檳榔中黃曲霉毒素B1 檢測方法研究

肖曉義，袁 河

（湖南省檳榔加工與食用安全工程技術(shù)研究中心，湖南賓之郎食品科技有限公司檢測中心，湖南湘潭 411201）

0 引言

黃曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFT B1）是一種真菌毒素[1-2]。其耐熱，難以從污染受體中祛除[3-4]。毒性、危害性在黃曲霉毒素中最強[5-6]，被列為I 級致癌物[7]，具有致癌、致畸和引起肝臟損傷的作用[8]。黃曲霉生長及產(chǎn)生毒素的最適條件是溫度24～30 ℃，濕度80%[9]。檳榔是檳榔樹的果實[10-11]，具有提神、抗疲勞的功效[12-13]。在我國，檳榔主產(chǎn)于海南，臺灣、福建等地有少量種植[14-15]，主要加工于湖南[16]地區(qū)。每年的10—11 月是檳榔的成熟期[17]，湖南食用檳榔企業(yè)會在此時從海南及東南亞等地采購檳榔原果以供應(yīng)全年甚至多年生產(chǎn)[18]，這說明檳榔烘干成原果后需要經(jīng)過長路程、多環(huán)節(jié)的運輸和長時間的儲存。若運輸與貯藏中的環(huán)境溫濕度、檳榔水分含量等條件控制不當(dāng)，極易發(fā)生霉變，進而產(chǎn)生黃曲霉毒素[19]，對后續(xù)工藝造成污染，產(chǎn)生食品安全風(fēng)險。檳榔在我國各地都有食用[20]，分布廣泛，檳榔發(fā)生任何食品安全事件都會產(chǎn)生廣泛的影響，都將打擊近年來發(fā)展迅速的國內(nèi)檳榔產(chǎn)業(yè)[21]。

測定黃曲霉毒素的方法主要有高效液相色譜柱前衍生法、高效液相色譜柱后衍生法、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、酶聯(lián)免疫吸附法、薄層色譜法等[22]。其中，高效液相色譜是最為常用的方法，高效液相色譜柱前衍生法相較于液相連用質(zhì)譜，或者液相柱后衍生更具成本優(yōu)勢，但是也有精密度差、操作時間長的缺點。因此，以檳榔為樣品優(yōu)化了高效液相色譜柱前衍生法，提供了一種準(zhǔn)確、簡便、成本較低的檳榔中黃曲霉毒素B1的檢測方法。該檢測方法對保障檳榔的食品安全具有一定意義。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料與試劑

檳榔，海南市售干果；食用檳榔，湘潭市售成品；正己烷、丙酮、三氟乙酸、乙酸乙酯（色譜純），國藥集團化學(xué)試劑有限公司提供；乙腈（色譜純），美國TIDE 公司提供；HiCapt Aft 固相萃取柱，武漢維泰克公司提供；AFT B1標(biāo)準(zhǔn)品，純度≥99.5%，壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心提供。

1.1.2 儀器設(shè)備

懸浮架自身剛度很大，懸浮架的在xoz平面內(nèi)運動形式為沿z向上下變化(移動值為b)以及與x軸產(chǎn)生傾角θ。

LC-20A 型高速液相色譜配熒光檢測器，日本島津公司產(chǎn)品；UV-2600 型紫外可見光分光光度計，日本島津公司產(chǎn)品；WD-12 型氮吹儀，杭州奧盛儀器有限公司產(chǎn)品；KQ-700 型超聲波清洗機，昆山美美儀器有限公司產(chǎn)品；LHS-250HC-II 型恒溫恒濕培養(yǎng)箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品。

1.2 試驗方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配置與校準(zhǔn)

(2)冷凝管中水流方向是“低進高出”,則③是進水口;冷凝管上連接的干燥管的作用有二:一是吸收逸出的Cl2、SO2,防止污染空氣;二是防止空氣中的水蒸氣進入反應(yīng)裝置而使SOCl2水解。

式中：ρ——校準(zhǔn)測定的AFT B1的試劑質(zhì)量濃度，μg/mL；

A——在λmax的吸光度；

312——AFT B1的摩爾質(zhì)量，g/mol；

20 700——乙腈的摩爾吸光系數(shù)，m2/mol。

1.2.2 樣品前處理

將檳榔切片烘干后，用高速粉碎機粉碎，作為試樣備用。稱取2.5 g 試樣于50 mL 離心管中，加入10 mL 乙腈，渦旋混勻，超聲30 min，以轉(zhuǎn)速4 000 r/min 離心10 min，取上清液作為提取液備用。

采用SPASS 18.0進行分析，計量資料用±s表示，采用t檢驗，兩組間率的比較采用x2檢驗，P＜0.05提示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2.3 凈化

在黃曲霉專用柱中加入5 mL 丙酮，3 mL 正己烷進行活化[23]。活化后在黃曲霉專用柱中加入8 mL提取液，全部流出后用6 mL 乙酸乙酯/ 正己烷（1∶1）溶劑清洗，棄去清洗液，抽干凈化柱。用8 mL 丙酮解析，作為凈化液備用。

1.2.4 衍生

精確移取5 mL 凈化液，50 ℃氮吹至干，分別加入2 mL 正己烷和100 μL 三氟乙酸，渦旋混勻后，在恒溫恒濕箱中40 ℃下反應(yīng)15 min，結(jié)束后于50 ℃下氮吹至干，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為67%的乙腈溶液2 mL 定容，渦旋混勻1 min，過濾后待上機分析。

1.2.5 色譜條件

色譜柱：Agilent ZabarX C18柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）；熒光檢測器：激發(fā)波長384 nm，發(fā)射波長406 nm；柱溫35 ℃，進樣量10 μL；流動相：乙腈+水（67+33），流速1.0 mL/min。

正交試驗因素與水平設(shè)計見表1。

（1）衍生反應(yīng)正己烷的體積。將樣品中AFT B1的含量加標(biāo)至5 μg/kg。將處理后樣品平均分成5 組，每組6 個平行，每個平行2.5 g，置于20 mL 離心管中，以料液比1∶4（g∶mL）乙腈，于40 ℃下超聲提取30 min 制成提取液，經(jīng)過凈化后，取5 mL凈化液氮吹至干，每組分別加入200，500，1 000，2 000，3 000 μL 正己烷和100 μL 三氟乙酸衍生，衍生完成后再次吹干，以2 mL 初始流動相復(fù)溶，上機檢測，以提取率及其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差選擇衍生操作中加入的正己烷體積。

不同的應(yīng)用場景其復(fù)雜程度以及碰撞模擬量均是不同的，針對本文的研究對象，如若用一般的包圍盒，其精確度不符合要求，不能準(zhǔn)確地描述對象，基于這點，考慮針對混合層次包圍盒[6]的改進。

（2）提取溶劑。將樣品中AFT B1的含量加標(biāo)至5 μg/kg。將處理后樣品平均分成5 組，每組3 個平行，每個平行2.5 g，置于20 mL 離心管中，以料液比1∶4（g∶mL）分別加入甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙腈、氯仿[24-25]，于40 ℃下超聲提取30 min 制成提取液，經(jīng)過凈化后，再取5 mL 凈化液氮吹至干，加入2 000 μL 正己烷和100 μL 三氟乙酸衍生，衍生完成后再次吹干，以2 mL 初始流動相復(fù)溶，上機檢測，以AFT B1的提取率選擇提取溶劑。

（3）料液比。將樣品中AFT B1的含量加標(biāo)至5 μg/kg。將處理后樣品平均分成5 組，每組3 個平行，每個平行2.5 g，置于20 mL 離心管中，分別以料液比1∶2，1∶3，1∶4，1∶5，1∶6（g∶mL）加入乙腈溶液，于40 ℃下超聲提取30 min，制成提取液，經(jīng)過凈化后，再取5 mL 凈化液氮吹至干，加入2 000 μL 正己烷和100 μL三氟乙酸衍生后氮吹至干，用流動相2 mL 復(fù)溶后上機檢測，以AFT B1的提取率選擇料液比。

（4）凈化。將樣品中AFT B1的含量加標(biāo)至5 μg/kg。將處理后樣品平均分成2 組，每組3 個平行，每個平行2.5 g，置于20 mL 離心管中，以料液比1∶4（g∶mL）加入乙腈溶液，于40 ℃下超聲提取30 min 制成提取液，經(jīng)過凈化后，再取5 mL凈化液氮吹至干，加入2 000 μL正己烷和100 μL三氟乙酸衍生后，衍生完成后再次吹干，以2 mL 初始流動相復(fù)溶，上機檢測，以AFT B1的提取率及分離程度取舍凈化步驟。

1.2.7 單因素試驗

在開張項目的施工過程中，其中最重要的一項任務(wù)就是防水施工環(huán)節(jié)，這也是預(yù)制裝配式住宅項目進行的要點，我們需要根據(jù)預(yù)制裝配式建筑本身的特征，有效深化地設(shè)計出能夠?qū)︻A(yù)制墻和預(yù)制板的防水性能，對關(guān)鍵性的防水環(huán)節(jié)要進行改良和優(yōu)化。比如，預(yù)制裝配式項目施工環(huán)節(jié)，空調(diào)板和疊合板的預(yù)埋件處理工作以及外掛墻板中的橫的縫隙的處理工作，都需要進行防水環(huán)節(jié)的優(yōu)化設(shè)計，這樣才能保證項目質(zhì)量的提升，保障項目施工環(huán)節(jié)能夠有序進行。

由圖5 可知，未經(jīng)凈化樣品的色譜圖中，目標(biāo)峰周圍無明顯雜峰，分離定性定量效果良好，且樣品經(jīng)過凈化后樣品中的雜質(zhì)并未見明顯減少。綜合圖4，可發(fā)現(xiàn)凈化后的樣品檢出率低于未凈化的樣品，說明凈化步驟會造成樣品中AFT B1的損失。因此，為了減少操作時間，節(jié)省使用凈化柱的成本，提高AFT B1檢出率，故對樣品不采用凈化操作。

由于工作需要，忻州分公司對業(yè)務(wù)部負(fù)責(zé)人進行了調(diào)整。走馬上任后，曹淑英開展的第一項工作就是帶領(lǐng)業(yè)務(wù)部深入基層進行全面細(xì)致的市場調(diào)研，對客戶進行大量的拜訪溝通。

（2）超聲溫度。將樣品中AFT B1的含量加標(biāo)至5 μg/kg。將處理后樣品平均分成6 份，每份2.5 g，置于20 mL 離心管中，以料液比1∶4（g∶mL）加入乙腈溶液，分別在30，35，40，45，50，55 ℃下超聲提取30 min，超聲后取5 mL 提取液完成衍生步驟，上機檢測。

稱取1 mg AFT B1標(biāo)準(zhǔn)品于100 mL 容量瓶，用乙腈定容至刻度，制成標(biāo)準(zhǔn)儲備液。使用分光光度計對標(biāo)準(zhǔn)儲備液進行光譜測試，在最大吸收波長（λmax）讀取標(biāo)準(zhǔn)儲備液的吸光度A。校準(zhǔn)溶液實際質(zhì)量濃度計算公式如下：

（3）乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)。將樣品中AFT B1的含量加標(biāo)至5 μg/kg。將處理后樣品平均分成6 份，每份2.5 g，置于20 mL 離心管中，以料液比1∶4（g∶mL）分別加入75%，80%，85%，90%，95%，100%乙腈溶液，于40 ℃下超聲提取30 min，超聲后取5 mL 提取液完成衍生步驟，上機檢測。

1.2.8 正交優(yōu)化試驗

在單因素試驗結(jié)果的基礎(chǔ)上，選擇提取溶劑為85%乙腈，料液比1∶4，衍生操作中加入的正己烷體積2 000 μL，選取超聲時間、超聲溫度、乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)3 個因素設(shè)置表中因素水平，以空白的黃曲霉毒素加標(biāo)樣品為評價指標(biāo)。

1.2.6 樣品前處理條件改良

表1 正交試驗因素與水平設(shè)計

1.3 數(shù)據(jù)處理

由于檳榔作為樣品具有不均勻的特點，所以研究中的樣品均經(jīng)過加標(biāo)處理，使AFT B1的含量為5 μL/kg 以避免誤差。故評價方法優(yōu)劣的檢出率計算方式如下：

Wang等[3]使用蝙蝠算法(Bat Algorithm, BA)解決了無人戰(zhàn)斗機(Uninhabited Combat Air Vehicle, UCAV)的二維路徑優(yōu)化問題，并通過實驗與粒子群優(yōu)化(Particle Swarm Optimization, PSO)算法等其他方法比較，驗證了BA的有效性；Zhu等[4]提出使用自組織圖和速度合成法對在水下工作區(qū)域內(nèi)的無人潛艇進行三維路徑規(guī)劃，實現(xiàn)潛艇在海洋動態(tài)潮流下的任務(wù)路徑最短；陳家照等[5]提出一種基于改進PSO算法的三維空間路徑規(guī)劃，通過PSO算法將三維路徑規(guī)劃問題轉(zhuǎn)化為二維空間上的路徑規(guī)劃問題,從而解決飛行器的三維路徑規(guī)劃問題。

式中：X——提取率，%；

C1——樣品中檢出的AFT B1含量，μg/kg；

C2——樣品加標(biāo)后的理論AFT B1含量，為固定值5 μg/kg。

2 結(jié)果與分析

2.1 衍生中正己烷體積對精密度及提取率的影響

標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖9。

圖1 正己烷體積對檢出率的影響（n=6）

表2 正己烷體積對提取率及精密度的影響（n=6）

由表2 和圖1 可知，隨著正己烷體積的增加，RSD 值逐漸降低，提取率升高。當(dāng)正己烷體積達(dá)到2 000 μL 時，RSD 值與提取率趨于穩(wěn)定，不再有明顯差異，分別為1.46%和70%。這可能是因為，作為三氟乙酸與AFT B1反應(yīng)載體的正己烷體積在2 000 μL 以下時不能完全溶解吹干后的樣品提取液，隨著正己烷體積增加，提取液復(fù)溶更加完全，因此提取率逐漸升高，平行結(jié)果間離散程度變小。綜上所述，衍生反應(yīng)中使用的正己烷體積為2 000 μL。

2.2 不同溶劑對檢出率的影響

不同提取溶劑對檢出率的影響見圖2。

圖2 不同提取溶劑對檢出率的影響

B 類黃曲霉素屬于二氫呋喃香豆素衍生物，極性小[26]，因此難溶于水，易溶于有機溶劑。選用幾種有報道的黃曲霉毒素提取溶劑[24-25]進行對比。從結(jié)果來看，提取率最高的為乙腈。因此，選擇乙腈作為提取溶劑。

2.3 料液比對檢出率的影響

料液比對檢出率的影響見圖3。

圖3 料液比對檢出率的影響

隨著乙腈體積的增加，黃曲霉的提取率提高，當(dāng)料液比1∶4（g∶mL）時不再有明顯提高。這可能是因為溶劑用量增加后，溶劑中的AFT B1濃度降低，從而使得AFT B1與溶劑接觸面的濃度增大，提高了傳質(zhì)推動力，加快了AFT B1的溶出速率[27]，在超聲的協(xié)同作用下，AFT B1快速的釋放、擴散及溶解[28]。因此，料液比選擇1∶4（g∶mL）。

2.4 凈化方法的選擇

凈化方法對提取率的影響見圖4，色譜對照圖見圖5。

1.3 臨床實踐 選擇 9例擬行機器人輔助腹腔鏡前列腺癌根治術(shù)的患者。所有患者均經(jīng)超聲引導(dǎo)下經(jīng)直腸前列腺穿刺活組織檢查病理確診，并進一步行盆腔磁共振成像及全身骨掃描檢查排除局部侵犯和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，同時評估患者前列腺和骨盆形態(tài)，符合機器人輔助腹腔鏡前列腺癌根治術(shù)指征。3 名受訓(xùn)醫(yī)師分別對 3例患者進行膀胱尿道吻合（圖1D），記錄吻合時間，并與腹腔鏡前列腺癌根治術(shù)吻合時間對比。術(shù)后隨訪患者，檢測引流液肌酐水平、評估漏尿情況。術(shù)后第 7 天行膀胱造影檢查，注射造影劑 80 mL，評估吻合口愈合情況。

圖4 凈化方法對提取率的影響

圖5 色譜對照圖

（1）超聲時間。將樣品中AFT B1的含量加標(biāo)至5 μg/kg。將處理后樣品平均分成6 份，每份2.5 g，置于20 mL離心管中，以料液比1∶4（g∶mL）加入乙腈溶液，分別在40 ℃下超聲提取15，20，25，30，35，40 min，超聲后取5 mL 提取液完成衍生步驟，上機檢測。

（128）尾尖光萼苔 Porella handelii S.Hatt.熊源新等（2006）；楊志平（2006）；余夏君等（2018）

2.5 單因素試驗

2.5.1 超聲時間

超聲時間對檢出率的影響見圖6。

圖6 超聲時間對檢出率的影響

由圖6 可知，隨著超聲時間的延長，AFT B1的檢出率逐漸增加，當(dāng)超聲時間達(dá)到30 min 時，檢出率達(dá)到峰值78.4%，之后隨著超聲時間的增加，檢出率不再有顯著的變化。因此，選擇超聲時間30 min為最佳提取時間。

2.5.2 超聲溫度超聲溫度對檢出率的影響見圖7。

圖7 超聲溫度對檢出率的影響

由圖7 可知，超聲溫度為30～40 ℃時，AFT B1的檢出率隨溫度的增加而升高，當(dāng)超聲溫度達(dá)到40 ℃時，檢出率不再有顯著的變化。因此，選擇超聲溫度40 ℃為最佳超聲溫度。

2.5.3 乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)

首先，旅游危機事件當(dāng)事人和利益攸關(guān)方是網(wǎng)絡(luò)輿情的主要發(fā)布者和傳播者。該主體發(fā)布的信息從根源上決定了旅游危機事件網(wǎng)絡(luò)輿情的傳播內(nèi)容和信息，其發(fā)布的關(guān)于旅游危機事件的網(wǎng)絡(luò)輿情信息比其他任何傳播主體發(fā)布的信息都更有說服力和煽動性，因而更能決定網(wǎng)絡(luò)輿情傳播的走向。相關(guān)管理部門要迅速、合理地解決旅游危機事件，盡量減小對旅游危機事件當(dāng)事人和利益攸關(guān)方帶來的負(fù)面影響，從而達(dá)到控制輿情擴散的目的。

乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)對提取率的影響見圖8。

圖8 乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)對提取率的影響

由圖8 可知，隨著乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加，AFT B1的檢出率逐漸提高，當(dāng)乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到80%時，檢出率達(dá)到83%，當(dāng)乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)超過85%時，檢出率逐漸下降。因此，選擇80%乙腈溶液為最佳溶劑質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

2.6 正交試驗結(jié)果

根據(jù)單因素試驗的結(jié)果，選取超聲時間、超聲溫度、乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)3 個因素，以AFT B1檢出率為指標(biāo)進行L9（34）正交試驗

第二，一般情況下，如話語(7)，話語表達(dá)的是標(biāo)準(zhǔn)化的隱意(7b);但在特定的語境中，同一話語會產(chǎn)生其他具有交際功能的隱意(7a)。此外，聽話者依據(jù)同一個隱意還可推導(dǎo)出(7c1)或(7c2)等不同的交際意圖。

正交試驗設(shè)計與結(jié)果見表3，影響檳榔中AFT B1提取率各因子分析見表4。

表3 正交試驗設(shè)計與結(jié)果

表4 影響檳榔中AFT B1 提取率各因子分析

由表3 可知，對檳榔中AFT B1的提取率影響的因素的排序為超聲時間＞超聲溫度＞乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)。由表4 可知，超聲溫度、超聲時間影響顯著。由表3可知，A2B2C1為最優(yōu)組合即超聲時間30 min，超聲溫度40 ℃，乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)80%。

2.7 方法學(xué)考查

2.7.1 線性及標(biāo)準(zhǔn)曲線

正己烷體積對提取率及精密度的影響（n=6）見表2，正己烷體積對檢出率的影響（n=6）見圖1。

比較了70%，75%，80%，85%，90%，95%乙腈對檢出率的影響。

配制質(zhì)量濃度1～60 ng/mL 的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液上機檢測，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得到AFT B1的線性方程及相關(guān)系數(shù)R2。由圖9 可知，方程線性良好R2=0.999 8，b（截距）＜2% a（斜率），滿足定量檢測的要求。

2.7.2 精密度、回收率

在未發(fā)霉的檳榔干果樣品中進行3 水平（0.5，5.0，20.0 μg/kg）6 平行加標(biāo)。

加標(biāo)回收率結(jié)果（n=6）見表5。

根據(jù)GB/T 27404—2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測》被測組分含量小于0.1 mg/kg 時，回收率應(yīng)為60%～120%，變異系數(shù)應(yīng)小于15%。回收率為65.0%～87.5%，變異系數(shù)小于6%，說明回收率與精密度滿足規(guī)范。

2.7.3 定量限與檢出限

在2.5 g 空白樣品中加入等量0.20 ng AFT B1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以基線的10 倍噪聲值為定量限，3 倍為檢出限，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算[29]，定量限為0.06 μg/kg，檢出限為0.02 μg/kg。

對《新視野》教材的研究主要是由于，在當(dāng)下先行的國內(nèi)通用學(xué)術(shù)英語教材中，《新視野》在各大高校應(yīng)用廣泛，是一套代表性較高的教材，使該研究的局限主要在于該文只對一套教材進行了量化處理；一套教材的語料庫相對較小，因此對于其他學(xué)者來說，將來可以對其他教材進行分析或建立更大的語料庫，為研究提供更具說服力的量化分析。且該教材在經(jīng)掃描PDF格式轉(zhuǎn)化為Word文本時出現(xiàn)較多錯誤之處，雖經(jīng)過多次核對和問題糾錯等步驟，由于人工校對精力有限，不可避免仍存在一些瑕疵。因此，如后續(xù)學(xué)者進行量化計算時，可相對著重處理該階段性問題，減少失誤。

2.7.4 霉變檳榔原果含量測定與成品測定

對20 批次檳榔原果、20 批次市售食用檳榔進行了AFT B1含量檢測。

他曾希望遠(yuǎn)離塵囂，機會來了，怎么反倒不安起來了呢？他打定主意隨遇而安，開始打量起這間石屋。石壁上嵌著幾盞油燈，永遠(yuǎn)那么燃著，既不變亮，也不變暗，也不搖動，仿佛是虛假的。

霉變檳榔原果檢測結(jié)果見表6，食用檳榔檢測結(jié)果見表7。

表6 霉變檳榔原果檢測結(jié)果/μg·kg-1

表7 食用檳榔檢測結(jié)果/μg·kg-1

由表6 可知，在霉變檳榔原果中，AFTB1測出的概率為15%，最低值為1.11 μg/kg，最高值為11.4 μg/kg，測出的概率不高。這是因為檳榔發(fā)生霉變不一定會產(chǎn)生黃曲霉，且有的黃曲霉不產(chǎn)黃曲霉毒素[30]。由表7 可知，市售食用檳榔的黃曲霉毒素B1的提取率為5%，均未超過DB 43/132—2004《食用檳榔》規(guī)定的5 μg/kg。

3 結(jié)論

基于GB 5009.22—2016 以檳榔為樣品對高效液相色譜-柱前衍生法的前處理進行了優(yōu)化，并選取對檢出率有顯著影響的提取條件進行了正交優(yōu)化，最終得到優(yōu)化前處理：衍生中正己烷體積2 000 μL，料液比1∶4（g∶mL），用乙腈為提取溶劑，不采用凈化。優(yōu)化提取參數(shù)為超聲時間30 min，超聲溫度40 ℃，乙腈質(zhì)量分?jǐn)?shù)80%。該方法的加標(biāo)回收率為66.2%～87.9%，RSD 值為2.53%～5.93%，定量限為0.06 μg/kg，檢出限為0.02 μg/kg，符合GB/T 27404—2008 中對于痕量物質(zhì)檢測的要求。該方法操作簡單、準(zhǔn)確度高、精密度好、檢測成本低，適用于檢測檳榔中AFT B1的殘留量。以該方法檢測了霉變原果及市售食用檳榔的AFT B1含量，以及霉變原果檳榔與市售成品檳榔。檢測結(jié)果顯示，霉變原果測出的概率為15%，市售食用檳榔測出的概率為5%，均未超過DB 43/132—2004 的限量（5 μg/kg），但仍然應(yīng)關(guān)注各流程中可能的污染來源及被污染區(qū)域，降低食用檳榔的安全風(fēng)險，促進檳榔行業(yè)健康發(fā)展。