血清TNF-α 及其基因多態性與精神分裂癥的遺傳易感性關系研究

閉玉娟 覃貝芬 黃鈺珉 譚艷梅（通訊作者）

（南寧市第五人民醫院，廣西 南寧 530021）

精神分裂癥（SCZ）是一種慢性持續性的重性精神疾病，病因復雜，患病率、致殘率、復發率、死亡率均較高[1]。近年來，越來越多的研究表明，精神分裂癥與炎性因子有一定的相關性，如白細胞介素2、白細胞介素4[2]、白細胞介素6[3]、血管內皮生長因子等。本研究探討血清TNF-α 濃度、TNF-α rs1799724 及rs1799964 兩個位點的核苷酸多態性與精神分裂癥的相關性，為精神分裂癥易感人群的篩選提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2021 年3 月至2022 年7 月確診為精神分裂癥患者120 例（男55 例、女65 例），患者年齡20～45 歲，平均（32.58±5.34）歲。另選取我院體檢中心健康體檢者為對照組120 例（男53 例、女67 例），患者年齡20～47 歲，平均（32.69±5.58）歲。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集與保存 各病例組及對照組研究對象均采早空腹靜脈血5 mL，其中2 mL 置于EDTA-K2抗凝管內，顛倒8 次充分混勻，置于-20 ℃冰箱保存用于提取DNA；3 mL 置于干燥管內，待標本凝固后經3500 轉/min 離心5 min，取血清1500 uL 置于1.5 mL 離心管內，置于-20 ℃冰箱保存用于檢測血清TNF-α 濃度，所有標本均避免反復凍融。

1.2.2 實驗方法 TNF-α rs1799724（-857 C/T）及rs1799964（-1031 T/C）位點分型檢測：使用Biospin全血基因組DNA 提取試劑盒提取全血基因組DNA，在超微量紫外分光光度測定樣本DNA 濃度、OD260、OD280 和OD260/OD280 的值，取濃度＞20 ng/uL，OD260/OD280 為1.8～2.0 為合格DNA 樣本。使用qPCR 法檢測TNF-α rs1799724 及rs1799964 基因型及等位基因。實驗設陽性對照及陰性對照保證實驗的可靠性。經測序驗證并用Gene Marker 分析、判斷位點信息。

1.2.3 血清TNF-α 濃度測定 用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）測定，原理如下：通過將純化的人TNF-α 抗體包被在微孔板上制成固相抗體，在各孔依次加入標本或標準品、生物素化的抗TNF-α 抗體及辣根過氧化物酶標記的親和素（HRP-avidin），使之在微孔板內形成固相抗體-TNF-α-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 的催化下變為藍色，并在終止液的作用下變為黃色。黃色的深淺和血清樣本TNF-α 濃度呈正相關，用酶標儀在450 nm 波長下測定吸光度（OD 值），用曲線專家繪出標準曲線，通過標準由線計算各血清樣本TNF-α 濃度。

1.3 統計學處理 采用SPSS 18.0 軟件處理，計量資料用（）表示，用t檢驗；計數資料用（%）表示，用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 研究對象基本情況 對照組年齡（32.69±5.58）歲，精神分裂癥組年齡（32.58±5.34）歲。哈維平衡結果：在rs1799964 位點上精神分裂癥組χ2=1.982；P=0.159；對照組χ2=1.126；P=0.289；在rs1799724 位點上精神分裂癥組χ2=0.197；P=0.657；對照組χ2=2.094；P=0.148。

2.2 兩組TNF-α 濃度比較 兩組TNF-α 濃度對比無差異。精神分裂癥組rs1799724 不同基因型TNF-α濃度存在顯著性差異，見表1。

表1 精神分裂癥組TNF-α 兩個位點不同基因型TNF-α 濃度比較

2.3 rs1799724 基因型及等位基因頻率分布及風險評估 經logistic 回歸分析，rs1799724 基因型OR=0.653；P=0.493，等位基因OR=0.714；P=0.439；rs1799964 基因OR=0.761；P=0.660，等位基因OR=0.736；P=0.483，無顯著差異（P＞0.05），見表2。

表2 rs1799724 基因型與rs1799764 基因型及等位基因在兩組頻率分布及風險評估

3 討論

實驗結果未發現rs1799964 基因型與TNF-α 表達有相關性，發現rs1799724 位點不同基因型TNF-α濃度存在顯著性差異，攜帶突變基因的基因型即CT、TT 基因型對應的TNF-α 高于CC 基因型對應的TNF-α 濃度[4]。蛋白表達濃度是復雜的，除了受相關基因多態性影響外，還受體內多種因子影響，同時也受蛋白合成原料及合成環境影響，并且rs1799964、rs1799724 兩個位點同為啟動子區域內的位點，在TNF-α 蛋白的表達里起多少作用是不能與TNF-α基因啟動子完全分割的。

有研究表明，在總體患者或單獨女性患者，位點rs1799964 位點基因多態性與精神分裂癥的發病呈現一定的相關性。作為被認為與TNF-α 表達相關的位點，rs1799964、rs1799724 與精神分裂癥的關系不僅受到國內科研人員的注意，國外對兩者的關系也有報道，Suchanek-Raif[5]也報道了TNF-α rs1799964、rs1799724在男性中顯示出的突變基因型與精神分裂癥有相關性。本研究中，既沒有發現rs1799964 與TNF-α 蛋白表達的關系，也沒發現與精神分裂癥發病相關，造成這種各研究之間不同結論的原因可能與各自的實驗設計有關。

綜上所述，血清TNF-α 表達與rs1799724 位點基因型有關與rs1799964 位點基因型無關，兩個位點不是精神分裂癥的易感基因。