住院患兒呼吸道病原學檢測及流行病學特征分析

陳紫英 黃楚容 張 宏 岳修杰

（珠海市香洲區人民醫院，廣東 珠海 519000）

呼吸道感染是兒童住院的首位原因，也是嬰幼兒感染性疾病發病和死亡的一個重要原因，在全球范圍內引起的疾病及經濟負擔十分嚴峻[1-2]。急性呼吸道感染病因復雜，包括細菌、病毒及非典型病原體等，幾種病原微生物可合并感染。明確感染病原有助藥物的合理使用，及早發現呼吸道傳染性疾病并采取措施。因此，快速準確的病原體學診斷對于呼吸道感染性疾病的臨床診療及防控具有重要意義。核酸檢測方法因在不同的疾病期均具有較高的靈敏度和特異性，成為檢測呼吸道病原的主要技術方法[3]。本研究通過PCR-流式熒光雜交技術檢測病原體核酸，對615例呼吸道感染的患兒進行病原學檢測，以了解本地區兒童常見呼吸道感染病原體的特點及流行趨勢，提高藥物的合理使用。

1 對象與方法

1.1 研究對象 分析2022年1月至2022年12月期間在本院住院治療的呼吸道感染兒童呼吸道病原核酸檢測結果。所有納入研究的患兒疾病診斷均符合《實用兒科學》中ARI的診斷標準[4]；年齡1月齡～13歲。排除標準：①院內獲得性感染。②合并先天性心肺畸形及其他基礎疾病（免疫功能低下、其他肺部感染等）。

1.2 研究方法

1.2.1 標本采集 所有患兒在入院當天采集咽拭子，標本采用尼龍材質植絨拭子采集，采集后置于含培養基采樣管中，24 h內送檢。

1.2.2 檢測方法 用核酸提取試劑提取樣本DNA或RNA，提取完成后，使用PCR技術和多重微珠雜交技術，將待檢核酸與15項呼吸道病原體核酸檢測試劑盒（RNA/DNA）混合后進行PCR擴增，擴增后的PCR產物與微球雜交，加入顯色劑，上機檢測。

進行RNA檢測的病原體為：流感病毒A（INF），流感病毒B（INF-B），副流感病毒（PIV），人偏肺病毒（hMPV）、鼻病毒（HRV）、呼吸道合胞病毒（RSV）。進行 DNA 檢測的病原體為：博卡病毒（hBoV）、腺病毒（AdV）、肺炎支原體（MP）、卡他莫拉菌（MC）、流感嗜血桿菌（Hi）、肺炎鏈球菌（SP）、百日咳桿菌（BP）、巨細胞病毒（CMV）、EB病毒（EBV）。

1.3 結局指標 統計15種呼吸道病原體檢出率，分析不同年齡組、季節及疾病病原體分布情況。

1.4 統計學方法 采用SPSS 21.0對所得數據進行統計學分析，計數資料用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般檢測情況 研究對象615例患兒中，男性344例，女性271例，年齡中位數4.2歲，最小年齡1月齡，最大年齡13歲。總體樣本中429例檢出陽性病原，陽性率69.8%，其中檢出單一病原體陽性患兒255例，占59.4%，檢出兩種以上病原體占40.6%，有1例患兒檢出5種病原體，分別是CMV、HRV、Hi、SP、MC 。15 種呼吸道病原體檢出中，檢出率排名前3位的病原體為EBV、CMV、HRV，檢出率最低的為hMPV、BP[5]。見表1。

2.2 主要病原體不同季節感染情況 春冬兩季仍是兒童呼吸道感染高發時期，其中INF具有明顯季節流行性，主要集中在春季，Hi及SP感染檢出率冬春較夏秋兩季高，差異有統計學意義，而MP在夏秋兩季表現出一定的流行性，而檢出率較高的EBV、CMV、HRV四季度均無明顯差異。見表2。

表2 主要病原體不同季節感染情況[n（%）]

2.3 主要病原體年齡分布特點 不同年齡組的CMV、HRV、MP陽性檢出率差異顯著（P＜0.01）。EBV＜1歲年齡組陽性率最低，較其他組有顯著差異，其陽性率隨年齡升高而降低。而CMV、HRV則呈現與之相反的流行趨勢，隨年齡增長陽性率下降。RSV感染主要集中在學齡前兒童，而MP感染學齡期兒童陽性率最高。見表3。

表3 主要病原體年齡分布特點[n（%）]

3 討論

呼吸道感染是兒童最常見的疾病之一，呼吸道疾病更容易向肺部侵襲，引起多種并發癥的發生，正確識別呼吸道病原體對于診斷和治療十分重要。本研究采用PCR一流式熒光雜交技術，將PCR技術、多重微珠雜交技術及熒光檢測技術結合起來，具有高通量、高速度、低成本、靈敏度高等特點，已廣泛應用于呼吸道病原體的檢測[6-7]。15項呼吸道病原體核酸檢測是針對呼吸道病原體設計PCR引物和雜交探針，特異性探針與微球進行共價交聯，標記的PCR產物與微球雜交，可同時檢測多種病原體。

本研究檢測結果顯示，615例呼吸道標本，陽性檢出率69.8%，具有較高的陽性檢測率，且多種病原體檢出率達10.4%，提示兒童呼吸道感染可存在多重感染的情況。上下呼吸道病原檢出情況也不盡相同，流感病毒住院表現為上呼吸道感染，而MP、MC下呼吸道檢出率明顯升高，主要表現為肺部感染。本研究發現引起呼吸道感染的常見細菌SP、MC也呈一定的季節流行性，春夏兩季檢出率高，MP的流行病學特征與其他報告一致[8]。

檢出病毒陽性率前3位依次為EBV、CMV、HRV。EBV在小于1歲年齡組檢出率較其他組明顯偏低，差異有統計學意義，而CMV、HRV小于1歲年齡檢出率最高，后隨年齡增長陽性率下降。陽性率最高的EBV為19.2%，＜1歲年齡組陽性率最低，3～5歲年齡組陽性率最高[9]。EBV病毒是皰疹病毒科嗜淋巴細胞病毒成員中的一員，DNA為其基因組，具有傳染性，且其主要宿主為人類，唾液為主要傳播途徑，主要傳播人群為幼兒，年齡段大約為3～5歲，具有較高的患病率，經過統計顯示，大約有90%以上的幼兒曾感染過EB病毒。學齡前組EBV陽性檢出率高，可能由于該年齡組幼兒免疫系統相對不成熟、常處于幼托機構等人員密集場所而交叉感染有關，免疫力隨著年齡的增長而提高，大于6歲的學齡期組的陽性率有所下降。EBV是一種廣泛傳播的皰疹病毒，90%～95%的成人為EBV血清陽性[10]，主要通過密切接觸傳播，大多數原發性EBV感染大多起源于口咽，早期的EBV感染主要表現為鼻塞、流涕、咽痛、發熱、全身無力、食欲減退等上呼吸道感染或消化道的癥狀，年齡越小癥狀越不典型，可引起包括中耳炎、腹瀉、上呼吸道感染和傳染性單核細胞增多癥等。但大部分小嬰兒和兒童中初次EBV感染常見且通常無癥狀，表現為亞臨床、隱性感染。健康人群的口咽部也攜帶有EBV，咽拭子檢測會造成檢測準確性障礙，因而臨床一般不采用此方法，常用血清學檢測方法，故EBV是定值還是引起疾病的病原，需進一分析。CMV是巨細胞病毒病，因細胞在收到該病毒感染后可呈巨細胞化，胞質、胞核內可充分顯示包涵體，該細胞在臨床中又被成為巨細胞包涵體病，該病毒上甚至可引發全身性感染的發生，該病毒屬于皰疹病毒科β亞科中的一員，是人皰疹病毒科最大、結構最復雜的病毒，在免疫功能正常的宿主很少引起呼吸道感染[11]，陽性檢出患兒主要考慮定值，與既往報道CMV特異性抗體的流行率隨年齡增加而不同[12]。一方面此次研究對象年齡偏小、樣本量少，不能代表整個人群的流行趨勢，而CMV感染在人群中很常見，全球育齡女性中CMV血清陽性率為86%[13]，新生兒可通過分娩或母乳感染病毒后定值，隨著免疫功能完善而有一定的免疫清除，但伴隨年齡的增長，社會面的接觸越廣，獲得隱性感染的概率增加，具體意義及機制仍需進一步研究。輪狀病毒（HRV）是引起嬰幼兒腹瀉的主要病毒之一，是一種雙鏈核糖核酸病毒，屬于呼吸腸孤病毒科，統計顯示，幾乎所有嬰兒在出生1年后均會經歷至少1次的HRV感染，每感染一次，患者機體的免疫力就會相應增強一次，后續的感染力則會逐漸降低，HRV在＜1歲年齡組陽性率達23.8%，較其他年齡組差異有統計學意義，是該年齡組重要的病原體。HRV的主要傳播途徑為糞口傳播，主要感染部位為小腸連結的腸黏膜細胞，可導致患兒出現胃腸炎、嚴重的腹瀉，若患兒未獲得及時有效的治療干預，則可能會因脫水而導致死亡[14]，部分HRV感染后主要表現為普通感冒癥狀，可引起喘息和哮喘急性加重[15]，引起嬰幼兒的支氣管炎和毛細支氣管炎。百日咳桿菌（BP）是患兒單種病毒患病率最低的病毒，屬鮑特氏菌屬，具有傳染性，飛沫傳播為主要傳播途徑，雖然患兒患病率相對較低，但仍然不可忽視，1歲以下兒童感染若未得到有效治療干預，仍然具有較強的病死率。

綜上所述，15項呼吸道病原體核酸檢測技術可同時檢測多種病原體，操作簡便、敏感性高，可用于輔助兒童呼吸道感染的病原學診斷，但對于部分陽性結果的解讀，需要根據臨床特點及流行特征來判斷是否屬于感染病原，然后對于感染病原體采取合理的用藥治療。