急性冠脈綜合征病人血清LCN-2、hs-CRP水平及miR-150-5p表達(dá)與危險(xiǎn)分層的關(guān)系

王 娟,顏永進(jìn),陸 齊

急性冠脈綜合征(acute coronary syndrome,ACS)是臨床常見(jiàn)的以動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂為主要臨床特征的冠脈綜合征類(lèi)型,包括急性ST段抬高型心肌梗死及非ST段抬高型心肌梗死、不穩(wěn)定型心絞痛等[1]。ACS為嚴(yán)重的心血管系統(tǒng)疾病,常見(jiàn)于男性、老年人、絕經(jīng)后女性、高血脂人群、糖尿病病人、腹型肥胖或有冠心病家族病史者[2]。一般情況下,ACS常表現(xiàn)為胸悶、胸痛等臨床癥狀,嚴(yán)重者可出現(xiàn)心力衰竭、心律失常甚至死亡,因此,及時(shí)評(píng)估ACS病人的危險(xiǎn)分層具有重要的臨床指導(dǎo)意義[3]。近年來(lái),全球急性冠狀動(dòng)脈事件注冊(cè)(Global Registry of Acute Coronary Event,GRACE)評(píng)分系統(tǒng)作為臨床用于評(píng)估ACS病人預(yù)后的新工具,其將病人的病情風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果與救治措施關(guān)聯(lián),針對(duì)性給予病人急救干預(yù),能有效預(yù)防風(fēng)險(xiǎn)因素,從而降低相關(guān)心血管事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[4]。中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,LCN2)與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性相關(guān),在不同類(lèi)型冠心病病人的血液循環(huán)中,心肌梗死病人的LCN2水平明顯增高且與冠狀動(dòng)脈病變程度呈正相關(guān)[5]。超敏C反應(yīng)蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)直接參與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊炎癥的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程,與ACS發(fā)病有關(guān)[6-7]。miR-150-5p是一種血清中的miRNA,生物信息學(xué)網(wǎng)站Targetscan(www.targetscan.org/vert_72)的查詢(xún)結(jié)果表明,其與LCN2 mRNA的3′-UTR結(jié)合,調(diào)控靶基因LCN2的表達(dá),在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成中發(fā)揮重要作用。本研究擬分析LCN2、hs-CRP和miR-150-5p與ACS病人危險(xiǎn)分層的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年7月—2019年10月我院收治的經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影滿(mǎn)足ACS相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)的病人163例作為ACS組,其中,男99例,女64例,年齡(59.40±8.20)歲,急性ST段抬高型心肌梗死32例,急性非ST段抬高型心肌梗死16例,不穩(wěn)定型心絞痛115例。根據(jù)GRACE評(píng)分系統(tǒng)將163例ACS病人分為低危組(≤108分,76例)、中危組(109～140分,54例)、高危組(>140分,33例)。選取同期于我院體檢的200名健康人群作為對(duì)照組,其中,男134名,女66名,年齡(59.32±7.88)歲。本研究經(jīng)醫(yī)院生物醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查通過(guò)(倫理審查批件號(hào):NTDXYXY00125-26574),所有入選者均知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn):因胸悶或胸痛急診入院,發(fā)病時(shí)間<2 h;參照2002年美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)(ACC)/美國(guó)心臟協(xié)會(huì)(AHA)指南標(biāo)準(zhǔn)[8],經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影檢查確診為ACS。排除標(biāo)準(zhǔn):出現(xiàn)短暫腦缺血;嚴(yán)重貧血,心力衰竭,惡性腫瘤,免疫系統(tǒng)疾病或肝、腎功能不全者;心臟瓣膜病或心肌痛;血漿清蛋白異常;主動(dòng)申請(qǐng)退出本研究者。

1.3 方法

1.3.1 GRACE評(píng)分

采用GRACE評(píng)分系統(tǒng)于病人入院后24 h內(nèi)評(píng)價(jià)病人的體征指標(biāo)、臨床癥狀、一般資料、影像學(xué)檢查表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)情況。GRACE評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為:依據(jù)病人心率、年齡、收縮壓、肌酐、心肌梗死嚴(yán)重程度(Killip分級(jí))、心肌標(biāo)志物水平、心電圖ST段改變、是否有已知的心臟事件(心搏驟停)8項(xiàng)進(jìn)行分級(jí)評(píng)估,該評(píng)分系統(tǒng)總分為372分。本研究中,低危組為(68.70±15.34)分,中危組為(118.23±15.34)分,高危組(158.23±15.74)分。

1.3.2 血清LCN2、hs-CRP、miR-150-5p水平檢測(cè)

采集ACS病人入院即刻靜脈血,健康者采集體檢當(dāng)日空腹靜脈血,使用抗凝管室溫靜置2 h,離心收集血清并置于-80 ℃冰箱中保存待檢。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清LCN2、hs-CRP水平;采用定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)檢測(cè)miR-150-5p的表達(dá)情況。提取血清樣本中的總RNA,檢測(cè)濃度和純度后將其反轉(zhuǎn)錄成cDNA,以cDNA為模板,配制10 μL反應(yīng)體系,在qRT-PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng),條件為:94 ℃預(yù)熱14 min,94 ℃變性15 s,55 ℃退火30 s,70 ℃延伸30 s,共40個(gè)循環(huán)。以U6來(lái)為內(nèi)參。qRT-PCR引物序列:miR-150-5p正向引物5′-CGCTCTCTCCCAACCCTTGTACC-3′,反向引物5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′;U6正向引物5′-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAA-3′T,反向引物 5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′。用2-ΔΔCt計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量,每個(gè)Ct值為相應(yīng)樣品重復(fù)測(cè)量3次后所得均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 不同ACS危險(xiǎn)分層病人一般資料比較

不同ACS危險(xiǎn)分層病人一般資料比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見(jiàn)表1。

表1 不同ACS危險(xiǎn)分層病人一般資料比較

2.2 ACS組與對(duì)照組病人血清LCN2、hs-CRP水平和miR-150-5p表達(dá)比較

ACS組病人血清LCN2、hs-CRP水平高于對(duì)照組,miR-150-5p表達(dá)低于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

表2 ACS組與對(duì)照組病人血清LCN2、hs-CRP水平和miR-150-5p表達(dá)比較(±s)

2.3 不同ACS危險(xiǎn)分層病人血清LCN2、hs-CRP水平和miR-150-5p表達(dá)比較

與低危組比較,中危組、高危組LCN2、hs-CRP水平升高,miR-150-5p表達(dá)降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與中危組比較,高危組LCN2、hs-CRP表達(dá)升高,miR-150-5p表達(dá)降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表3。

表3 不同ACS危險(xiǎn)分層病人血清LCN2、hs-CRP水平和miR-150-5p表達(dá)比較(±s)

2.4 LCN2、hs-CRP和miR-150-5p與ACS危險(xiǎn)分層的相關(guān)性分析

將LCN2、hs-CRP和miR-150-5p與ACS危險(xiǎn)分層進(jìn)行Spearman秩相關(guān)分析,結(jié)果顯示,血清LCN2、hs-CRP水平與ACS危險(xiǎn)分層呈正相關(guān)(rs=0.61,P<0.05;rs=0.64,P<0.05),miR-150-5p表達(dá)與ACS危險(xiǎn)分層呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.58,P<0.05)。

2.5 ACS危險(xiǎn)因素的多因素Logistic回歸分析

以是否診斷ACS為因變量,以血清LCN2、hs-CRP水平和miR-150-5p表達(dá)、血脂異常、吸煙史等為自變量,在調(diào)整年齡、性別等因素后,血清LCN2每上升1 mg/mL,ACS發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)增加2.921倍;血清hs-CRP每增加1 mg/mL,ACS發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)增加2.733倍;miR-150-5p每增加1個(gè)相對(duì)值,ACS發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)增加3.672倍;血脂異常相對(duì)于血脂正常,ACS發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)增加2.623倍;有吸煙史相對(duì)于無(wú)吸煙史,ACS發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)增加1.081倍。詳見(jiàn)表4。

表4 ACS危險(xiǎn)因素的多因素Logistic回歸分析

3 討 論

ACS是臨床中較為常見(jiàn)的以動(dòng)脈粥樣硬化斑塊發(fā)生破裂為主要臨床特征的冠脈綜合征。研究表明,評(píng)估ACS病人的危險(xiǎn)分層對(duì)臨床治療策略的選擇、再發(fā)急性冠狀動(dòng)脈缺血的預(yù)測(cè)具有重要意義[9]。現(xiàn)階段臨床中多采用GRACE評(píng)分、心肌梗死溶栓治療(thrombolysis in myocardial infarction,TIMI)危險(xiǎn)評(píng)分等方式對(duì)ACS進(jìn)行危險(xiǎn)分層的分析和評(píng)估[10]。GRACE評(píng)分系統(tǒng)是近年來(lái)臨床中廣泛應(yīng)用的全球急性冠脈綜合征病情狀態(tài)評(píng)分量表,多用于評(píng)估病人住院期間或出院后再發(fā)ACS或死亡的風(fēng)險(xiǎn),對(duì)ACS的預(yù)后判斷具有重要的臨床價(jià)值,是評(píng)估ACS病人冠狀動(dòng)脈狹窄程度的重要指標(biāo)[11]。

LCN2屬于脂質(zhì)運(yùn)載蛋白超家族,通過(guò)與基質(zhì)金屬肽酶9(matrix metallopeptidase 9,MMP-9)形成復(fù)合物,抑制MMP-9水解,延長(zhǎng)MMP-9蛋白水解活性,增加冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊的不穩(wěn)定性[12],另外,LCN2作為促炎因子,在炎癥狀態(tài)下能誘導(dǎo)炎癥介質(zhì)的釋放,促進(jìn)免疫細(xì)胞極化,進(jìn)一步加重斑塊的不穩(wěn)定性。LCN2基因中包含可以結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子的位點(diǎn),轉(zhuǎn)錄因子包括腫瘤壞死因子α(tumour necrosis factor alpha-like,TNF-α)、干擾素-γ(interferon gamma,IFN-γ)等,轉(zhuǎn)錄因子通過(guò)與位點(diǎn)結(jié)合可上調(diào)LCN2的表達(dá),而LCN2又可通過(guò)核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)途徑誘導(dǎo)多種炎性因子表達(dá),這種正反饋機(jī)制使得炎癥效應(yīng)進(jìn)一步放大,斑塊穩(wěn)定性逐漸下降,血管破裂,進(jìn)而導(dǎo)致心肌缺血、壞死[13-14]。研究表明,LCN2是中性粒細(xì)胞發(fā)生免疫反應(yīng)時(shí)基因表達(dá)的核心模塊,LCN2表達(dá)增加會(huì)導(dǎo)致hs-CRP表達(dá)升高[15]。本研究結(jié)果顯示,ACS組病人血清LCN2、hs-CRP水平較對(duì)照組升高(P<0.05),血清LCN2、hs-CRP水平與GRACE危險(xiǎn)分層呈正相關(guān)(P<0.05),進(jìn)一步表明血清LCN2、hs-CRP水平與冠狀動(dòng)脈斑塊的不穩(wěn)定性及ACS病情進(jìn)展相關(guān)。

miRNA為非編碼RNA,通過(guò)與靶基因mRNA的3′-UTR不完全或完全互補(bǔ)配對(duì),進(jìn)而在轉(zhuǎn)錄水平或轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控靶基因的表達(dá),參與人類(lèi)生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)控。研究顯示,miR-150-5p表達(dá)上調(diào),具有減緩心肌凋亡、保護(hù)心臟血管的作用[15];體外實(shí)驗(yàn)表明,敲低FOXD3-AS1基因可上調(diào) miR-150-5p的表達(dá),進(jìn)一步增加細(xì)胞存活率、抑制細(xì)胞凋亡,從而保護(hù)心肌細(xì)胞免受缺氧誘導(dǎo)的損傷[16]。另外,miR-150-5p還直接影響心肌梗死的病程發(fā)展,體外動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,小鼠的骨髓干細(xì)胞外泌體通過(guò)上調(diào)miR-150-5p的表達(dá),靶向減弱心肌細(xì)胞的凋亡并有效提升心臟功能[17]。本研究結(jié)果表明,ACS組miR-150-5p表達(dá)低于對(duì)照組,進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),高危組miR-150-5p水平最低,miR-150-5p水平與GRACE危險(xiǎn)分層呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),對(duì)ACS病情評(píng)估有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。

LCN2、hs-CRP和miR-150-5p對(duì)ACS的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與GRACE評(píng)分分級(jí)具有良好的一致性,可增加臨床醫(yī)師對(duì)ACS風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性,有利于臨床醫(yī)師對(duì)心血管疾病的快速診斷和預(yù)后分析。LCN2、hs-CRP和miR-150-5p之間關(guān)系緊密,之后的研究可在心肌細(xì)胞水平進(jìn)行功能驗(yàn)證,分析其可能的調(diào)控機(jī)制,為ACS的靶向治療提供新思路和方法。

綜上所述,ACS病人血清高LCN2、高h(yuǎn)s-CRP水平和低miR-150-5P表達(dá)是ACS的危險(xiǎn)因素,對(duì)預(yù)測(cè)ACS危險(xiǎn)分層有較高的臨床價(jià)值。