清解扶正顆粒的制備工藝研究

盧麗莎，李 煌，黃 偉，林久茂，林 雄，潘旭東，陳武進

（1.福建中醫藥大學附屬人民醫院，福建 福州 350004；2.福建中醫藥大學藥學院，福建 福州 350122；3.福建中醫藥大學中西醫結合研究院，福建 福州 350122；4.福建省中西醫結合老年性疾病重點實驗室，福建 福州 350122；5.福建中醫藥大學附屬第三人民醫院，福建 福州 350108）

清解扶正方是福建中醫藥大學附屬人民醫院協定方，處方由白花蛇舌草、半枝蓮、炙黃芪、黨參、炙甘草、炒麥芽6 味藥組成，全方標本兼顧，攻補兼施，共奏益氣健脾扶正、清熱解毒消癥之功，治療腸癌療效確切，臨床應用廣泛，但湯劑服用存在煎煮不便、患者依從性差等問題。本研究應用現代制藥技術，優化清解扶正顆粒提取、成型工藝?？紤]到半枝蓮為清解扶正方的君藥，其指標性成分為野黃芩苷。研究表明：野黃芩苷具有良好的抗腫瘤活性［1］，其通過hedgehog 信號通路抑制結腸腫瘤干細胞分化［2］，對結直腸癌、人乳腺癌、神經膠質瘤、人舌鱗癌等都有一定的治療作用。所以把野黃芩苷含量和干浸膏得率綜合評分作為評價指標，篩選清解扶正顆粒的最佳提取工藝［3］。本研究采用正交實驗法，結合高效液相色譜法測定處方中野黃芩苷含量，通過提取時間、提取次數、料液比3 個因素對清解扶正處方的提取工藝進行優化，得出最佳提取工藝，在此基礎上，以成型率、堆密度、休止角、含水量、溶化性、吸濕率等為指標，開展成型工藝研究，以期為清解扶正顆粒劑的深入開發提供參考。

1 儀器與試藥

YH-M6002 電子天平（東陽市英衡智能設備有限公司）；DHG-9240 電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）；HH-4 數顯恒溫水浴鍋（常州國華電器有限公司）；KQ-500DE 超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；安捷倫HPLC1260 高效液相色譜儀（杭州瑞析科技有限公司）；UV 檢測器（美國DIONEX 公司）；AR2140 分析天平［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］。

半枝蓮（產地：安徽省阜陽市，批號：210301）、炙甘草（產地：內蒙古包頭，批號：201201）均購自北京本草方源（亳州）藥業科技有限公司；白花蛇舌草（北京仟草中藥飲片有限公司，產地：江西，批號：201211002）；炙黃芪（福建咸康藥業有限公司，產地：甘肅，批號：3122020012）；黨參（產地：甘肅，批號：2104211）、炒麥芽（產地：安徽，批號：2104233）均產自安徽普仁中藥飲片有限公司；以上中藥飲片購自閩侯縣上街致誠醫藥商店，由福建中醫藥大學附屬人民醫院林雄主任中藥師鑒定符合《中華人民共和國藥典：四部》［4］120-4802020 版規定。磷酸（批號：20201021）、甲醇（批號：20141218）均購自國藥集團化學試劑有限公司；三乙胺（西隴科學股份有限公司，批號：1909121）；野黃芩苷對照品（上海源葉生物科技有限公司，批號：B21478）；糊精（批號：210404）、可溶性淀粉（批號：210504）均購自漢中泰發糊精有限責任公司；乳糖（鎮江市康富生物工程有限公司，批號：20210914）。

2 方法與結果

2.1 提取工藝研究

2.1.1 提取方法 稱取適量處方比例的藥材，加入一定比例的蒸餾水，加熱回流，冷卻至室溫，過濾，收集提取液，定容。

2.1.2 干浸膏得率測定 移液管精密吸取“2.1.1”項下得到的液體于恒重蒸發皿中，水浴鍋蒸干后，移到105 ℃恒溫干燥箱中加熱4 h，迅速取出置于干燥器中冷卻至室溫，反復測定至恒重，精密稱重，計算干浸膏得率。

干浸膏得率＝（干浸膏重量/凈藥材重量）×100%

2.1.3 野黃芩苷含量測定

2.1.3.1 色譜條件 色譜柱：Galaksil?EF-C18M 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：A甲醇-B 0.1%磷酸水（三乙胺調pH 值至6.0）；梯度洗脫（0～15 min，67.5% B；15～16 min，67.5%～20% B；16～26 min，20% B；26～27 min，20%～67.5% B；27～30 min，67.5% B）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：323 nm；進樣量：10 μL；柱溫：40 ℃。理論板數按野黃芩苷峰計算應不低于1 500，且分離度良好［5］。

2.1.3.2 供試品溶液制備 取“2.1.2”項下方法所獲得的干浸膏于錐形瓶中，用適量的純甲醇溶解，超聲提取60 min，搖勻，濾過，取濾液即得［6］。

2.1.3.3 野黃芩苷對照品溶液制備 精密稱取野黃芩苷對照品適量，加入甲醇溶液，配制成0.04、0.12、0.17、0.20、0.30 mg/mL 的野黃芩苷對照品溶液，備用。

2.1.3.4 線性關系考察 精密量取“2.1.3.3”項下各濃度野黃芩苷對照品溶液于錐形瓶中，每個濃度各3 瓶，進行平行對照，按“2.1.3.1”項下的色譜條件進行洗脫，得到對應的峰面積。以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，進行線性回歸，得標準曲線方程。野黃芩苷含量：Y＝16 890X－417.06，r＝0.997 1，結果表明野黃芩苷含量在0.04～0.30 mg/mL 范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.1.3.5 專屬性試驗 取供試品溶液、野黃芩苷對照品溶液和缺半枝蓮陰性對照溶液各10 μL，按“2.1.3.1”中規定的色譜條件進行測定分析，結果見圖1。圖1 可見陰性對照溶液在野黃芩苷色譜峰保留時間處無吸收，表明處方中其他藥味無干擾。

圖1 野黃芩苷HPLC 色譜圖

2.1.3.6 精密度試驗 按照“2.1.3.1”中的色譜條件，將“2.1.3.3”項下野黃芩苷對照品溶液，連續重復進樣6 次。通過對野黃芩苷的色譜峰面積進行測定，計算得RSD 為0.26 %，說明有較好的精密度，滿足含量測定的要求。

2.1.3.7 穩定性試驗 取同一批次清解扶正顆粒樣品，按“2.1.3.2”項下方法制備得到供試品溶液，分別在制備后0、2、4、6、8、10、12、24 h 進樣，測定峰面積，計算野黃芩苷含量的RSD 為1.17 %，結果表明野黃芩苷在制備好的24 h 之后穩定性下降。

2.1.3.8 重復性試驗 取同一批次的清解扶正顆粒樣品6 份，每份3 g，按“2.1.3.2”項下方法制備得到供試品溶液，測定峰面積，計算野黃芩苷含量的RSD 為0.51 %，表明重復性良好。

2.1.3.9 加樣回收試驗 精密稱取清解扶正顆粒3 g共6 份，分別加入含有1.50 mg/mL 野黃芩苷的對照品溶液1 mL，按照“2.1.3.2”項下方法制備供試品溶液，進樣分析，計算得野黃芩苷平均回收率為97.99 %，RSD 為2.17 %。結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

2.1.4 加熱回流提取工藝的單因素考察

2.1.4.1 提取時間考察 稱取適量清解扶正方藥材，分別將提取時間設置為30、60、75、90、120、150 min，用1∶10 的料液比加熱回流提取1 次，結果見表2。

表2 提取時間考察結果（n＝3）

從表2 野黃芩苷含量以及干浸膏得率的綜合評分中可以看出：提取時間為30、60、90 min 的綜合評分較高。因此選擇30、60、90 min 作為正交實驗提取時間考察的3 個水平。

2.1.4.2 料液比考察 為確定提取時的加水量，分別設置1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶15、1∶20 共6 組料液比，提取1 次，提取時間為60 min，結果見表3。

表3 料液比考察結果（n＝3）

從表3 野黃芩苷含量以及干浸膏得率的綜合評分中可以看出：料液比為1∶15、1∶12、1∶10 的綜合評分較高。因此把1∶10、1∶12、1∶15 作為正交實驗料液比考察的3 個水平。

2.1.5 正交試驗 用加熱回流法提取清解扶正方，以提取時間（A）、提取次數（B）、料液比（C）為考察因素，按L9（34）正交表［7］設計實驗，共9 組，平行3 組，對以上主要參數進行工藝優化，表4 為3 因素、3 水平正交表，正交實驗結果見表5，對3 因素、3 水平正交實驗進行方差分析，結果見表6。

表4 正交試驗因素水平表

表5 正交試驗設計和結果

表6 方差分析結果

表5 顯示：在所選定的3 個因素中，提取次數對干浸膏得率影響最大，3 個因素對干浸膏得率的影響程度為B＞A＞C，優選工藝為A3B2C2。表6 顯示：各因素對野黃芩苷含量、干浸膏得率的影響差異無統計學意義（P＞0.05），對生產時間、能耗以及各水平間的差距等因素綜合考慮后，認為此優選工藝可行性較高，所以將提取工藝確定為A3B2C2，即以1∶12 為料液比，加熱回流2 次，每次1.5 h。

2.1.6 正交實驗的驗證 為了進一步確定所選提取條件的科學準確性，按“2.1.5”項下的最佳提取工藝，制備3批清解扶正提取液，批次分別為1批、2批、3 批，測定的野黃芩苷含量RSD 為0.98%，干浸膏得率RSD 為0.41%，說明該提取工藝穩定性良好，可行性高。結果見表7。

表7 正交試驗驗證數據表（n＝3）

2.2 成型工藝研究 稱取適量清解扶正處方藥材，采用第“2.1”項下確定的最佳提取工藝提取藥材。將提取液過濾后，合并2 次濾液，濾液濃縮至對應的相對密度，即得清解扶正稠膏（以下簡稱稠膏）。取適量稠膏，加入輔料，將二者混合到“握之成團，觸之即散”的狀態，在16 目篩上制粒，干燥箱中60 ℃干燥，取出，在干燥器中放冷后，再以10 目篩和80 目篩整粒，即得清解扶正顆粒（以下簡稱顆粒）。

2.2.1 稠膏相對密度的考察 分別精密稱取溫度為55 ℃不同相對密度的稠膏10 g，加入與稠膏用量比例為1∶1.5～2 的不同類型輔料使之成型后，記錄其過篩容易度、成型性和外觀性狀，結果見表8。

表8 稠膏相對密度考察結果

從表8 的結果可知：稠膏相對密度為1.28 g/mL時，顆粒的過篩容易度、成型性和外觀形狀較好，故將稠膏濃縮到相對密度1.28 g/mL 用于制粒。

2.2.2 輔料種類及用量比例考察 目前制備顆粒劑可用的輔料有乳糖、可溶性淀粉、糊精、微晶纖維素、蔗糖、糖粉、硫酸鈣、甘露醇等，由于在預試驗時發現以微晶纖維素為輔料制成的顆粒溶化性差，所以本實驗選用乳糖、可溶性淀粉、糊精3 種輔料，探究其與稠膏的成型關系及最佳用量比例。

取相對密度為1.28 g/mL 的稠膏30 g 與輔料混合，以過篩容易度、顆粒均勻度為評價指標，探究最佳輔料種類及稠膏與輔料的用量比例，以表9 為評分標準，結果見表10。

表9 顆粒評價標準表

表10 輔料種類及用量比例考察結果

通過過篩容易度、顆粒均勻度得分，并遵循輔料最少原則，確定最佳輔料為可溶性淀粉。并以得分最高的稠膏、輔料比分為3 組，分別為1 組（1∶1.42）、2 組（1∶1.52）、3 組（1∶1.54）。

2.2.3 評價指標 分別檢測“2.2.2”項下確定的3 組清解扶正顆粒的成型率、堆密度、休止角、溶化性、吸濕率、含水量，評價3 組清解扶正顆粒的成型工藝。

2.2.3.1 成型率 依照《中華人民共和國藥典：四部》［4］145中的成型率測定法，采用手動雙篩分法，稱取清解扶正顆粒10～15 g，倒入上層為1 號篩、下層為5 號篩的雙篩中，水平左右篩動拍打3 min，取能過1 號篩并不能過5 號篩的顆粒稱重，計算其成型率。

成型率＝（過篩后顆粒質量/過篩前顆粒質量）×100%

2.2.3.2 堆密度 參照《中華人民共和國藥典：四部》［4］151，將一定量過篩后的清解扶正顆粒放入干燥的量筒中，輕輕振動后，讀出其近刻度處的數值作為V（mL），將過篩后的顆粒質量作為M（g），兩者比值即為堆密度。

堆密度/（g/mL）＝M/V。

2.2.3.3 休止角 采用固定漏斗法，將漏斗固定于距濾紙高度為H 處，緩慢將顆粒沿漏斗壁倒入，直到紙上形成的顆粒圓錐體尖端接觸到漏斗口為止，測出圓錐底部的半徑（R），計算圓錐和濾紙間所形成的角度即為休止角α。

tgα＝H/R。

2.2.3.4 溶化性 取清解扶正顆粒5 g，加入100 mL熱水中，攪拌5 min，立即觀察是否完全溶化［8］。

2.2.3.5 吸濕率 將底部盛有氯化鈉過飽和溶液的玻璃干燥器放入25℃恒溫培養箱內恒溫24 h，此時干燥器內的相對濕度為75%。在已恒重的稱量瓶底部放入清解扶正顆粒，準確稱重后置于氯化鈉過飽和溶液的玻璃干燥器內（稱量瓶蓋打開），于25℃恒溫培養箱保存，72 h 后稱量，計算吸濕率［9］。

吸濕率＝（吸濕后顆粒質量－吸濕前顆粒質量）/吸濕前顆粒質量×100%

2.2.3.6 含水量 參照《中華人民共和國藥典：四部》［4］1114水分測定法（烘干法）：取2～5 g 清解扶正顆粒，重量為W1（g），平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，稱量瓶重量為W2（g），厚度不超過5 mm，精密稱定，開啟瓶蓋在100～105 ℃干燥5 h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，放冷30 min，精密稱定，再在上述溫度干燥1 h，放冷，稱重，至連續兩次稱重的差異不超過5 mg 為止，此時稱量瓶+清解扶正顆粒重量為W3（g）。根據減失的重量，計算清解扶正顆粒中含水量。

含水量＝（W1＋W2－W3）/W1×100%

2.2.3.7 成型工藝評價結果 把成型率、休止角、堆密度的綜合評分作為考察指標，各權重系數分別為50%、25%、25%，綜合評分為各項數值乘以權重系數，進行清解扶正顆粒的成型工藝優選。3 組清解扶正顆粒的綜合評分結果見表11。

表11 成型工藝的綜合評分

由表11 可知：3 組的成型率良好；顆粒堆密度小，顆粒間的空隙小，本品流動性好，易于分裝，可避免顆粒裝量差異［10］；3 次測定的結果均符合中藥顆粒劑在《中華人民共和國藥典：四部》［4］1114中水分測定法（通則0832）測定的規定；3 組顆粒都完全溶于熱水，且吸濕率良好。

3 討 論

目前顆粒劑制備可用的輔料有乳糖、可溶性淀粉、糊精、微晶纖維素、蔗糖、糖粉、硫酸鈣、甘露醇等，前期在輔料種類的篩選時，發現該處方浸膏添加微晶纖維素所制成的顆粒劑溶化性極低，所以在輔料選擇中排除微晶纖維素。由于實驗中，發現較黏稠膏與糊精混合會降低顆粒過篩容易度，與乳糖混合會增大患者服藥量，因此選擇可溶性淀粉作為輔料。

本試驗采用正交試驗法，結合高效液相色譜法建立了清解扶正提取液中野黃芩苷的含量測定方法，分別對清解扶正處方的提取時間、料液比和提取次數3 個因素進行考察，以L9（34）正交表設計正交實驗，優化清解扶正提取工藝，得到的最佳提取工藝為料液比1∶12，加熱回流提取2 次，每次1.5 h，分別制備3 批樣品，驗證該工藝的重現性良好。高效液相色譜法快速、簡單、方便、準確，易于操作，一般實驗室條件均可滿足，可用于清解扶正顆粒的質量研究，為以后的相關研究提供基礎［11］。

在最佳提取工藝基礎上，探究清解扶正顆粒成型工藝。因為成型率越高代表工藝越好，所以在綜合測評中成型率的權重應占最大［12］。休止角指粉體堆積層的自由斜面與水平面所形成的最大角，休止角越小，摩擦力越小，粉體流動性越好。粉體的流動性對顆粒劑的重量差異及正常操作影響較大，所以將休止角作為綜合測評的因素之一。堆密度與粉體顆粒間的致密程度有關，其對于顆粒的計量與運輸有一定影響［13］，所以將堆密度作為綜合測評的因素之一。因此把成型率、休止角、堆密度的綜合評分作為考察指標，各權重系數分別為50%、25%、25%，綜合評分為各項數值乘以權重系數，進行清解扶正顆粒的成型工藝優選。

通過對清解扶正顆粒成型工藝的探究，比較幾種輔料分別與不同相對密度稠膏混合的評價指標，結果表明用相對密度為1.28 g/mL 的稠膏與可溶性淀粉成1∶1.42 比例混合，制備出的顆粒粒度適中，外觀均勻，溶化性好，綜合評價指標高，穩定可靠。