豫北地區漢族癲癇患者CYP2C9*3（1075A＞C）等基因型分析

袁紅昌，高漸聯，，郭錦,，王鵬偉，朱超男，鄧智建,3

（1.新鄉醫學院第一附屬醫院 臨床藥學辦公室，河南 新鄉 453100；2.新鄉市免疫性疾病個體化用藥研究重點實驗室；3.河南省醫學重點學科臨床藥學）

癲癇是一種腦神經細胞異常放電引起的短暫性神經功能失常疾病。具有突發性、反復性、持續性發作的特點。發作時可出現全身性強直-陣攣性驚厥樣癥狀，若不及時治療可導致神經系統功能障礙，嚴重威脅著患者的身心健康。目前，臨床上丙戊酸鈉和卡馬西平是治療癲癇的常用藥物，療效顯著[1-2]。但這兩種藥物的治療窗較窄，毒副反應較大[3-5]。基因多態性與藥物的個體化差異性密切相關。不同基因型的患者使用丙戊酸鈉可引起肝損害和衰竭，線粒體聚合酶γ（Mitochondrial DNA polymerase γ，POLG）基因與其密切相關，常見的突變基因為POLG（A467T，G＞A）和POLG（W748S，C＞G）[6]。細胞色素P450 2C9（CYP2C9）主要參與丙戊酸鈉的體內代謝，常見的突變基因為CYP2C9*3（1075A＞C）[6]。使用卡馬西平可出現Steven-Johnson綜合征（SJS）和中毒性表皮壞死松解（Toxic epidermal necrolysis，TEN）等不良反應[6-7]。其風險位點主要是人類白細胞抗原（Human leukocyte antigen，HLA），常見的突變基因為HLA-B*1502TA（C＞G）和HLA-B*1502TB（C＞T）[6]。因此，在使用丙戊酸鈉和卡馬西平治療癲癇時應做藥物的基因檢測，根據檢測結果制定個體化用藥方案。不同地區人群的基因型各異，本研究分析豫北地區（河南省北部）漢族癲癇患者CYP2C9*3（1075A＞C）等5 個基因型的分布特點，分析其臨床意義。

1 方法

1.1 研究對象 研究對象為2017 年1 月1 日至2020 年11 月30 日新鄉醫學院第一附屬醫院收治的豫北地區漢族癲癇患者。采取回顧性研究的方法收集患者CYP2C9*3（1075A＞C）等基因的檢測結果，一些情況如下：CYP2C9*3（1075A＞C）288例，平均年齡（13.95±18.62）歲；POLG（A467T，G＞A）和POLG（W748S，C＞G）584 例，平均年齡（8.30±10.52）歲；HLA-B*1502TA（C＞G）和HLA-B*1502TB（C＞T）106 例，平均年齡（7.76±10.96）歲。

1.2 儀器與試劑 RT-Cycler TM 436/TL988 熒光檢測儀（博奧生物科技公司）；TDZ4A-WS 低速離心機（湘儀離心機儀器公司）；CJV1000-Y 潔凈工作臺（山東新華醫療器械有限公司）；Pharm-gene 01 SNP 樣本分析保存液（北京華夏時代基因公司，生產批號：20190514）；Pharm-gene 200 SNP 樣本處理試劑（北京華夏時代基因公司，生產批號20181009）；測序反應試劑盒（北京華夏時代基因公司，生產批號0220190608）。

1.3 檢測方法 采集患者外周靜脈血3 mL 置于EDTA 抗凝管中。取靜脈血200 μL 加至含1 mL1%NH4CL 的離心管中裂解紅細胞，靜置5 min 后3 000 r/min 條件下離心5 min，棄去上層液。加入0.9% 生理鹽水1 mL 重懸白細胞，3 000 r/min 再次離心5 min 后棄去上層液。加入PHARM-GENE 01 SNP 分析保存液30 μL 靜置30 min。移取上述樣本1.8 μL 加至相應的PHARM-GENE 200 SNP分析樣本處理試劑中。采用熒光檢測儀檢測基因型，CYP2C9*3（1075A＞C）、HLA-B*1502TA（C＞G）和HLA-B*1502TB（C＞T）的檢測位點溫度為62℃，POLG（A467T，G＞A）和POLG（W748S，C＞G）的位點溫度為64℃。Microseq 微測序程序分析。

1.4 統計學處理 采用SPSS 16.0 軟件處理數據。χ2檢驗或Fisher's 確切概率法比較計數資料，P＜0.05為差異有統計學意義。判斷基因型分布是否符合Hardy-Weinberg 平衡，P＞0.05 表示有群體代表性。

2 結果

2.1 Hardy-Weinberg 平衡定律 CYP2C9*3（1075A＞C）、POLG（A467T，G＞A）、POLG（W748S，C＞G）、HLAB*1502TA（C＞G）及HLA-B*1502TB（C＞T）基因的P 值分別為0.135、0.999、0.997、0.940 及0.323。基因型分布符合平衡定律（P＞0.05），表明研究人群有群體代表性。

2.2 基因分布 研究表明，豫北地區漢族癲癇患者CYP2C9*3（1075A＞C）、POLG（A467T，G＞A）、POLG（W748S，C＞G）、HLA-B*1502TA（C＞G）及HLAB*1502TB（C＞T）等位基因的突變率分別為6.08%、0.17%、0.34%、3.30%及17.45%。見表1。

2.3 性別之間的基因差異 CYP2C9*3（1075A＞C）等5 個基因不同性別之間的突變率無統計學差異（P＞0.05）。見圖1。

圖1 CYP2C9*3（1075A＞C）等不同性別之間基因多態性分布

3 討論

研究藥物代謝酶基因多態性的意義重大[8]。丙戊酸鈉治療兒童癲癇的有效劑量為20～30 mg/kg.d，成人為20 mg/kg.d。丙戊酸的血液濃度應維持在50～100 μg/mL 范圍，超過142 μg/mL 易出現中毒反應。因此，應嚴格控制給藥劑量[6]。CYP2C9 基因型影響丙戊酸的血藥濃度[9-10]。CYP2C9*1/*1 型的代謝活性較強，若給予標準劑量，平均血藥濃度的波動范圍較大，部分患者可出現惡心、嘔吐及腹瀉等消化系統，以及嗜睡、平衡失調、乏力等中樞神經系統的不良反應[11]。CYP2C9*3/*3 患者的給藥劑量應減少50%，以及CYP2C9*1/*3 的給藥劑量應減少25%以避免嚴重的不良反應。POLG（A467T，G＞A）基因的未突變類型為GG 型，POLG（W748S，C＞G）的未突變類型為CC 型，未突變基因型可用丙戊酸；而POLG（A467T，G＞A）的GA 型和POLG（W748S，C＞G）的CG 型等雜合突變者有肝損害和死亡風險，建議不用丙戊酸[6]。POLG（A467T，G＞A）AA 型和POLG（W748S，C＞G）GG 型等基因純和突變者發生肝損害和死亡風險高，禁用丙戊酸[6]。丙戊酸鈉血藥濃度與不良反應存在年齡段特異性[12-13]。本研究表明，有0.34% POLG（A467T，G＞A）和0.68% POLG（W748S，C＞G）患者為基因雜合突變，建議不用丙戊酸。

不同基因型的患者使用卡馬西平可出現眩暈、手指震顫、共濟失調、SJS 和TEN 綜合征等不良反應[6,11]。SJS 綜合征屬于多形紅斑重癥型，臨床表現為口腔水腫、充血及糜爛，眼結膜充血、眼瞼水腫、內眥糜爛，分泌物過多等結膜炎或角膜炎樣癥狀，皮膚出現靶樣紅斑等[14]。TEN 綜合征是一種罕見的皮膚性疾病，與遺傳密切相關，患者的皮膚非常脆弱，嚴重影響患者的正常生活。HLAB*1502TA（C＞G）和HLA-B*1502TB（C＞T）分別為白細胞分化抗原B1502 標簽位點A 和位點B，屬于毒副作用風險基因位點[6]。兩個位點可分別預測50%和77%的SJS 綜合征。HLA-B*1502TA（C＞G）的G 基和HLA-B*1502TB（C＞T）的T 基均為HLA-B*1502 陽性，使用卡馬西平時可出現SJS 和TEN 綜合征的風險非常高，應禁用卡馬西平[6,15]。本研究表明，HLA-B*1502TA（C ＞G）和HLAB*1502TB（C＞T）等位基因的突變率分別為3.30%和17.45%，表明該人群使用卡馬西平極易出現SJS和TEN 綜合征，建議不用卡馬西平。

豫北地區漢族癲癇患者CYP2C9*3（1075A＞C）等5 個基因型存在差異性，建議使用丙戊酸鈉和卡馬西平等藥物時應檢測基因，制定個體化給藥方案。