免疫性復發性流產患者CD31、CD34及FⅧ表達量變化及其與病理學特征的關系＊

董 潔 李 晶 王沙沙 姚 嵐

安陽市婦幼保健院病理科 (河南 安陽 455000)

復發性流產即患者連續發生3次及3次以上12周前妊娠產物(通過B超或者組織學檢查證實的宮內妊娠)丟失，其中60.0%以上為免疫性復發性流產，不包括異位妊娠、生化妊娠所導致的流產[1-2]。現代研究表明妊娠成功的關鍵步驟之一是配偶之間生殖免疫功能正常，不過機體的免疫功能與行為受到嚴格的調控，如果發生異常，就可導致免疫性流產的發生[3]。約2/3的免疫性復發性流產婦女有血栓形成傾向，且伴隨有血液高凝狀態。當前臨床上最常見的遺傳性血栓形成疾病之一是活性蛋白C抵抗、抗凝蛋白C、凝血因子Ⅲ(FⅧ)的缺乏。其中FⅧ也稱抗血友病球蛋白、抗血友病因子，是一種由肝臟合成的絲氨酸蛋白酶，在機體的抗血栓以及促進纖溶過程中發揮重要作用[4]。當前有研究表明，CD31、CD34表達與子宮內膜異位癥、胎膜早破、流產等存在相關，具有調節基因轉錄、DNA修復、細胞分化、細胞成熟、表觀遺傳學等作用[5]。本文具體探討與分析了免疫性復發性流產患者CD31、CD34及FⅧ表達量變化及其與病理學特征的關系，希望為明確免疫性復發性流產的發生機制提供一定的參考。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象2021年2月到2022年9月選擇在安陽市婦幼保健院診治的非人為原因流產100例作為研究組，同期選擇在安陽市婦幼保健院人工流產患者100例作為對照組。

納入標準：所有患者自愿參與本次課題研究；所有患者入院前3個月均未服用影響凝血功能與血小板功能的藥物；無生殖器官畸形；無生殖系統感染；本次研究得到了安陽市婦幼保健院倫理委員會的批準；依從性良好；研究組符合免疫性復發性流產的診斷標準。排除標準：合并高危傳染性疾病的患者；合并有肝腎疾病、甲狀腺疾病病史者；患有精神、意識障礙的患者；合并有交流障礙疾病者；臨床資料不全者。兩組患者的年齡、受教育年限、血壓、心率等對比無顯著差異(P＞0.05)。見表1。

表1 兩組患者的一般資料對比

1.2 觀察指標取所有患者流產后的蛻膜組織標本保存在-80.0℃冰箱，購買CD31、CD34及FⅧ相關單克隆抗體，行免疫組化染色，陽性對照片由安陽市婦幼保健院病理科提供，由磷酸鹽緩沖液代替一抗做陰性對照。蛻膜組織樣本經福爾馬林固定后，石蠟包埋，連續3 μm厚度切片。然后加入一抗，4℃放置于室溫約30 min，洗滌3次后(每次洗滌時間為15 min左右)。滴加二抗，37℃放置10 min，磷酸鹽緩沖液洗滌3次；DAB顯色5 min左右，蘇木素復染細胞核，封片觀察。CD31表達于細胞膜，CD34表達于細胞膜/細胞漿，FVIII表達于細胞漿。每張切片于高倍鏡(400倍)下隨機計數5個視野，陽性細胞數大于或等于20.0%為陽性表達。病理診斷結果全部由安陽市婦幼保健院病理科具有豐富診斷經驗的病理醫師進行診斷(副主任醫師及其以上職稱，在病理科工作年限大于或等于5年)。同時由研究者采用統一的指導語，調查收集所有患者的一般資料等。

1.3 統計方法所獲資料采用Epidata3.1 建立數據庫，選擇SPSS 21.00軟件進行分析，計量數據(都符合正態分布)比如FⅧ陽性細胞百分率以均數±標準差(±s)表示，對比采用t檢驗；計數數據采用n、%與例數表示，對比采用χ2檢驗，多因素分析采用條件Logistic回歸分析，相關性分析采用Spearsman分析，P＜0.05為有統計學意義。

2 結 果

研究組蛻膜組織CD31、CD34及FⅧ陽性細胞百分率低于對照組(P＜0.05)。見表2。

表2 兩組血小板CD31、CD34及FⅧ陽性細胞百分率對比(%)

2.2 相關性分析在兩組200例患者中，Spearsman分析顯示蛻膜組織中CD31、CD34、FⅧ表達量與免疫性復發性流產都存在相關性(P＜0.05)。見表3。

表3 免疫性復發性流產患者CD31、CD34及Ⅷ表達量變化及其與病理學特征的關系(n=200)

表3 免疫性復發性流產患者CD31、CD34及Ⅷ表達量變化及其與病理學特征的關系(n=200)

指標 CD31 CD34 FⅧr 0.672 0.711 0.693 P ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.3 影響因素分析在兩組200例患者中，在免疫性復發性流產作為因變量，以蛻膜組織中CD31、CD34、FⅧ表達量作為自變量，多因素條件Logistic回歸顯示蛻膜組織中CD31、CD34、FⅧ表達量都為導致免疫性復發性流產發生的重要因素(P＜0.05)。見表4。

3 討 論

復發性流產在臨床上比較常見，由于各種因素的影響，國內外復發性流產的發生率呈上升趨勢。多數復發性流產與免疫因素有關，母胎免疫耐受異常等病理特征是復發性流產重要機制之一，為此免疫性復發流產占復發性流產的60.0%以上[6-7]。

現代研究表明胎盤組織CD31、CD34是最主要的黏附受體之一，CD31、CD34的低表達可引起血小板聚集、血栓形成。使用免疫組化法測定胎盤組織CD31、CD34陽性表達水平已成為檢查胎盤功能的一種重要手段，也具有操作成熟度高、準確性強等優點。本研究顯示研究組蛻膜組織CD31、CD34及FⅧ陽性細胞百分率低于對照組(P＜0.05)，表明免疫性復發流產患者多伴隨有血小板CD31、CD34及FⅧ的異常表達。分析可知：CD31、CD34對調節機體的內皮細胞功能、血小板聚集、血液流通具有重要作用，其異常表達可引起患者血液改變，影響組織供血供氧，從而導致流產的發生[8]。FⅧ是一種由肝臟合成的絲氨酸蛋白酶，FⅧ缺乏與動脈血栓、靜脈血栓的形成有關，與復發性自然流產關系密切[9]。

本研究Spearsman分析顯示CD31、CD34、FⅧ表達量與免疫性復發性流產都存在相關性(P＜0.05)；多因素條件Logistic回歸顯示CD31、CD34、FⅧ表達量都為導致免疫性復發性流產發生的重要因素(P＜0.05)，表明免疫性復發性流產患者CD31、CD34及FⅧ表達量變化及其與病理學特征存在明顯的相關性。分析可知，CD31、CD34、FⅧ表達量異常可調節趨化因子和細胞因子產生，可促進前列腺素合成，促進宮頸成熟，誘發病理性妊娠，繼而導致流產的發生[10]。在防治免疫性復發流產中，要積極對患者進行治療與超聲診斷，以促進改善患者的總體預后[11-12]。

總之，免疫性復發流產患者多伴隨有CD31、CD34及FⅧ的異常表達，免疫性復發性流產患者CD31、CD34及FⅧ表達量變化及其與病理學特征存在明顯的相關性。由于經費問題與一定的倫理問題，本次研究沒有納入非流產人群進行對比分析，調查與分析的比較少，且分析的內容比較少，人數也比較少，將在后續研究中探討。