血清因子表達與乙肝纖維化及病理變化程度的關系

安仲武 薄維波 李 欣 常煥顯

（南京醫科大學康達學院附屬連云港東方醫院，江蘇 連云港 222042）

乙肝是一種感染性疾病，乙型肝炎病毒陽性，在世界范圍內均較常見，極易向肝硬化或肝細胞癌發展，嚴重威脅患者生命健康[1]。在肝硬化進展中，肝纖維化是必經階段，具有可逆性，積極治療能延緩疾病向肝硬化進展[2]。本研究探討了血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達與乙肝纖維化及病理變化程度的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020 年2 月至2023 年2 月我院乙肝患者100 例，年齡25～52 歲，平均（34.25±5.16）歲，女40 例，男60 例。炎癥活動度：G0～G1 10 例，G2 30 例，G3 45 例，G4 15 例；肝纖維化病理分期：SO 10 例，S1 20 例，S2 25 例，S3 30 例，S4 15 例。

1.2 方法

1.2.1 血清25（OH）D3 表達測定 采集患者清晨空腹靜脈血6 mL，離心將上層血清分離出來，在-70℃冰箱中保存樣本，采用全自動生化分析儀（AU680，貝克曼）測定血清25（OH）D3 水平。

1.2.2 血清miR-25-3p 表達測定 依據RNA 提取試劑盒說明書將患者血清總RNA 提取出來，對RNA 濃度與純度進行檢測，合格后逆轉錄500 μg 總RNA，將cDNA 合成。熒光定量PCR 反應，miR-25-3p 與U6引物序列：正向分別為5’-CGTGCATAGACACAGGGAGTT-3’、5’-CTGGCATCCGCTGGAGA-3’，反向分別為5’-GGAGGTTACATTCAGCGAT-3’、5’-TTCGGTTGTCGATATTCGGT-3’。反應總體系10 μl，cDNA 模板、正向引物、反向引物、Master Mix、雙蒸水分別1 μl、1 μl、1 μl、5 μl、2 μl。反應程度：在95℃、95℃、60℃、70℃溫度下分別與預變性、變性、退火、延伸各2 min、20 s、30 s、30 s，共40 個循環。用2-△△Ct 值表示miR-25-3p 表達[3]。

1.2.3 血清CHI3L1 表達測定 采用酶聯免疫吸附試劑盒，運用酶聯免疫吸附法測定血清CHI3L1 表達。

1.2.4 肝纖維化指標測定 采集患者清晨空腹血6 mL，離心將上層血清分離出來，在-70℃冰箱中保存樣本，采用化學發光儀（Mindray CL-6000i）測定Ⅲ型前膠原（PCⅢ）、Ⅳ型膠原（CIV）、層黏連蛋白（LN）、透明質酸（HA）等肝纖維化指標水平

1.3 觀察指標（1）不同炎癥活動度患者的血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達；（2）不同肝纖維化分期患者的血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達；（3）不同肝纖維化分期患者的肝纖維化指標；（4）血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達與肝纖維化及病理變化程度的關系。

1.4 肝纖維化病理分期評定 依據中華醫學會肝病學分會與傳染病和寄生蟲病學分會制定的標準及肝臟穿刺病理活檢結果，無纖維化評定為S0，纖維增生伴匯管區擴大評定為S1，小葉結構保留且匯管區周圍纖維化評定為S2，小葉結構紊亂且纖維間隔但無肝硬化評定為S3，確定肝硬化或重度纖維化評定為S4[4]。

1.5 統計學分析 采用SPSS28.0 軟件分析，計數資料用（%）表示，用χ2檢驗；計量資料用（）表示，用t檢驗，P＜0.05 具有統計學意義。

2 結果

2.1 不同炎癥活動度、肝纖維化分期患者的血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達比較 炎癥活動度G0～G1、G2、G3、G4 患者血清25（OH）D3 表達逐漸降低（P＜0.05），血清miR-25-3p、CHI3L1 表達均逐漸升高（P＜0.05）；肝纖維化分期S0、S1、S2、S3、S4 患者血清25（OH）D3 表達逐漸降低（P＜0.05），血清miR-25-3p、CHI3L1 表達逐漸升高（P＜0.05），見表1。

表1 不同炎癥活動度、肝纖維化分期患者血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達比較 （）

表1 不同炎癥活動度、肝纖維化分期患者血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達比較 （）

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2.2 不同肝纖維化分期患者的肝纖維化指標比較 肝纖維化分期S0、S1、S2、S3、S4 患者血清PCⅢ表達分別為（96.55±13.31）μg/L、（130.58±22.21）μg/L、（187.88±26.97）μg/L、（216.73±33.68）μg/L、（315.56±54.88）μg/L，血清CIV 表達分別為（103.78±18.55）μg/L、（139.67±5.53）μg/L、（220.22±34.76）μg/L、（331.28±41.41）μg/L、（417.30±59.30）μg/L，血清LN 表達分別為（93.11±11.50）μg/L、（121.52±19.55）μg/L、（139.68±30.70）μg/L、（232.22±40.31）μg/L、（300.28±50.38）μg/L，血清HA 表達分別為（83.55±17.58）μg/L、（120.88±20.55）μg/L、（251.36±40.08）μg/L、（342.75±51.75μg/L、（533.56±63.88）μg/L。肝纖維化分期S0、S1、S2、S3、S4 患者的血清PCⅢ、CIV、LN、HA 表達均逐漸升高（P＜0.05）。

2.3 血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達與肝纖維化及病理變化程度的關系分析 血清25（OH）D3表達與炎癥活動度、肝纖維化分期均呈負相關關系（P＜0.05），血清miR-25-3p、CHI3L1 表達與炎癥活動度、肝纖維化分期均呈正相關關系（P＜0.05），見表2。

表2 血清25（OH）D3、miR-25-3p、CHI3L1 表達與肝纖維化及病理變化程度的關系分析

3 討論

有研究表明[5-6]，乙肝患者炎癥活動度、肝纖維化程度與血清25（OH）D3 表達呈負相關，血清25（OH）D3 表達降低說明患者體內具有劇烈的炎癥活動、嚴重的肝纖維化程度。研究結果表明，炎癥活動度G0～G1、G2、G3、G4 患者的血清25（OH）D3 表達逐漸降低，血清miR-25-3p、CHI3L1 表達均逐漸升高；肝纖維化分期S0、S1、S2、S3、S4 患者血清25（OH）D3 表達逐漸降低，血清miR-25-3p、CHI3L1 表達逐漸升高。肝纖維化分期S0、S1、S2、S3、S4 患者血清PCⅢ、CIV、LN、HA 表達均逐漸升高。血清25（OH）D3 表達與炎癥活動度、肝纖維化分期均呈負相關關系，血清miR-25-3p、CHI3L1 表達與炎癥活動度、肝纖維化分期均呈正相關關系，和上述研究結果一致。

綜上，血清25（OH）D3 與乙肝炎癥活動度、肝纖維化分期均呈負相關關系，血清miR-25-3p、CHI3L1 表達與乙肝炎癥活動度、肝纖維化分期均呈正相關關系。