負壓療法聯合生肌玉紅膏對DFU患者血清Th1/Th2細胞因子及miR-155表達的影響

李 珍, 李文霞, 區島良, 黎珊珊, 吳 飛, 張 梅, 謝桃梅, 謝雪花, 王永研

(海南省儋州市人民醫院內分泌代謝科, 海南 儋州 571700)

糖尿病足潰瘍(diabetic foot ulcer,DFU)是糖尿病嚴重并發癥之一,患者足部創面遷延難愈,嚴重影響日常生活,DFU患者可導致90%的非創傷性截肢[1-2]。目前DFU主要治療方法是手術清創、術后外敷藥膏換藥。藻酸鈣敷料屬于濕性敷料,可為創面提供潮濕環境,利于傷口愈合,且具有良好止血功能,臨床應用廣泛,但藻酸鈣敷料易損傷新生肉芽組織[3]。已有研究證實負壓療法能快速減輕組織水腫,使局部循環得到改善,加快肉芽組織生長,加速創面愈合[4]。DFU歸屬于中醫“消渴”“脫疽”,治療原則為提毒祛腐、活血化瘀,生肌玉紅膏出自《外科正宗》其有解毒祛腐、斂瘡生肌功效,是臨床常用中藥方,治療難治性創面療效顯著,且已有研究表明生肌玉紅膏聯合常規治療可抑制糖尿病足患者炎癥反應,改善患足局部癥狀,安全性較高[5]。miRNAs異常表達與DFU愈合密切相關,miR-155是其家族重要成員,參與腫瘤病理過程和炎性反應,而Th1/Th2免疫失衡會造成機體炎癥反應紊亂,延遲DFU愈合[6]。目前生肌玉紅膏聯合負壓創面療法治療DFU相關研究較少,故本研究分析生肌玉紅膏聯合負壓療法對DFU患者血清Th1/Th2細胞因子及miR-155表達的影響,探討其可能起效作用途徑,為臨床用藥提供新的思路。

1 資料與方法

1.1一般資料:納入我院于2021年6月至2022年1月收治的146例糖尿病足(DFU)患者為研究對象,Excel電腦隨機法簡單隨機將患者分為聯合組和對照組,各73例。患者均給予常規清創和基礎治療,均采取負壓創面療法,對照組患者給予藻酸鈣敷料進行治療,聯合組患者給予減味生肌玉紅膏進行治療,總療程均為8周。兩組間一般資料均衡可比(P>0.05)。本研究患者及家屬均知情同意。見表1。納入標準:①糖尿病足診斷符合2019年《中國糖尿病足防治指南》[7]中診斷標準;②患者wagner分級為Ⅱ～Ⅳ級;③患者的踝肱指數處于0.4～1.3范圍[8];④患者均接受超聲檢查,無下肢動脈閉塞情況;⑤對本研究所用藥物無禁忌證。排除標準: ①存在嚴重的心腦血管及肝腎功能嚴重受損患者;②患者存在潰瘍性病變或癌性潰瘍創面;③患者入組前曾接受過免疫抑制劑及其他可能對本研究結果產生影響的藥物或治療;④處于妊娠期或哺乳期的女性患者;⑤患者臨床資料缺失。

表1 兩組一般資料比較

1.2方法:兩組患者均常規清創及基礎治療,根據患者病情給予抗凝、調脂抗感染、控制血糖等治療,并對患者足部潰瘍進行局部清創處理,對有膿腔形成患者及時引流,若患者貧血、低蛋白血癥及營養不達標給予營養支持,炎癥控制后進行營養神經、擴張血管。對照組在基礎治療基礎上應用負壓輔助愈合治療系統(廣州華一生物科技有限公司)進行負壓吸引,將引流管接中心負壓,調節壓力在 150～300mmHg之間,療程為1周,并在此基礎上應用酸鈣敷料外敷干預,將敷藥全部覆蓋創面,厚度3.5mm,外層用無菌紗布包扎,每兩天換藥1次,連續治療8周。聯合組負壓創面療法同對照組,并在此基礎上應用生肌玉紅膏外敷,敷藥量覆蓋全部創面,厚度達3.5mm,外層用醫用無菌紗布包扎,每兩天換藥1次,連續治療8周。

1.3觀察指標:①療效評估:以足部潰瘍的創面完全愈合且患者的臨床癥狀均消失為治愈標準;以足部創面愈合超過60%,臨床癥狀改善明顯為顯效標準;以臨床癥狀有好轉,創面愈合面積高于50%為有效;以患者臨床癥狀無緩解,愈合面積低于50%視為治療無效;總有效為顯效例數和有效例數之和;②應用RNA分離試劑盒(北京康潤誠業生物科技有限公司)從血清中提取RNA,檢測其濃度,用熒光定量PCR法檢測患者治療前及治療1周、2周、4周和8周時的DFU肉芽組織中miR-155 相對表達量;采用組織剪留取創面中央部分肉芽組織,采用熒光定量PCR(Fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)法測定DFU肉芽組織中miR-155 相對表達量,相關引物由上海生工生物工程有限公司提供。③檢測患者治療前及治療后的血清Th1和Th2相關的細胞因子的水平:Th1相關細胞因子包括腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、干擾素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白細胞介素-2(Interleukin-2,IL-2);Th2相關細胞因子包括白細胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)、白細胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)、白細胞介素-5(Interleukin-5,IL-5);采集患者空腹血6mL,離心分離血清血漿和冷藏待測處理,進行批量檢測。通過羅氏cobas全自動生化分析儀檢測血清細胞因子TNF-α、IL-2、IFN-γ 、IL-4、IL-5、IL-10 水平。④對治療前、治療8周后的血常規、肝腎功能指標進行記錄:采集空腹血8mL,常規離心分離血清血漿和冷藏待測處理,進行批量檢測。采用羅氏cobas全自動生化分析儀檢測血常規、肝腎功能指標變化情況。嚴格按照說明書指導進行檢測,由同一檢驗科醫師參照相關說明書進行檢測。

2 結 果

2.1兩組治療效果比較:對患者進行8周治療,對患者的治療效果進行評價,結果見表2:觀察組患者的治療有效率(91.78%,67/73例)高于對照組(79.45%,58/73例),組間具有差異(P<0.05)。

表2 兩組患者治療效果比較n(%)

2.2兩組治療前后miR-155相對表達量比較:治療方法、時間及二者的交互作用對miR-155相對表達量的影響均有統計學意義(P<0.05)。隨著時間的推移,兩組患者的miR-155相對表達量均降低,且與對照組患者相比,觀察組患者的降低趨勢更明顯。見表3 。

表3 兩組治療前后miR-155相對表達量比較

2.3兩組治療前后Th1和Th2相關因子水平比較:兩組患者在治療前Th1/Th2相關細胞因子處于相同水平,組間差異無統計學意義(P>0.05),經過治療,8周后患者的各項因子水平顯著改善,TNF-α、IL-2、IFN-γ均降低,IL-4、IL-5、IL-10均升高,且與對照組相比,觀察組患者治療前后差值更大(P<0.05)。見表4 、表5。

表4 兩組治療前后Th1相關因子水平比較

表5 兩組治療前后Th2相關因子水平比較

2.4兩組治療前后血常規指標比較:治療前兩組的WBC、RBC、PLT水平比較均無統計學差異(P>0.05);經過治療,患者的WBC水平顯著降低,且觀察組治療前后差值大于對照組,差異有統計學意義(P<0.05),但治療前和治療后兩組RBC、PLT水平比較,差異均無統計學意義(P>0.05)。見表6。

表6 兩組治療前后血常規指標比較

2.5兩組治療前后肝腎功能比較:治療前及治療后兩組肝腎功能指標比較無統計學差異(P>0.05),見表7。

表7 兩組治療前后肝腎功能比較

3 討 論

DFU是由于下肢遠端神經異常改變及血管不同程度病變導致足部感染、潰瘍并有深層組織破壞,嚴重者可發展至壞疽、截肢甚至死亡,是導致社會沉重負擔嚴重公共衛生問題。藻酸鈣敷料可吸收創面滲出物,維持創面清潔,促進上皮組織形成,但治療效果并不滿意。負壓療法能及時排除污物和細菌,吸除瘀滯液體,減輕水腫,使毒素和代謝產物對機體的損傷減少,促進創面愈合[9]。目前,應用中西醫內外結合方案治療DFU的應用越來越廣泛,外治形成“清創、去腐生肌、爬皮”的序貫治療特色。

中醫學理論認為,脫疽多由外邪侵襲、阻絡傷筋,嗜食肥甘厚膩、房勞過度耗傷氣陰,肢端失于濡養而發,病機為寒、濕、熱、瘀以及氣血虧虛導致的本虛標實之證[10]。最早《黃帝內經·癰疽》中載“寒氣化為熱,熱盛則肉腐,肉腐則為膿……臟傷故死矣”。隋代巢元方《諸病源候論》中載“消渴者久不治則經絡壅澀,留于肌肉,變發癰疽”,為治療DFU奠定了基礎。生肌玉紅膏始于《外科正宗》,可止痛消炎、清熱解毒、去腐生肌,方中當歸補益營血而生肌肉,紫草涼血活血、活血解毒,白芷祛風止痛消腫排膿,血竭活血止痛、生肌斂創,甘草與當歸相須為用,解瘡破潰,佐以輕粉、白蠟、麻油等,具有活血化瘀、解毒鎮痛、潤膚生肌功效。

miRNAs可致細胞增殖、分化、凋亡及病毒感染,已有研究表明其能在多種疾病進展中起調節作用[11]。研究表明miRNA 可調節并控制DFU愈合機制作為治療靶點,并能通過外泌體、鎖核酸等使對應的miRNA激活,DFU創面組織細胞發生變化,迅速使DFU愈合,為DFU患者治療提供新解決方法[12]。miR-155是miRNAs家族重要成員,參與機體免疫細胞的生物過程,通過調節細胞功能影響皮膚創面愈合。本研究結果顯示兩組患者的miR-155相對表達量均降低,且觀察組更低,同時觀察組治療有效率高于對照組,說明生肌玉紅膏外敷聯合負壓療法能調節創面肉芽組織中miR-155表達,提高療效。負壓療法可控制皮膚創面較低量負壓,通過藥膏及引流管將負壓有效作用在潰瘍創面上,起到促進愈合效果。同時,創面應用生物膜封閉,降低感染發生率,從而提高療效。生肌玉紅膏主要藥物為當歸和紫草,當歸揮發油能有效使促炎因子與炎癥介質分泌抑制,清除自由基增強免疫,紫草中含有呋喃氫醌衍生物,可通過下調突變急性髓系白血病細胞的miR-155表達,抑制真菌、部分革蘭氏陽性菌等,從而達到抗炎和抗菌的作用。

研究表明DFU患者會出現炎癥反應紊亂現象,造成機體Th1/Th2免疫失衡[13]。Th1細胞對細胞內病原體發揮防御作用,與炎癥反應、組織損傷有密切關系。Th2具有抗炎作用,IL-4能抑制IFN-γ對巨噬細胞活化作用,IL-10可抑制巨噬細胞吞噬功能。本研究結果顯示經過治療8周后兩組TNF-α、IL-2、IFN-γ、白細胞計數(White blood cell count,WBC)均降低,且觀察組更低,IL-4、IL-5、IL-10均升高,且觀察組更高,提示生肌玉紅膏外敷聯合負壓療法可降低機體炎癥反應,調節炎癥因子,降低WBC。分析原因為負壓療法可使血流加速,改善局部微循環,避免了炎性細胞釋放及入侵,而生肌玉紅膏中紫草、血竭等中藥方可以調節Th1/Th2細胞分化,降低炎癥反應,這是其治療DFU的重要機制之一。本研究對兩組的肝腎功能進行了客觀分析,兩組治療后肝腎功能無統計學意義,說明生肌玉紅膏不會增加藥物的不良反應并對肝腎功能造成損害,安全性較好,值得臨床進一步推廣。

綜上所述,生肌玉紅膏聯合負壓療法治療DFU患者療效顯著,可使患者炎癥反應大幅度降低,血管內皮生長加速,改善足部血流,加快創面愈合,臨床總體療效提高,且安全性較好,值得臨床推廣使用。