參麥注射液對小分子抗血管生成靶向藥增效、減毒的藥效學分析

張瑋 王奇

參麥注射液是目前臨床使用較廣泛的抗腫瘤中藥注射劑之一，常用于原發性肝癌、肺癌、結直腸癌、乳腺癌、惡性淋巴瘤等癌癥的化療聯合用藥［1-2］。據臨床報道，參麥注射液能有效控制惡性腫瘤的發生和發展，對化療有良好的減毒增效作用［3-4］。本研究采用BALB/c雌性小鼠建立CT26皮下移植瘤模型，通過腫瘤體積、瘤重等指標，分析參麥注射液對小分子抗血管生成靶向藥DC-101的增效作用，并進一步通過對脾臟指數、外周血細胞數等指標的檢測，研究參麥注射液對其的減毒作用。

1 資料與方法

1.1 實驗材料 （1）實驗動物與細胞：BALB/c小鼠，6～8周齡，體質量17～22 g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司；CT-26細胞株為小鼠結腸癌細胞，購自中國科學院典型培養物保藏委員會細胞庫。（2）實驗藥物：Anti-VEGFR2（DC-101）：批號：BE0060（725019A2），包裝規格：6.4 mL/管，共2管，由BioXcell公司提供，濃度為8.47 mg/mL，純度＞95%（SDS-PAGE），無色澄清液體，4 ℃密封保存。參麥注射液由正大青春寶藥業有限公司提供，5 mL/支，常溫保存。

1.2 實驗方法 （1）細胞培養：CT26細胞培養在含10% 胎牛血清的RPMI1640培養液中。收集指數生長期的CT26細胞，PBS重懸至適合濃度用于裸鼠皮下腫瘤接種。（2）動物造模：適應性喂養1周后進行動物造模，于小鼠右側背部皮下接種5×105CT26細胞，定期觀察腫瘤生長情況，待腫瘤生長至平均體積85（60～150）mm3時根據腫瘤大小和小鼠體質量隨機分組給藥。分組當天設定為Day 0，給藥開始于Day 0。（3）分組與給藥：在給藥開始前，稱量所有動物的體質量，并用游標卡尺測量腫瘤體積。鑒于腫瘤體積會影響治療的有效性，所以用隨機分組設計的方法，根據鼠的腫瘤體積對其分組，以保證不同組別間的腫瘤體積相似。使用StudyDirectorTM（版本號3.1.399.19，供應商Studylog System，Inc.，S. San Francisco，CA，USA）進行分組。將40只符合腫瘤大小要求的小鼠隨機分為4組，每組各10只。給藥方法：對照組每天腹腔注射25 mL/kg的0.9%氯化鈉溶液；DC-101組腹腔注射DC-101，40 mg/kg，2次/周；參麥注射液組每天腹腔注射參麥注射液25 mL/kg；聯合治療組腹腔注射DC-101，40 mg/kg，2次/周，同時每天腹腔注射參麥注射液25 mL/kg。

1.3 觀察指標 （1）參麥注射液對DC-101的增效作用研究：給藥后第3、7、10、14天用游標卡尺測量小鼠腫瘤的長和寬，計算腫瘤體積。腫瘤體積計算公式：腫瘤體積（mm3）=長（mm）×寬（mm）2×0.52。末次給藥24 h后處死，剝取腫瘤，電子天平稱取瘤重。（2）參麥注射液對DC-101的減毒作用研究：處死小鼠后解剖各組小鼠的脾臟，電子天平稱取其重量，計算各組小鼠脾臟指數。脾臟指數=脾臟重量（mg）/小鼠體質量（g）×10。取小鼠抗凝血，應用血細胞分析儀進行血細胞分析，計算各組小鼠外周血白細胞數量，并分別檢測嗜中性粒細胞（NEUT）、淋巴細胞（LYMPH）、單核細胞（MONO）占白細胞數量的百分比。（3）參麥注射液對小鼠血管生成的抑制作用：采用微血管染色法對腫瘤組織中血管密度進行檢測，并采用免疫組化染色法對腫瘤組織中VEGF表達進行評分。

1.4 統計學方法 采用GraphPad Prism 6軟件和SPSS 20統計軟件。計量資料以（±s）表示，組間差異比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA）及Dunnett's后驗分析，當P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 參麥注射液對DC-101的增效作用研究 小鼠腫瘤體積隨時間呈增長趨勢，見圖1。與對照組比較，DC-101有顯著的抑制腫瘤生長作用，單獨使用參麥注射液對腫瘤的生長有一定的抑制作用；與對照組比較，聯合用藥組可顯著抑制腫瘤生長；與單獨使用DC-101組比較，雖然兩兩之間無顯著差異，但表現出抑制趨勢，表明在該劑量下參麥注射液和化療藥物聯用具有一定的增效作用，見圖2。

圖1 參麥注射液對腫瘤的生長作用研究

圖2 參麥注射液對腫瘤的生長作用研究

2.2 參麥注射液對DC-101的減毒作用研究 比較于對照組，使用DC-101后脾臟指數顯著下降；而比較于DC-101組，聯合治療組的脾臟指數又顯著上升，見圖3。DC-101組的外周白細胞數量顯著低于對照組（P＜0.05）；聯合用藥組的外周白細胞數量又較DC-101組顯著上升（P＜0.05），見表1。

表1 參麥注射液對小鼠白細胞的影響（±s）

表1 參麥注射液對小鼠白細胞的影響（±s）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與DC-101組比較，#P＜0.05

組別白細胞（109個/mL）NEUT（%）LYMPH（%）MOMO（%）DC-101組3.63±1.22*36.25±9.8250.45±8.272.56±0.54參麥組4.89±1.3438.19±9.1856.77±8.212.44±0.41聯合治療組4.21±1.42*#36.78±8.2755.67±8.192.31±0.35對照組4.95±1.3139.28±8.0158.76±9.282.43±0.43

圖3 參麥注射液對小鼠的脾臟指數影響

2.3 參麥注射液對血管生長的抑制作用 DC-101組、參麥組、聯合治療組的微血管密度和VEGF表達評分顯著低于對照組，其中聯合治療組的微血管密度和VEGF表達評分略低于DC-101組，見表2。

表2 參麥注射液對血管生長的抑制作用（±s）

表2 參麥注射液對血管生長的抑制作用（±s）

注：與對照組比較，*P＜0.05

組別微血管密度（條/cm2）VEGF表達評分（分）DC-101組32.41±8.83*4.3±2.8參麥組35.82±8.773.8±2.3*聯合治療組26.22±8.65*3.2±2.7*對照組45.9±13.446.8±3.4

3 討論

參麥注射液組方由金·張元素《醫學啟源》生脈散去五味子化裁而成，其主要成分為紅參、麥冬，臨床上多用于治療氣陰兩虛型之休克、冠心病、腫瘤輔助治療等。近年來動物實驗研究顯示參麥注射液在肺癌、胃癌、大腸癌等癌種上具有輔助抗腫瘤作用，在荷大腸癌Lovo的裸鼠模型上研究顯示，參麥注射液可增強多西他賽的抗腫瘤效果且可以抑制腫瘤血管生成［5］。

本研究首次觀察了參麥注射液對VEGFR抑制劑DC-101的輔助抗腫瘤作用。DC-101是目前臨床上作為抗血管新生治療方案的藥物，臨床研究證實其在結腸癌治療中具有療效，但化療相關副作用限制了其臨床應用［6-7］。本研究發現在結腸癌小鼠模型中，使用DC-101的同時給予參麥注射液輔助治療，結果顯示與單獨使用DC-101組比較，聯合治療組腫瘤體積抑制趨勢更顯著，表明在該劑量下參麥注射液在一定程度上增加了DC-101的療效。在減毒作用的研究中發現，聯用參麥注射液可以緩解DC-101所致的脾臟指數下降和白細胞數下降，有效減輕其毒副反應。本研究還發現參麥注射液聯合DC-101干預后，小鼠腫瘤組織微血管密度和VEGF表達均有所下降，作者推測參麥注射液對DC-101的增效作用可能與下調VEGF表達、抑制腫瘤血管生成有關。

白細胞減少癥是腸道腫瘤化療后常見的副反應，除了化療本身的“攻伐”造成邪盛正衰，還與腸道腫瘤因腸積日久、耗傷精血而造成氣血兩虛、肝郁脾虛等虛證有關。因此，腸道腫瘤姑息治療的同時還需要圍繞益氣扶正、健脾益腎的原則開展治療［8］。而參麥注射液的益氣固脫、養陰生津功能正好對應了腸道腫瘤姑息治療的需要。

綜上所述，本研究發現在CT-26小鼠結腸癌模型中，參麥注射液能增加DC-101對腫瘤生長的抑制作用，有效改善DC-101所導致的白細胞下降，抑制血管生成。未來可以在臨床上開展更多的研究證實其在結腸癌患者治療中的減毒、增效作用。