血清miR-30a、miR-221在老年急性心肌梗死患者中表達及意義

殷淑琴 李小旺

(1湖州師范學院醫學院臨床系,浙江 湖州 313000;2湖州市第一人民醫院心內科)

急性心肌梗死是動脈粥樣硬化斑塊潰瘍、破裂后釋放的血栓物質所致的急性冠脈綜合征,嚴重影響患者的生存質量〔1〕。

動脈血管壁結構與功能隨著年齡的增長逐漸惡化,急性心肌梗死發生風險明顯增加〔2〕,準確評估老年急性心肌梗死患者的病情嚴重程度和預后對合理治療具有重要的指導意義。雖然心肌肌鈣蛋白能較好地診斷急性心肌梗死,但對慢性冠脈疾病也存在假陽性結果〔3〕,因此探尋新型診斷標志物對改善老年急性心肌梗死患者的預后具有重要意義。微小RNA(miR)在心血管疾病中具有一定的診斷潛力,可能與影響靶基因3′-非翻譯(UTR)區表達有關〔4〕,但相關研究多集中在細胞及動物實驗〔5〕,對急性心力衰竭患者影響的研究仍十分少見。本研究探討血清miR-30a、miR-221在老年急性心肌梗死患者中的表達特點及意義。

1 對象與方法

1.1研究對象 選取2019年7月至2021年5月湖州市第一人民醫院收治老年急性心肌梗死患者86例為急性心肌梗死組。納入標準:①冠脈造影檢查確診為急性心肌梗死,年齡≥60歲;②溝通交流能力正常,自愿配合完成隨訪。排除標準:①合并自身免疫系統疾病、血液疾病、炎癥感染性疾病;②有經皮冠狀動脈介入(PCI)史或冠脈旁路手術。其中男51例,女35例;年齡60～78歲,平均(66.04±5.91)歲;冠脈病變支數:單支22例,雙支48例,三支16例。另收集健康志愿者50例為對照組,均無慢性病,男30例,女20例;年齡60～75歲,平均(65.71±6.36)歲。兩組性別、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。本研究經醫院倫理委員會審核批準,受試者簽署知情同意書。

1.2血清miR-30a和miR-221表達水平檢測 采集兩組空腹肘靜脈血5 ml,離心收集血清,轉移至EP管中,-20 ℃保存待測。使用Trizol試劑提取血清總RNA,逆轉錄得到cDNA。使用熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)試劑盒檢測血清miR-30a和miR-221表達水平,反應體系25 μl:10×擴增緩沖液2 μl,cDNA 2 μl,上、下游引物分別1 μl,實時定量PCR擴增的預混合溶液6 μl,雙蒸餾水8 μl。miR-30a上游引物5′-CATACGG TCCAAGTACGGG-3′,下游5′-ACGACCCAAAGTCGATGGA-3′;miRNA-221上游引物5′-ATGTAAAAGCAATAACGAGAAC-3′,下游5′-CGCATCCGAA TACGAACTGTCAG-3′;內參U6上游引物5′-TGCGTTTAAGCACTTCGCGAA-3′,下游5′-ACCACGGAGGCTTCGCTACGC-3′;PCR條件:95 ℃變性1 min,59 ℃ 重性40 s,60 ℃退火20 s,72 ℃延伸1 min,共35個循環。2-△△Ct法定量計算血清miR-30a和miR-221表達水平。

1.3全球急性冠脈事件登記(GRACE)評分 根據老年急性心肌梗死患者的年齡、心率、收縮壓、肌酐、Killp分級及心肌損傷標志物、入院前心臟停搏、心電圖ST段偏移進行評分。總積分≤108分為低危組,總積分109～140分為中危組,總積分>140分為高危組。

1.4心臟彩超檢查 使用彩色多普勒超聲儀檢測老年急性心肌梗死患者和健康志愿者的心室重構相關超聲指標:左心房內徑(LAD)、左心室后壁厚度(LVPWD)、左心室舒張末期內徑(LVEDD)、左心室質量指數(LVMI)、左心室重構指數(LVRI)。

1.5隨訪與記錄 出院后對患者進行1年的隨訪,采取門診復查、電話隨訪等方式,記錄患者生存情況,將全因死亡、再次血運重建、惡性心律失常納入不良預后進行分析。

1.6統計學方法 采用SPSS25.0軟件進行單因素方差分析、SNK-q檢驗、χ2檢驗、Pearson相關性分析、受試者工作特征(ROC)曲線分析。

2 結 果

2.1兩組血清miR-30a、miR-221表達水平比較 急性心肌梗死組血清miR-30a、miR-221表達水平明顯高于對照組(P<0.01)。見表1。

表1 各組血清miR-30a、miR-221表達水平比較

2.2不同冠脈病變支數血清miR-30a、miR-221表達水平比較 冠脈病變三支組血清miR-30a、miR-221表達水平明顯高于雙支和單支組,雙支組血清miR-30a、miR-221表達水平明顯高于單支組(P<0.05)。見表1。

2.3不同危險評分組血清miR-30a、miR-221表達水平比較 血清miR-30a和miR-22表達水平在各組間比較差異均有統計學意義(P<0.01);隨著老年急性心肌梗死患者GRACE危險評分的增加,血清miR-30a、miR-221表達水平逐漸升高(P<0.05)。見表1。

2.4各組心室重構相關超聲指標比較 LAD、LVPWD、LVEDD、LVMI、LVRI在各組間比較差異均有統計學意義(P<0.05);隨著老年急性心肌梗死患者GRACE危險評分的增加,LAD、LVPWD、LVEDD、LVMI逐漸升高,LVRI逐漸降低。見表2。

表2 各組心室重構相關超聲指標比較

2.5老年急性心肌梗死患者血清miR-30a、miR-221表達水平與心室重構相關超聲指標的相關性 老年急性心肌梗死血清miR-30a和miR-221表達水平與LAD、LVPWD、LVEDD、LVMI呈顯著正相關(r=0.872、0.820、0.791、0.768,0.864、0.773、0.754、0.740;均P<0.01),與LVRI呈顯著負相關(r=-0.824、-0.778;均P<0.01)。

2.6老年急性心肌梗死患者預后 隨訪1年期間不良預后12例,其中全因死亡6例、再次血運重建4例、惡性心律失常2例。

2.7血清miR-30a、miR-221對老年急性心肌梗死預后的預測價值 血清miR-30a、miR-221對老年急性心肌梗死患者預后均具有較高的預測價值(P<0.05);血清miR-30a、miR-221聯合檢測的預測價值最高,靈敏度明顯高于各指標單獨檢測(P<0.05)。見圖1、表3。

圖1 血清miR-30a、miR-221對老年急性心肌梗死患者預后預測價值的ROC曲線

表3 血清miR-30a、miR-221對老年急性心肌梗死患者預后預測價值

3 討 論

心肌肌鈣蛋白是重要且容易獲取的心臟標志物,長期用于急性心肌梗死的臨床診斷和病情評估,但患者既往病史、生活方式等會影響心肌肌鈣蛋白的檢測結果,存在一定的假陽性〔6,7〕。miRNA調控人體約30%的基因表達,可通過調控細胞增殖、分化、凋亡等過程參與高血壓、心血管疾病、惡性腫瘤等多種疾病的發生與進展〔8〕。miRNA被脂質包裹后能穩定存在于人體血液中,為血清miRNA檢測作為生物標志物提供可能性〔9〕。研究發現,心肌祖細胞能分泌外泌體進而改善缺血區域的心肌功能,而外泌體能分泌miR-30a,外周血miR-30a高表達可抑制常氧細胞自噬,進而促進心肌細胞凋亡〔10〕。miR-221是從斑馬魚和白血病細胞株中克隆得到的miRNA,在肺癌、乳腺癌、肝癌等多種惡性腫瘤中高表達〔11～13〕。研究發現,血清miR-221表達與心肌損傷標志物心肌肌鈣蛋白及GRACE危險評分相關〔14〕,但其與急性心肌梗死關系的研究仍十分少見。

本研究說明,血清miR-30a、miR-221表達升高會促進老年急性心肌梗死患者冠狀動脈粥樣硬化速度,加速血栓形成,降低硬化斑塊穩定性,抑制心肌細胞的自我修復能力,擴大心肌損傷范圍和程度,加重病情。心室重構是心肌損傷或心肌負荷增加所出現的心室壁厚度、形態、大小等一系列病理改變,左心室整體應變能力降低,超聲心動圖LVMI、LVRI能夠較好地反映心室重構情況〔15〕。本研究提示,老年急性心肌梗死患者血清miR-30a、miR-221高表達能夠促進老年急性心肌梗死患者的心室重構進展,左心室呈進行性擴張,使病情惡化。隨訪1年期間患者不良預后的發生率為13.96%,高于相關研究中全年齡段急性心肌梗死患者1年期間不良預后發生率8.62%〔16〕,可能與本研究對象為老年急性心肌梗死患者,年齡變大有關,提示老年急性心肌梗死患者不良預后發生率明顯升高。