VEGF、IL-5、IL-6在鼻息肉中的表達和意義

李元慶，付亞寧，張麗娟，王 瑛，葛 莉

（1.昌邑市人民醫院耳鼻喉科，山東 昌邑 261300；2.昌邑市人民醫院口腔修復科，山東 昌邑 261300；3.昌邑市人民醫院查體中心，山東 昌邑 261300；4.陸軍第八十集團軍醫院神經內科，山東 濰坊 261041；5.濰坊市人民醫院病理科，山東 濰坊 261041）

鼻息肉（nasal polyps）屬于上呼吸道慢性炎癥性病變，是耳鼻喉科常見的疾病，主要表現為鼻竇粘膜廣泛性水腫、急慢性炎癥等。臨床癥狀與息肉的位置、大小有關，較小的息肉可無明顯的癥狀，較大的息肉常伴有鼻塞、頭面部脹痛、流涕、嗅覺減退等。臨床治療以手術切除為主，但術后的復發率較高[1，2]。其發病率較高且術后有較高的復發率是臨床治療的難點[3]。鼻息肉的發病可能有鼻腔慢性炎癥、微環境的改變及多種炎性因子有關[4]。尋求新的用于指導預防和診斷鼻息肉的生物標記物對于鼻息肉的基礎研究和臨床預防、治療有重要的作用。血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）可以與血管內皮細胞上表達的兩種VEGF受體（VEGF受體1和VEGF受體2）相結合。它是參與血管生成的重要因子[5]。對于息肉的形成，必須有新生血管提供充足的血液和氧供[6]。研究報道[7-10]，VEGF在慢性炎癥、息肉、腫瘤的形成過程至關重要。IL-5由活化亞細胞群Th2產生，主要介導體液免疫，是參與維持體內免疫平衡的重要細胞因子[11]。IL-5對B細胞和嗜酸性粒細胞增殖、分化有重要調節作用。趨化人嗜酸性粒細胞，延長成熟嗜酸性粒細胞的存活時間[12]。IL-6可以由淋巴樣和某些非淋巴樣細胞產生，過量的IL-6會刺激相關細胞，產生VEGF[13]。IL-6與多種疾病的發生具有明顯關系，IL-6表達失調可引起許多疾病或導致疾病惡化，如自身免疫病、炎癥、腫瘤等[14-16]。VEGF在鼻息肉、變應性鼻炎中異常表達有過相關報道[17，18]，說明VEGF與鼻息肉的發展有一定關聯。但VEGF聯合IL-5、IL-6檢測在鼻息肉中的報道甚少，為此，本研究擬分析鼻息肉患者息肉組織中VEGF表達情況及血清中IL-5、IL-6表達水平的變化，進一步探討VEGF、IL-5、IL-6在鼻息肉形成過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月-2021年12月在昌邑市人民醫院耳鼻喉科就診并做活檢和/或鼻息肉切除的患者60例，其中鼻息肉者33例作為觀察組；相對正常粘膜人群27例作為對照組。兩組性別、年齡、血壓比較，差異無統計學意義（P＞0.05），有可比性，見表1。納入標準：所有患者經病理活檢確診。排除標準：①進入研究前1個月內使用過全身或者吸入性糖皮質激素治療者；②合并高血壓、糖尿病、家族遺傳性疾病；③合并其他免疫系統疾病；④合并其他良惡性腫瘤。本課題經過昌邑市人民醫院倫理委員會批準通過，所有納入研究者均知情同意并簽署知情同意書。

表1 兩組一般資料比較（n，）

表1 兩組一般資料比較（n，）

1.2 方法

1.2.1 標本采集 組織標本采集：經手術切除的鼻息肉及活檢鼻粘膜標本放入10%的中性福爾馬林固定12 h。取材后經梯度酒精脫水、二甲苯透明行常規HE染色。血液標本采集：分別抽取兩組清晨空腹靜脈血5 ml，放入非抗凝試管，3000 r/min離心10 min后，留血清并標記，放入-80℃冰箱。

1.2.2 免疫組織化學染色及結果判讀 VEGF兔抗人單克隆抗體（工作液濃度1∶200），購買自武漢三鷹生物科技有限公司。3～4 μm切片，免疫組織化學方法采用SP法，滴加DAB顯色液觀察顯色。試劑盒購買自北京中杉金橋生物科技有限公司。對粘膜上皮及血管內皮VEGF的染色進行判讀。染色陽性的細胞面積＜5%、5%～25%、26%～50%、51%～75%、＞75%，分別計分0、1、2、3、4分。著色強度標記為-、+、++、+++，分別計分0、1、2、3分。將染色陽性的細胞面積分數和著色強度分數相乘，＜6分判讀為低表達，≥6分判讀為高表達。

1.2.3 血清IL-5、IL-6的表達檢測及結果判讀 由冰箱內取出存放的血清，放在冰上解凍，4℃離心機離心15 min，2000 r/min，取上清液，按照試劑盒說明書使用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測。試劑盒購買于武漢賽培生物科技有限公司。使用美國全自動酶聯檢測儀讀取OD值，將所得OD值參照試劑標準曲線和標準公式計算數值所對的樣品濃度。

1.3 觀察指標 ①比較兩組鼻粘膜組織中VEGF及血清IL-5、IL-6表達水平；②根據組織VEGF、血清IL-5、IL-6表達水平和常用臨床指標將觀察組分為VEGF低表達組，VEGF高表達組；≤40歲，＞40歲；男性，女性；血清IL-5低表達組（≤55 pg/ml），IL-5高表達組（＞55 pg/ml）；IL-6低表達組（≤50 pg/ml），IL-6高表達組（＞50 pg/ml）；根據病理類型分組，分為水腫型鼻息肉，腺體增生型鼻息肉。分析VEGF、IL-5、IL-6與臨床病理參數（年齡、性別、病理分型等）的關系；③分析VEGF與IL-5、IL-6的關系。

1.4 統計學方法 采用SPSS 18.0分析數據，計數資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗；計量資料以（）表示，行t檢驗；VEGF與IL-5、IL-6的關系使用Pearson相關性分析，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組VEGF、IL-5、IL-6表達水平比較 觀察組鼻息肉組織中上皮細胞和血管內皮細胞VEGF和血清IL-5、IL-6的表達水平高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組VEGF、IL-5、IL-6表達水平比較[n（%），]

表2 兩組VEGF、IL-5、IL-6表達水平比較[n（%），]

2.2 觀察組血清VEGF、IL-5、IL-6表達與病理參數的關系 觀察組血清VEGF、IL-5、IL-6表達水平與年齡、病理組織分型、性別均無關（P＞0.05），見表3。

表3 觀察組血清VEGF、IL-5、IL-6表達與病理參數的關系（n）

2.3 觀察組血清VEGF與IL-5、IL-6表達的關系 觀察組鼻息肉組織中VEGF表達水平與血清IL-5（r=0.351，P=0.022）、IL-6（r=0.380，P=0.015）均呈正相關，見表4。

表4 觀察組血清VEGF與IL-5、IL-6表達的關系（n）

3 討論

鼻息肉是贅生于鼻腔或鼻竇黏膜上的良性病變，患者以鼻塞或鼻分泌物增多為常見表現，伴面部疼痛或腫脹感，嗅覺減退或喪失。鼻息肉為鼻部常見病，好發于成年人。研究發現[1，2]，鼻息肉與變態反應、炎癥因子、嗜酸性粒細胞浸潤等有關。小的鼻息肉可以用藥物治療，大的息肉需要手術治療，但手術切除后易復發，其臨床癥狀和術后易復發性影響鼻息肉患者的生活質量[3]。

VEGF定位于染色體6p21.3，主要促進血管生成[17]。組織的生長必須依靠新生血管生成來提供足夠的氧氣和營養物質來維持。VEGF在腫瘤組織中表達水平增高，提示預后不良。前期研究證實[17，18]，VEGF在鼻息肉組織中出現表達增多的現象。本研究結果也提示VEGF在鼻息肉患者組織中的表達高于對照組，說明VEGF的參與了鼻息肉的形成。

鼻息肉是常見的鼻部慢性炎癥反應性疾病，其病因復雜，一般認為，鼻息肉是鼻粘膜發生炎癥后，結締組織的反應性生長，促進其生長的因素有細胞因子的作用、變態反應和嗜酸性粒細胞的聚集[4]。IL-5對B細胞和嗜酸性粒細胞增殖、分化有重要調節作用，可趨化人嗜酸性粒細胞，延長成熟嗜酸性粒細胞的存活時間[12]。過量的IL-6會刺激相關細胞，產生VEGF，進一步促進血管的形成[13]。前期研究報道IL-5、IL-6在鼻息肉、鼻竇炎等疾病中出現異常的表達[19-22]。本研究進一步探討了鼻息肉組織中VEGF及血清IL-5、IL-6的表達水平，發現在鼻息肉組織中VEGF與患者血清中IL-5、IL-6的表達高于對照組，說明VEGF、IL-5、IL-6的異常表達也參與了鼻息肉的形成。

本研究發現，VEGF、IL-5、IL-6的異常表達在鼻息肉患者中與息肉組織類型、年齡、性別均無關，VEGF的高表達與IL-5、IL-6的表達變化有關，并且VEGF的表達與IL-5、IL-6均呈正相關。說明VEGF與細胞因子免疫平衡紊亂有關，并且與IL-5、IL-6起一定的協同作用。但是VEGF的異常表達影響Th1、Th2介導的免疫平衡，Th1、Th2介導的免疫平衡影響VEGF的表達，這還需要在今后的研究中繼續探索。

綜上所述，鼻息肉組織中VEGF及患者血清IL-5、IL-6的表達升高，VEGF的表達分別與IL-5、IL-6呈正相關。VEGF、IL-5、IL-6參與了鼻息肉的形成和發生發展。