成[30-32]。而S2～S4神經(jīng)對排尿、排便尤為重要,其中S3為膀胱的主要支配神經(jīng)[33]。研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)穴主治功能與相應(yīng)的神經(jīng)節(jié)段密切相關(guān),其中背腧穴與臟腑呈橫向節(jié)段性關(guān)聯(lián)[34-35]。

針刺“次髎/中髎”治療膀胱尿道疾病在中醫(yī)古籍中早有記載,如《銅人腧穴針灸圖經(jīng)》曰“次髎二穴,在第二空夾脊陷中,治……小便赤淋,心下堅脹”。不同頻次針刺/電針是當前臨床針灸治療的重要手段,早在《靈樞·逆順肥瘦》中就有“嬰兒者……以毫針淺刺而疾發(fā)針,日再可也”,強調(diào)臨床針對小兒多采用淺刺不留針的方法施治,若疾病不愈,可再加一刺,以達到驅(qū)除外邪、治療疾病的效果?！鹅`樞·壽夭剛?cè)帷分杏涊d “形先病而未入臟者,刺之半其日,臟先病而形乃應(yīng)者,刺之倍其日”,提示臨床應(yīng)根據(jù)疾病具體情況來調(diào)整針刺治療的時間與頻次,若病在表、未入里,其針刺治療所需時間、次數(shù)就少,若病入里,針刺治療所需的時間、次數(shù)則相應(yīng)增加。《靈樞·壽夭剛?cè)帷诽岬健安【湃照?三刺而已。病一月者,十刺而已。多少遠近,以此衰之”,說明了針刺次數(shù)、療程多少與疾病的病程相關(guān)。《針灸聚英》中的“新且淺,一針可愈,若深痼者,必數(shù)針可去”,強調(diào)了對于不同病情,針刺次數(shù)不同,尤其是久病里疾者,需要多次針刺,不斷累積方能治愈疾病?！端貑枴ご摊懫吩啤吧眢w小痛,刺至陰,諸陰之井,無出血,間日一刺”,說明了不同疾病因輕重不同,針刺頻次也不同。以上條文都強調(diào)了不同頻次針刺的效果與患者的體質(zhì)、疾病新久、病情輕重及病位深淺等具有相關(guān)性?，F(xiàn)代醫(yī)學研究也發(fā)現(xiàn)不同頻次針刺(電針)能減輕腦出血后神經(jīng)損傷[36]、降低炎癥性疾病的疼痛[37-38]、促進軟組織修復等[39-40],這可能是因為針刺(電針)頻次的增加促進了遠期針刺效應(yīng),提示針刺效應(yīng)的持續(xù)與針刺(電針)次數(shù)或頻次相關(guān)。

近年來,大量學者研究“體表-臟腑”的相關(guān)性及其內(nèi)在機制,即刺激體表腧穴可引起內(nèi)臟器官的生理病理變化,反之,內(nèi)臟疾患也可引起體表腧穴生理或病理特征的改變[41]。針刺(電針)刺激腧穴后,通過時間-效應(yīng)關(guān)系發(fā)揮針刺(電針)作用,而這種“時效性”是有一定限度的[42]。有學者提出疾病遠期療效的基礎(chǔ)是針刺(電針)的時效性,合理縮短針刺(電針)間隔治療時間、鞏固時效性可能會增強針刺(電針)的治療作用[43]。以往研究發(fā)現(xiàn)針刺(電針)“次髎/中髎”治療下泌尿系統(tǒng)疾病具有穴位特異性[44-45]?；诖?本次研究選取大鼠膀胱同神經(jīng)節(jié)段近端特異穴“次髎/中髎”穴,并選擇隔2日1次、隔1日1次、每日1次作為電針間隔時間,通過尿動力學結(jié)果得出電針治療SUI的最佳治療時間,以期探討不同頻次電針與針刺效應(yīng)的“量-效”關(guān)系。本次研究發(fā)現(xiàn),電針“次髎/中髎”各組均能提高SUI模型大鼠漏尿點壓、膀胱最大容量;延長模型大鼠排尿時間間隔,但與其他電針方案比較,每日電針可更好地改善SUI模型大鼠的膀胱尿道功能,這表明每日連續(xù)電針調(diào)節(jié)膀胱尿道功能具有顯著優(yōu)勢。

綜上所述,本次研究發(fā)現(xiàn),電針“次髎/中髎”能增加SUI模型大鼠漏尿點壓、膀胱最大容量,延長排尿時間間隔,而每日電針調(diào)節(jié)膀胱尿道功能效果更優(yōu)。研究結(jié)果表明適量縮短電針間隔時間能夠增加電針時效性,證實了不同頻次電針與針刺效應(yīng)之間“量-效”的正相關(guān)關(guān)系。研究結(jié)果提示臨床治療SUI患者時適當縮短治療間隔時間可提高臨床療效。但本次只對不同頻次電針治療后SUI模型大鼠的尿動力學變化進行了初步觀察,其膀胱相關(guān)肌肉、神經(jīng)電生理活動等仍有待進一步實驗探討。