注射用美羅培南含量測定不確定度評定

李娜,李惠,陳倩倩,王娜,鄔麗琴,潘竟海,趙亞男

(巴彥淖爾市產品質量計量檢測中心, 內蒙古 巴彥淖爾 015000)

任何測量都存在不確定度,測量不確定度是被測量客觀值在某一量值范圍內的一個評定[1]。任何檢驗結果都會在真值附近偏離,不確定度直接反映出檢驗結果的可靠性。不確定度量值越小檢測結果越接近于真值。不確定度表征合理的賦予被測量值的分散性由多個分量組成,測量結果為被測量值的最佳估計[2]。是目前社會上普遍認可和建議使用的藥品質量評價手段[3]。在藥品檢驗過程中存在很多測量過程,而測量結果的準確性直接決定著藥品質量的品質。當需要根據藥品分析檢驗結果做出決策判斷時,檢測結果的可靠性是非常關鍵的。藥品檢驗是藥品監管工作的重要技術支持,檢測結果對藥品監管的公正性有直接的影響。藥品檢驗機構使用經典誤差理論方法計算檢測結果誤差的方法,有一定的局限性,因此藥品檢測結果不確定度開始逐步運用于藥學領域[4]。不確定度評定對客觀評價藥品質量可靠性非常重要。不確定度評定在我國藥品檢測中的認識和應用是從實驗室認證認可起步的。2003年中國實驗室認可委員會對認可實驗室提出不確定度測量方面的相關要求[5],推動了不確定度評定在藥品檢驗工作中的應用。隨后一些科研院所將不確定度評定引入到藥品研究和藥品標準制定的過程中。經過多年的應用積累,不確定度評定現如今已經進入到藥品分析的日常工作。目前不確定度在藥品質量分析評價方面應用非常廣泛,藥品質量評價人員將不確定度評定作為藥品質量分析的重要工作內容。總之,不確定度評定既可以對藥品檢驗過程進行分析,確定藥品檢驗的關鍵影響因素,可以有效地提高藥品檢測結果的準確性及權威性[6-9],又可以為不同實驗室、檢驗方法、檢驗儀器之間的數據認可提供統一的標尺[10]。 美羅培南是一種可以抑制細胞壁形成的具有抗菌作用的廣譜碳青霉素烯類抗生素[11-12]。1994年,美羅培南以商品名“Mepem?”在意大利上市,1999年在中國境內上市,商品名為“美 平”(規格0.5 g)。2020年,深圳市海濱制藥有限公司生產的注射用美羅培南在國內首家通過仿制藥質量與療效的一致性評價[13]。注射用美羅培南為美羅培南和無水碳酸鈉按處方比例無菌分裝制成,臨床多用于治療混合感染和嚴重感染[14]。

據國家藥品監督管理局數據查詢可知,目前國內注射用美羅培南批準文號27個。本文依據國家藥品監督管理局標準YBH 12332020 、CNAS-GL006—2019《化學分析中不確定度的評估指南》[15]、JJF 1059.1—2012《測量不確定度評定與表示》[16]分析評定注射用美羅培南含量測定不確定度,以提高注射劑含量測定的準確性,強化藥品生產質量,為藥品監管工作提供強有力的技術性支撐。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

e26958高效液相色譜儀、梅特勒CPA224S電子天平。美羅培南對照品(批號130506-202004,純度86.8%)。注射用美羅培南;色譜純乙腈;優級純磷酸;分析純三乙胺;娃哈哈純凈水。

1.2 試驗方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱為Agilent C18(5 μm,4.6 mm×250 mm) ;以0.1%三乙胺溶液-乙腈(體積比為93.5∶6.5)為流動相;檢測器:二極管陣列檢測器;檢測波長為220 nm; 進樣量10 μL;柱溫: 30 ℃;流速:1.0 mL·min-1。

1.2.2 測定方法

供試品溶液 取本品10瓶,分別加適量水溶解,用流動相溶解并定量稀釋至100 mL量瓶中,搖勻。精密量取5 mL置50 mL量瓶中,制成每1 mL中含美羅培南(按C17H25N3O5S計)0.5 mg的溶液,作為供試品溶液。對照品溶液 另取美羅培南對照品適量置25 mL量瓶中,加流動相溶解并定量稀釋至刻度,制成每1 mL中含美羅培南0.5 mg的溶液。

1.3 測量模型

依據國家藥品監督管理局標準YBH12332020的規定,按照高效液相色譜法測定注射用美羅培南含量的數學模型如下:

(1)

X:供試品標示百分含量,%;AX:供試品的峰面積;AR:對照品的峰面積;MR:對照品取樣量g;VX1:供試品第一次稀釋體積mL;VX2:供試品第二次稀釋體積mL;VR:對照品稀釋體積mL;B:規格(0.5g/瓶);PR:對照品純度;V量:供試品溶液量取體積。

都市生態的內涵十分豐富，除了自然生態之外，還涉及到了都市的人文生態，因此都市生態不僅關系著城市居民的生活環境質量，同時也影響著其精神層面的發展[1]。通常情況下，我們會將都市生態分為兩個部分，其中自然生態即是指城市環境，人文生態則是指一些歷史遺留的古建筑和非物質文化遺產。當前階段的市政工程管理存在明顯的片面性，普遍存在重視自然生態保護，忽視人文生態保護的情況，對文化遺產的繼承發展造成了嚴重的阻礙。

由高效液相色譜法測定注射用美羅培南含量測定的數學模型可知,方法的重復性,供試品的峰面積AX,對照品的峰面積AR,對照品取樣量MR,供試品稀釋體積VX,對照品稀釋體積VR等是不確定度的主要來源。

2 不確定度評定

2.1 對照品的不確定度

2.1.1 對照品稱量的相對不確定度urel(MR)

天平允差和天平示值變動是美羅培南對照品稱量過程中的不確定度來源。由MR代表美羅培南對照品的取樣量,采用B類方法對其進行評定。

天平允差不確定度u1(MR)和天平示值變動引起的不確定度u2(MR):通過查看電子天平檢定證書可知,MS205DU天平檢定證書示值最大允差為±0.000 05 g,假設計算標準不確定度時采用的是矩形分布。天平重復性誤差為±0.000 1 g,計算標準不確定度時假設采用的是矩形分布則:

(2)

(3)

(4)

美羅培南對照品平行稱量2份,因此,對照品稱量分別引入的相對不確定度為:

(5)

(6)

(7)

2.1.2 對照品定容體積相對不確定度urel(VR)

容量瓶校準和溫度變化對對照品溶液體積VR的不確定度產生影響,假設采用B類方法對其進行評定。容量瓶體積:25 mL容量瓶(A級)最大容量誤差為±0.03 mL,計算標準不確定度時假設是三角形分布:

(8)

(9)

容量瓶體積和溫度效應兩個分量引起的對照品體積相對不確定度

(10)

色譜峰測定重復性體現了高效液相色譜儀對測定結果不確定度的影響。實驗中對兩份美羅培南對照品分別進樣3針,2針共計進樣5針,按峰面積計。由于對照品重復性測量次數較少,因此采用A類極差法方法對其進行評定[14]。美羅培南對照品1重復進樣2針峰面積4 505 590和4 521 719,平均峰面積4 513 654,極差16 129。對照品2重復進樣3針峰面積為4 563 481,4 577 231,4 586 035,平均峰面積4 575 582,極差22 554。

對照品1重復進樣引起的相對不確定度urel(AR1):

(11)

(12)

(14)

(15)

2.2 供試品不確定度

2.2.1 供試品稀釋體積VX相對不確定度urel1(VX)和urel2(VX)

容量瓶校準和溫度變化對對照品溶液體積VR的不確定度產生影響,采用B類方法對其進行評定。供試品定容到100 mL量瓶中產生的相對不確定度用ur1(VX)表示,精密量取5 mL到50 mL量瓶中產生的相對不確定度用ur2(VX)表示。

容量瓶體積:100 ml容量瓶(A級)和50 mL容量瓶(A級)最大容量誤差分別為±0.1 mL和±0.05 mL,計算標準不確定度時假設是三角形分布,則:

(16)

(17)

溫度效應:容量瓶的體積膨脹遠小于液體的體積膨脹,因此忽略液體的體積膨脹對不確定的影響。實驗室的溫度波動范圍在±2 ℃之間,水的膨脹系數為2.1×10-4/℃,100 mL和50 mL容量瓶計算標準不確定度時假設是矩形分布,則:

(18)

(19)

(20)

(21)

2.2.2 供試品量取體積V量相對不確定度urel1(V量)

同理,由上述供試品稀釋體分析可知,5 mL移液管體積和溫度分別引入的不確定度為:

(22)

(23)

(24)

2.3 測量方法重復性相對不確定度urel(rep)

取注射用美羅培南10瓶,制成試品溶液測定含量,測得結果為97.89%,100.20%,97.36%,98.95%,100.10%,96.43%,99.26%,101.88%,98.03%,96.43%。由上述測量結果可知平均含量為98.65%,標準偏差為1.76。

(25)

2.4 合成相對標準不確定度

(26)

2.5 擴展不確定度

假設為正態分布時,概率p為0.95時k=2,則注射用美羅培南含量測定擴展不確定度

(27)

3 結果

根據上述不確定度分析結果可知,注射用美羅培南含量測定結果為98.65%±1.61% ,第二項為U95之值。由上述不確定度分析結果可知,對照品稱量、供試品溶液精密量取體積和對照品峰面積對此次含量測定結果存在較大的影響。提示測量儀器的精密度、靈敏度、檢驗人員稱量規范性等儀器和檢驗操作細節是影響檢驗結果的關鍵因素。建議開展藥品檢驗前需確保檢驗儀器檢定校準的合格性,加強對檢驗過程中涉及的精密儀器的日常維護保養工作,確保藥品檢驗過程中檢驗儀器的最佳工作狀態。藥品檢驗工作中優先選擇高精密度的電子稱量天平或者通過增加對照品取用量、減少對照品和供試品溶液的稀釋步驟的方式來提高對照品稱量和供試品溶液制備的準確度。建議在開展藥品分析檢驗的過程中盡量選用高純度的標準品、使用精密的定容量具(A級或允差較小的器具)開展實驗并注重控制實驗環境條件。同時通過藥品檢驗機構需不斷地通過開展內外部培訓不斷提高藥品檢驗人員專業素質,強化藥品檢驗人員的實驗操作技能。盡可能減少檢驗過程中對不確定度影響貢獻大的實驗因素,提高藥品檢驗結果的準確性和可靠性。藥品質量分析不確定度的評定有助于藥品檢驗人員清晰地了解藥品檢驗過程中的不同影響因子。并利用不確定度評定結果和來源分析有針對性地制定實驗室內部質量控制計劃,保障和提升實驗室的檢驗能力和水平。尤其是當藥品檢驗結果接近藥品限度邊緣時,有助于檢驗結果進行分析研判保障。同時還可以為藥品質量標準的制修訂提供合理的科學依據。