高效液相色譜法同時測定非發酵豆制品中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜和糖精鈉

◎ 繆少霞

（建德市食品藥品檢驗檢測中心，浙江 建德 311600）

我國是大豆的原產地，也是最早生產加工豆制品的國家。傳統非發酵豆制品，包括豆腐、豆腐皮、豆腐干、腐竹等，口感細膩、質地柔軟、味道鮮美[1]。其蛋白質組分含量較高，包含人體必需的8 種氨基酸成分，可以降低血液中膽固醇的含量，對防止心血管硬化有很好的效果[2]。另外，還含有多種礦物質，能補充鈣、鐵、鎂等無機鹽的含量，促進骨骼發育，提高蛋白質的消化吸收率[3]。在非發酵豆制品生產過程中，為增加產品的色、香、味，延長保質期，廠商會添加一定量的食品添加劑。防腐劑和甜味劑廣泛應用于食品行業中，且經常被混合添加使用。目前，同時測定食品中防腐劑和人工合成甜味劑的研究較多[4-6]，但應用于非發酵豆制品的報道較少。因此，為探究市售非發酵豆制品是否存在超范圍使用食品添加劑，本實驗建立了同時測定安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的高效液相色譜法，檢測了市售豆腐干等非發酵豆制品的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的含量。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent 1260 高效液相色譜儀系統（配置DAD 檢測器）：美國安捷倫科技有限公司；FA2004N 電子分析天平：上海菁海儀器有限公司；Direct-pureup 10 超純水及RO 純水組合型一體機：Rephile；KQ-500 超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；sigma 3K15高速離心機：曦瑪離心機（揚州）有限公司。

安賽蜜、苯甲酸和糖精鈉標準物質（1 000 μg·mL-1），壇墨質檢科技股份有限公司；山梨酸標準物質（1.00 mg·mL-1），中國計量科學研究院；甲醇：天津四友精細化學品有限公司，色譜純；乙酸銨：天津市福晨化學試劑廠，分析純；乙酸鋅：西隴化工股份有限公司，分析純；亞鐵氰化鉀：國藥集團化學試劑有限公司，分析純；實驗用水為超純水。

1.2 方法

1.2.1 溶液的配制

亞鐵氰化鉀溶液：準確稱取106 g 亞鐵氰化鉀，加水溶解并定容至1 000 mL 容量瓶中。

乙酸鋅溶液：準確稱取220 g 乙酸鋅，加適量水溶解，加30 mL 冰乙酸，并用水定容至1 000 mL。

1.2.2 標準儲備液的配制

分別吸取10 mL 苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉標準儲備溶液，用水定容至50 mL，配制成濃度為200 mg·L-1的混標液。

1.2.3 標準工作液的配制

分別準確吸取4 種添加劑標準儲備液0 mL、0.05 mL、0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL 和2.50 mL，用水定容到10 mL，即得4 種添加劑濃度分別為0 mg·L-1、1 mg·L-1、5 mg·L-1、10 mg·L-1、20 mg·L-1和50 mg·L-1的混合標準溶液。

1.2.4 樣品制備與提取

稱取約2.0 g 樣品于50 mL 具塞離心管中，加水25 mL 渦旋混勻，超聲20 min 后加亞鐵氰化鉀2 mL、乙酸鋅2 mL，混勻后離心5 min，將上清液轉移至容量瓶中，用水定容至50 mL。吸取上清液，經0.22 μm微孔濾膜過濾后，作為供試品溶液。

1.2.5 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱溫：35 ℃；進樣量：20 μL；流速：1 mL·min-1；流動相：甲醇∶乙酸銨溶液=5 ∶95（V/V）；檢測波長：230 nm。

1.2.6 樣品的測定

準確吸取供試品溶液20 μL 用于進樣，按1.2.5 項下條件進行分析，根據保留時間定性，峰面積定量。

2 結果與分析

2.1 標準圖譜及樣品分析

在1.2.5 色譜條件下，50.0 mg·L-1混標溶液、樣品H-9 的色譜圖分別見圖1、圖2。

圖1 混合標準溶液的色譜圖

圖2 樣品H-9 的色譜圖

2.2 線性關系和靈敏度

按上述實驗條件檢測混合標準溶液，以橫坐標為質量濃度，以縱坐標為峰面積繪制標準曲線。

4 種添加劑在0～50 mg·L-1，各組分線性關系良好，線性回歸方程、相關系數及檢出限（S/N=3）、定量限（S/N=10）見表1。結果表明，本方法檢出限和定量限均小于GB 5009.28ü 2016[7]和GB/T 5009.140ü 2003[8]中的限量，靈敏度較高。

表1 4 種添加劑標準溶液線性關系表

2.3 加標回收和精密度實驗

通過在樣品H-10（空白樣品）中添加3 個質量濃度分別為0.005 g·kg-1、0.010 g·kg-1、0.050 g·kg-1的標準溶液，分別進行6 次重復實驗，從而得出加標回收率、精密度。如表2 所示，該條件下4 種添加劑的回收率為96.7%～108.2%，RSD 為0.22%～3.00%。該實驗研究表明，本方法的回收率和精密度符合GB/T 27404ü 2008[9]標準要求。

表2 精密度和回收率實驗結果表

2.4 樣品的測定

按上述處理方法和色譜條件，檢測市售10 批次非發酵豆制品豆腐干中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉的含量，結果詳見表3。在GB 2760ü 2014[10]中規定，非發酵豆制品豆腐干類不允許添加苯甲酸、安賽蜜，山梨酸的最大使用量為1.0 g·kg-1，其中新型豆制品中糖精鈉的限量為1.0 g·kg-1。從表3 可以看出，10 批次樣品中，有4 批次檢出含有安賽蜜，檢出率為40%，均為非法添加；1 批次樣品檢出苯甲酸，檢出率為10%，為非法添加；9 批次樣品檢出山梨酸，均未超出最大使用量；1 批次樣品檢出含有糖精鈉，H-4樣品為新型豆制品，在合理添加使用范圍內。

表3 實際樣品的測定結果表 單位：g·kg-1

3 結論

采用高效液相色譜法同時測定了非發酵豆制品豆腐干中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉的含量，結果顯示，在0～50 mg·L-1內4 種添加劑的線性關系良好，相關系數均高于0.999，回收率為96.7%～108.2%，相對標準偏差（RSD）為0.22%～3.00%，方法檢出限等達到實際檢測工作要求。本實驗通過對非發酵豆制品豆腐干類中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉含量的初步研究調查發現，商家為改善產品感官和品質，延長食品保存期限，存在使用非法添加劑的現象，應引起公眾和相關政府部門的注意。