結直腸癌轉錄因子激活蛋白2α和2β表達與腹腔鏡下根治術后復發(fā)的臨床關系

李忠發(fā)，陳元龍，李揚

（資陽市人民醫(yī)院 普外科，四川 資陽 641301）

在全世界范圍內，結直腸癌發(fā)病率位居第3 位，病死率位居第2 位[1]。雖然，結直腸癌手術適應證在不斷擴大，手術患者越來越多，但是，術后復發(fā)已成為結直腸癌的死亡原因之一[2]。有研究[3]顯示，結直腸癌腹腔鏡下根治術后12 個月復發(fā)轉移率高達25.00%。因此，探討影響結直腸癌根治術后復發(fā)的危險因素，以指導臨床采取措施干預，對降低術后復發(fā)率和改善患者預后，具有重大意義。轉錄因子激活蛋白2（transcription factor activator protein 2，TFAP-2）是一類從海拉細胞中分離發(fā)現(xiàn)的轉錄因子，擁有能與細胞特異性結合的DNA，能夠調控細胞增殖、分化和凋亡等[4]。轉錄因子激活蛋白2α（transcription factor activator protein 2α，TFAP-2α）和轉錄因子激活蛋白2β（transcription factor activator protein 2β，TFAP-2β）是TFAP-2 家族中的重要成員。既往有研究[5-6]報道，兩者在乳腺癌和胰腺癌等多種惡性腫瘤中異常表達，并且可能是抑癌或促癌因子。然而，TFAP-2α 和TFAP-2β 在結直腸癌中的表達卻少有報道。鑒于此，本研究選取行腹腔鏡根治術的結直腸癌患者147 例，檢測TFAP-2α 和TFAP-2β 在癌組織中的表達情況，并分析兩者與術后復發(fā)的關系，旨在為臨床干預提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取資陽市人民醫(yī)院2018年2月－2020年1月收治的行腹腔鏡根治術的結直腸癌患者147 例。其中，男84 例，女63 例；年齡26～83 歲，平均（57.14±8.06）歲；結腸癌57 例，直腸癌90 例。所有患者行腹腔鏡下根治術，切除相應結腸或直腸腸段，清掃區(qū)域淋巴結，并根據(jù)患者術后病理分期、生物學指標和術后恢復情況，進行輔助化療。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準通過，批件號：2018-00110號。

納入標準：術前病理TNM 分期為Ⅰ～Ⅲ期；行腹腔鏡下根治手術；術后病理證實為結直腸癌；簽訂知情同意書。排除標準：結直腸癌復發(fā)者；多個原發(fā)癌者；合并其他腫瘤者；合并嚴重的肝腎功能不全或心腦血管疾病者；合并免疫性和血液性疾病者；術前有腫瘤治療史。剔除標準：非結腸癌死亡者；失訪者。

1.2 方法

1.2.1 TFAP-2α 和TFAP-2β 蛋白表達檢測 收集患者手術切除的癌組織和切緣正常組織，用磷酸鹽緩沖液漂洗后，再用甲醛（40 g/L）固定，用石蠟包埋制成切片；脫蠟后，梯度乙醇水化；置于檸檬酸鹽緩沖液（0.01 mmol/L）中，行高溫抗原修復后，用過氧化氫（3%）來阻斷過氧化氫酶活性；用磷酸鹽緩沖液清洗后，滴加山羊血清進行封閉，依次滴加一抗和二抗，經顯色復染后，沖洗、脫水、透明，封片鏡檢。

1.2.2 鏡檢結果判定 胞核無色為0分，胞核呈淡黃色為1 分，胞核呈棕黃色為2 分，胞核呈棕褐色為3 分；以隨機5 個細胞胞核棕黃或棕褐染色為陽性細胞，陽性細胞率 ＜ 5%、≥5%且≤25%、＞ 25%且≤50%、＞ 50%且≤75%和 ＞ 75%，分別記0、1、2、3和4 分，最后2 項評分乘積≤3 分為陰性表達，＞ 3 分則為陽性表達。

1.2.3 術后隨訪 以術后病理確診為隨訪起點，患者定期來院復診，統(tǒng)計患者術后3年的復發(fā)情況。

1.3 觀察指標

1.3.1 癌組織和切緣正常組織 比較兩者TFAP-2α和TFAP-2β的陽性表達率。

1.3.2 復發(fā)情況 統(tǒng)計結直腸癌患者腹腔鏡下根治術后3 年復發(fā)率，比較復發(fā)和未復發(fā)患者癌組織TFAP-2α和TFAP-2β的陽性表達率。

1.3.3 結直腸癌患者腹腔鏡下根治術后復發(fā)的影響因素 記錄影響因素、回歸系數(shù)（B）、標準誤（standard error，SE）、相對危險度（relative risk，和95%置信區(qū)間（95% confidence interval，95%CI）。

1.4 統(tǒng)計學方法

選用SPSS 25.0 軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以例（%）表示，比較采用χ2檢驗；采用Cox 回歸分析影響結直腸癌腹腔鏡下根治術后復發(fā)的危險因素。P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 癌組織和切緣正常組織TFAP-2α 和TFAP-2β陽性表達率比較

與切緣正常組織相比，癌組織TFAP-2α 和TFAP-2β 陽性表達率較低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜ 0.05）。見表1。

表1 癌組織和切緣正常組織TFAP-2α和TFAP-2β陽性表達率比較 例（%）Table 1 Comparison of positive expression rates of TFAP-2α and TFAP-2β between cancer tissue and normal tissue at the cutting edge n（%）

2.2 復發(fā)組與未復發(fā)組癌組織TFAP-2α和TFAP-2β陽性表達率比較

術后3 年內有34 例復發(fā)，復發(fā)率為23.13%（34/147）。與未復發(fā)組相比，復發(fā)組癌組織TFAP-2α和TFAP-2β 陽性表達率較低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜ 0.05）。見表2。

表2 復發(fā)組與未復發(fā)組癌組織TFAP-2α和TFAP-2β陽性表達率比較 例（%）Table 2 Comparison of positive expression rates of TFAP-2α and TFAP-2β between the recurrence group and nonrecurrence group n（%）

2.3 結直腸癌患者腹腔鏡下根治術后復發(fā)的影響因素

2.3.1 單因素分析 與未復發(fā)患者相比，復發(fā)患者T3至T4期、N1至N2期和血管侵犯占比較高，癌組織TFAP-2α 和TFAP-2β 陽性率較低，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜ 0.05）。見表3。

表3 結直腸癌患者腹腔鏡下根治術后復發(fā)的單因素分析 例（%）Table 3 Univariate analysis of recurrence after laparoscopic radical surgery in colorectal cancer patients n（%）

2.3.2 Cox 回歸分析 T3至T4期、N1至N2期、血管侵犯占比較高，以及癌組織TFAP-2α 和TFAP-2β 陽性表達率降低，是結直腸癌患者腹腔鏡下根治術后復發(fā)的獨立危險因素（P＜ 0.05）。見表4。

表4 結直腸癌患者腹腔鏡下根治術后復發(fā)的Cox回歸分析Table 4 Cox regression analysis of recurrence after laparoscopic radical surgery in colorectal cancer patients

3 討論

3.1 結直腸癌術后復發(fā)情況

近年來，結直腸癌的發(fā)病率不斷升高[7]，即使經手術治療后，仍有部分患者術后發(fā)生復發(fā)、轉移，導致預后不佳，甚至造成死亡[8]。本研究通過隨訪發(fā)現(xiàn)，結直腸癌腹腔鏡下根治術后3 年復發(fā)率為23.13%，提示：結直腸癌患者術后復發(fā)率較高，臨床需探討影響結直腸癌術后復發(fā)的因素，指導預后評估和采取早期措施，以降低術后復發(fā)率。

3.2 TFAP-2α和TFAP-2β在結直腸癌組織中的表達

本研究結果顯示，相較于切緣正常組織，結直腸癌組織的TFAP-2α 和TFAP-2β 陽性表達率降低，提示：TFAP-2α 和TFAP-2β 陽性表達可能與結直腸癌的發(fā)生存在一定的關系。TFAP-2α 和TFAP-2β 是核轉錄特異性調控因子。李波等[9]研究報道，TFAP-2α在宮頸癌組織中較正常宮頸組織陽性表達率明顯降低，可能發(fā)揮抑癌作用。YANG 等[10]報道，TFAP-2β

在肝細胞癌組織及細胞中表達降低，對肝細胞癌的生長有抑制作用。本研究結果與上述報道一致，均表明了TFAP-2α 和TFAP-2β 在腫瘤的發(fā)病中具有抑癌作用。但也有研究[11-12]發(fā)現(xiàn)，TFAP-2α在肺腺癌中表達上調，可通過介導促轉移信號通路，來促進肺腺癌的發(fā)生發(fā)展，TFAP-2β 在乳腺癌中呈高表達，并且其水平升高，可促進乳腺癌腫瘤生長，兩者均具有促癌作用，這與本研究結果不同。考慮原因為：TFAP-2α和TFAP-2β 在不同類型腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中，作用機制不同，導致發(fā)揮促癌或抑癌的作用不同。

3.3 結直腸癌患者腹腔鏡下根治術后復發(fā)的獨立危險因素

3.3.1 TFAP-2α 和TFAP-2β 表達降低 本研究比較了結直腸癌腹腔鏡下根治術后，復發(fā)患者和未復發(fā)患者癌組織TFAP-2α 和TFAP-2β 的表達，發(fā)現(xiàn)兩者在復發(fā)患者中陽性表達率降低。且經Cox回歸分析顯示，兩者表達降低，均是結直腸癌腹腔鏡根治術后復發(fā)的獨立危險因素。TFAP-2α 能通過調節(jié)細胞外信號，調節(jié)激酶、上皮細胞-間充質細胞轉換和p35等，來影響腫瘤細胞的增殖和侵襲。KO?AT 等[13]研究報道，TFAP-2α過度表達，可通過p35依賴性和獨立路徑通路、β 連環(huán)蛋白信號通路、細胞色素C9 依賴線粒體通路等，預防癌細胞侵襲，抑制癌細胞生長和增殖。BECK 等[14]研究報道，TFAP-2α 能夠通過磷脂酰肌醇3 激酶級聯(lián)調節(jié)細胞周期，通過TGM2 來激活AKT，TFAP-2α 表達缺失時，AKT 磷酸化水平下降，并且誘導結直腸癌對高度選擇性磷脂酰肌醇3激酶抑制劑產生耐藥性。因此，在結直腸癌中，TFAP-2α 表達下調，會削弱對腫瘤細胞生長的阻滯和凋亡作用，促進腫瘤的侵襲和遷移能力，且可能影響術后輔助化療效果，增加術后復發(fā)的風險。有研究[15]發(fā)現(xiàn)，TFAP-2β的DNA結合域與β-連環(huán)蛋白1～9犰狳重復序列相互作用，并可通過與β-TrCP 結合，促進β-連環(huán)蛋白的降解，抑制腫瘤細胞增殖和上皮間充質轉化，還能抑制WNT 下游基因β-連環(huán)蛋白、MMP-7 和Cyclin D1 等的表達，以抑制腫瘤細胞的惡性增殖。因此，在結直腸癌中，TFAP-2β 陽性表達率降低，不但會促進上皮間充質轉化，加強腫瘤的侵襲轉移能力，還會促進腫瘤細胞增殖，侵襲周圍正常組織，增加手術切除難度和術后復發(fā)率。

3.3.2 病理分期與血管侵犯 本研究還發(fā)現(xiàn)，病理分期T3至T4期、N1至N2期和血管侵犯，也是結直腸癌患者腹腔鏡下根治術后復發(fā)的獨立危險因素。T分期越高，代表腫瘤浸潤越深，淋巴管分布在黏膜下層，當腫瘤浸潤到黏膜下層時，極易通過淋巴管發(fā)生轉移，并且隨著浸潤加深，更易侵襲周圍組織、淋巴管和血管，增加術后復發(fā)轉移風險。ITABASHI 等[16]報道，淋巴結陽性是結直腸癌術后復發(fā)的重要因素；程晨等[17]也報道，N1或N2分期和血管侵犯與術后復發(fā)風險增高有關，是術后復發(fā)的危險因素。因此，建議臨床在治療結直腸癌患者時，術后應早期針對以上危險因素進行評估，以減少復發(fā)。

綜上所述，TFAP-2α 和TFAP-2β 陽性表達率在結直腸癌組織中較正常組織低，且兩者陽性表達率降低，以及病理分期T3至T4期、N1至N2期和血管侵犯占比較高，是結直腸癌患者腹腔鏡下根治術后復發(fā)的獨立危險因素。