免疫熒光分析法檢測ST2 蛋白的臨床性能評價

賴秀娟（通信作者），陸建偉，蔡美玲，陸葉青，黃小華

1 巴迪泰（廣西）生物科技有限公司 （廣西南寧 530031）；2 廣西中醫藥大學第一附屬醫院 （廣西南寧 530022）

心力衰竭主要指心臟結構或功能發生障礙而引起的心臟循環障礙癥候群，是心肌疾病、高血壓、冠心病和心臟瓣膜病等心血管疾病的終末階段體現。心力衰竭好發于老年人，在70 歲以上人群中的發病率高于10%[1-2]。近年來，隨著人口老齡化不斷加劇，心力衰竭等心血管疾病患病人數不斷增加[3]。心力衰竭具有較高的發病率、復發率及病死率，嚴重影響人們的身體健康和生命質量。因此，對心力衰竭患者進行有效的早期診斷、控制病情惡化和預后評估具有十分重要的作用。臨床主要依據患者的體征、癥狀、病史、影像學檢查及實驗室檢查等資料診斷心力衰竭。隨著臨床檢驗技術的不斷發展，生物標志物在預測及診斷心力衰竭中起到了重要的作用，目前應用較廣泛的為N 末端腦鈉肽前體（N terminal proB-type natriureticpeptide，NT-proBNP）及腦鈉肽（brain natriuretic peptide，BNP）。國內外研究發現，NT-proBNP 與心力衰竭患者病情﹑預后密切相關，可反映心室內壓和容量負荷，診斷左心室活動異常的靈敏度和特異度均較高[4-9]。但NT-proBNP 水平易受年齡、性別、腎臟功能、體質量指數等多種因素的影響，無法準確反映心力衰竭發生、發展的全過程。有研究發現，ST2 蛋白在心力衰竭患者中表現出獨特的生物學特征，對臨床具有一定的指導作用[10]。ST2 蛋白具有單一閾值，方便解讀，且幾乎不受性別、年齡、體質量指數和腎功能等因素的限制，能夠彌補常規生物標志物（NT-proBNP、BNP）的不足。聯合檢測ST2 蛋白及常規生物標志物可為心力衰竭的早期診斷、治療監測、危險分層及預后評估提供更全面的信息。

目前，酶聯免疫吸附法為檢測ST2 蛋白的主要方法，市場上主流產品包括美國Critical Diagnostics 公司的Presage ST2 試劑等。彭劍橋[11]的研究結果顯示，Presage ST2 檢測ST2 蛋白的批內精密度分別為4.8%和2.8%，批間精密度分別為5.9%和6.7%，線性范圍為0.000～206.622 ng/ml。為了驗證巴迪泰（廣西）生物科技有限公司生產的免疫熒光分析法ST2 蛋白檢測試劑的性能，本研究以Presage ST2 試劑為對照，比較兩種方法檢驗結果的相關性與一致性，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

血清樣本：選取2022 年11 月至2023 年2 月廣西中醫藥大學第一附屬醫院110 例患者的血清樣本，排除黃疸、溶血、脂血、高濁度或采樣量不足樣本。患者年齡37～86 歲，男62 例，女48 例；心力衰竭陽性樣本37 個，健康者血清樣本73 個。

試劑與儀器：美國Critical Diagnostics 公司生產的Presage ST2 檢測試劑及配套校準品、酶標儀；巴迪泰（廣西）生物科技有限公司生產的ST2 蛋白檢測試劑及配套的質控品、A5000 PLUS 全自動干式熒光免疫分析儀。

1.2 方法

1.2.1 試驗前準備

（1）操作人員熟悉并掌握對照產品和驗證產品的樣本制備方法、檢測儀器操作方法；（2）試驗前，對各檢測系統分別行質控檢測，確保系統性能良好、檢測數據可靠；（3）對超過試劑盒線性范圍的樣本，按要求進行稀釋。

1.2.2 相關性分析

采用對照試劑和驗證試劑同時測試110 個臨床血清樣本，使用線性回歸法分析兩種檢測方法的相關性，擬合一元線性回歸方程，計算相關系數r，一元線性回歸方程斜率處于0.90～1.10 間，且r>0.975，說明線性相關良好。

1.2.3 一致性分析

采用Kappa檢驗分析兩種方法檢測結果的陽性符合率、陰性符合率（定性判斷），Kappa≥0.75，認為一致性高。采用Bland-Altman Plot 分析兩種方法定量檢測結果的一致性，將對比方法和驗證方法每個樣本的檢測值之差與相應兩個方法的檢測均值做散點圖，平均值之差作為基準值，進行散點展示，觀察離群值，90%在Mean±1.96s范圍內即符合要求。

1.3 統計學處理

采用SPSS 22.0 統計軟件進行數據分析。采用MedCalc（Version 19.4.0）作圖。相關性采用一元線性回歸分析，以相關系數r表示；一致性分析采用Kappa檢驗和Bland-Altman Plot 法。

2 結果

2.1 相關性分析

線性回歸分析法擬合的一元線性回歸方程為y=0.9878x+1.6977，斜率b=0.9878，相關系數r=0.9959，表明兩種方法的相關性密切，見圖1。

圖1 對照方法與驗證方法檢測結果線性相關圖

2.2 一致性分析

Kappa檢驗結果顯示，Kappa系數為0.901，表明兩種方法定性判斷檢測結果的一致性高。Bland-Altman Plot 分析顯示，兩種方法檢測血清ST2 蛋白的結果位于Mean±1.96s內的數值占96.36%（106/110），符合占比≥90%的要求，見圖2。

圖2 對照方法與驗證方法檢測結果的Bland-Altman Plot 分析圖

3 討論

心力衰竭是由不同因素引起的心臟病的嚴重階段，復發率和病死率均較高，不僅對患者的生命安全造成威脅，也加重了社會及家庭的負擔。因此，實現對心力衰竭患者的早期診療，對抑制病情惡化和再次入院至關重要。除通過觀察癥狀、體征及采用心電圖、影像檢查等手段對心力衰竭進行診斷篩查外，現代醫學亦通過檢測各種生物標志物實現對心力衰竭的診治。生物標志物檢測可快速、便捷、有效地對心力衰竭進行早期診斷、治療監測和預后評估。研究發現，ST2 蛋白是心力衰竭的重要生物標志物，心力衰竭患者血清ST2 蛋白濃度顯著升高，且與其病情嚴重程度、重復入院和病死風險等存在密切關聯[12-14]。

酶聯免疫吸附法為檢測ST2 蛋白的主流方法，本研究以該法為對照，驗證免疫熒光分析法檢測ST2 蛋白的性能。結果顯示，兩種方法的線性相關系數r為0.9959，具有密切的相關性；Kappa定性分析結果顯示，Kappa為0.901，一致性高；Bland-Altman Plot 定量分析結果顯示，檢測結果位于Mean±1.96s內的占比為96.36%，表明兩種檢測方法具有很高的一致性。

綜上所述，巴迪泰（廣西）免疫熒光分析法的ST2 試劑與酶聯免疫吸附法的Presage ST2 試劑檢測ST2 蛋白的相關性密切、一致性高，等效性良好，均可滿足臨床檢驗需求，臨床可根據需要選擇適合的檢測方法。