復方氨酚烷胺片（膠囊）中主成分含量均勻度測定*

梁 靜，李 超，黃 俊，羅立駿，徐 登，馮 琴，程輝躍

（重慶市食品藥品檢驗檢測研究院·國家藥品監督管理局麻醉精神藥品質量監測重點實驗室，重慶 401121）

復方氨酚烷胺片（膠囊）屬解熱鎮痛類非處方［1-6］，規格均為每片（粒）含對乙酰氨基酚250 mg、金剛烷胺100 mg、咖啡因15 mg、馬來酸氯苯那敏2 mg、人工牛黃10 mg。復方氨酚烷胺片（膠囊）歷史久遠，企業留存的研發及申報資料都較少，且不完整，制劑研發、標準建立的相關資料已無從溯源。復方氨酚烷胺片的現行質量標準為《國家藥品標準·化學藥品地方標準上升國家標準（第十六冊）》（WS1- XG - 015 - 2002）［7］，復方氨酚烷胺膠囊的現行質量標準為《衛生部藥品標準·化學藥品（第五冊》（WS-HY<05> -01）［8］，但自注冊以來從未進行過改進和變更，多個關鍵質控項目缺失，已無法對該藥品的質量進行有效控制。根據2020年版《中國藥典（四部）》通則0941［9］規定，“每一個單劑標示量小于25 mg 或主藥量小于每一個單劑重量25%者”，應檢查含量均勻度。復方氨酚烷胺片（膠囊）的咖啡因和馬來酸氯苯那敏的標示含量分別為15 mg和2 mg，故需建立含量均勻度的測定方法。本研究中采用高效液相色譜（HPLC）法對咖啡因和馬來酸氯苯那敏進行含量均勻度檢查，以更好地控制和評價各企業產品的混合均勻度及主成分含量均勻度。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260 型高效液相色譜儀（美國Agilent 公司），配有紫外檢測器；Waters 2695 型高效液相色譜儀（美國Waters 公司），配有光電二極管列陣檢測器（PDA）；XSE204 型電子天平（精度為0.1 mg），Quintix 224 - 1CN 型電子天平（精度為0.01 mg），均購自瑞士Mettler Toledo 公司；SB25 - 12DT 型新芝超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司，功率為600 W，頻率為50 kHz）。

1.2 試藥

復方氨酚烷胺片源于44 家生產企業，共106 批樣品，其中1 批（批號為X201002）用于方法學考察；復方氨酚烷胺膠囊源于52 家生產企業，共135 批樣品，其中1批（批號為20210622）用于方法學考察；對乙酰氨基酚對照品（批號為100018 - 202312，含量為100%），咖啡因對照品（批號為171215-202013，含量為99.7%），馬來酸氯苯那敏對照品（批號為100047-202008，含量為99.7%），均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純，水為二次純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件［10-14］與系統適用性試驗

色譜柱：YMC - C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相：0.1 mol / L 磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫銨11.5 g，加1 000 mL 水使溶解，用磷酸調pH 至3.0 ±0.05）- 甲醇（60∶40，V/V）；流速：1.0 mL/ min；檢測波長：275 nm（對乙酰氨基酚），225 nm（咖啡因、馬來酸氯苯那敏）；柱溫：35 ℃；進樣量：5 μL（對乙酰氨基酚），20 μL（咖啡因、馬來酸氯苯那敏）。在此色譜條件下，各組分色譜峰的分離度均符合要求，理論板數按氯苯那敏峰計不低于5 000，對照品溶液各主峰峰面積的RSD均不超過1%。色譜圖見圖1。

1.馬來酸 2.對乙酰氨基酚 3.咖啡因 4.氯苯那敏圖1 高效液相色譜圖1.Maleic acid 2.Acetaminophen 3.Caffeine 4.ChlorphenamineFig.1 HPLC chromatogram

2.2 溶液制備

供試品溶液：取樣品1 片（粒），置200 mL 容量瓶中，加甲醇- 水溶液（40∶60，V/V）適量，超聲（功率為600 W，頻率為50 kHz）使溶解，再用甲醇-水溶液（40∶60，V/V）稀釋并定容，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

對照品溶液：取對乙酰氨基酚對照品適量，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加甲醇-水溶液（40∶60，V/V）溶解并稀釋成每1 mL 約含對乙酰氨基酚0.125 mg 的對乙酰氨基酚對照品溶液；取馬來酸氯苯那敏對照品適量，精密稱定，置50 mL 容量瓶中，加甲醇- 水溶液（40∶60，V/V）適量，超聲使溶解并定容，搖勻，作為馬來酸氯苯那敏對照品貯備液；取咖啡因對照品適量，精密稱定，置250 mL容量瓶中，加甲醇-水溶液（40∶60，V/V）適量，超聲使溶解，再精密加入馬來酸氯苯那敏對照品貯備液10 mL，用甲醇-水溶液（40∶60，V/V）稀釋成每1 mL 約含咖啡因75 μg、馬來酸氯苯那敏10 μg 的咖啡因和馬來酸氯苯那敏對照品溶液；取對乙酰氨基酚、咖啡因與馬來酸氯苯那敏對照品各適量，精密稱定，置100 mL 容量瓶中，加甲醇- 水溶液（40∶60，V/V）溶解并稀釋成每1 mL 約含對乙酰氨基酚1.25 mg、咖啡因75 μg、馬來酸氯苯那敏10 μg的混合對照品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察：分別吸取對乙酰氨基酚、咖啡因和馬來酸氯苯那敏對照品溶液5，10，15，20，25，30 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以進樣量（X，μg）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸。結果見表1。

表1 方法學考察結果Tab.1 Results of the methodological investigation

重復性試驗：取同一批（片劑企業A，批號為X201002；膠囊劑企業M，批號為20210622）樣品6 份，精密稱定，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算含量。結果見表1，表明方法重復性良好。

穩定性試驗：取同一批（片劑企業A，批號為X201002；膠囊劑企業M，批號為20210622）樣品適量，按2.2項下方法制備供試品溶液，分別于常溫下放置0，2，4，8，16，24 h 時按2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果見表1，表明供試品溶液在常溫下24 h 內穩定性良好。

加樣回收試驗：取樣品（片劑企業A，批號為X201002；膠囊劑企業M，批號為20210622）適量，平行9 份，分別精密加入咖啡因和馬來酸氯苯那敏對照品溶液8，10，12 mL，各3 份，按2.2 項下方法制備供試品溶液，按2.1 項下色譜條件進樣測定，并計算回收率。結果見表1。

2.4 樣品含量均勻度測定

片劑：根據2020 年版《中國藥典（四部）》通則0941［9］規定，若A+2.2S≤15.0，則供試品的含量均勻度符合規定；若A+S>15.0，則供試品的含量均勻度不符合規定；若A+ 2.2S> 15.0 且A+S≤15.0，則另取20 片（粒）復試。隨機抽取每個生產企業的1～6 批樣品進行含量均勻度考察，共106 批，含量均勻度測定色譜圖見圖2。其中，需復試的樣品8 批，包括咖啡因含量均勻度需復試1批，馬來酸氯苯那敏含量均勻度需復試6批，2 個主成分均需復試1 批，涉及7 家生產企業；不合格樣品8 批（即A+S> 15.0），其中咖啡因和馬來酸氯苯那敏含量均勻度不合格各4 批，涉及4 家生產企業。需復試的樣品批數不計入合格率計算，故片劑含量均勻度的合格率為91.84%（90/98）。詳見表2。

表2 復方氨酚烷胺片（膠囊）需復試批數和不合格批數Tab.2 Number of batches of Compound Paracetamol and Amantadine Hydrochloride Tablets（Capsules）need to be retested and unqualified

1.馬來酸（225 nm） 2.對乙酰氨基酚（275 nm） 3.咖啡因（225 nm） 4.氯苯那敏（225 nm）A - B.供試品溶液 C - D.對照品溶液圖2 含量均勻度測定高效液相色譜圖1.Maleic acid（225 nm） 2.Acetaminophen（275 nm） 3.Caffeine（225 nm） 4.Chlorphenamine（225 nm）A - B.Test solution C - D.Reference solutionFig.2 HPLC chromatograms of the content uniformity

膠囊劑：隨機抽取每個生產企業的1～6 批樣品進行含量均勻度考察，共考察135 批，含量均勻度測定色譜圖見圖2。需復試的樣品18 批，其中咖啡因含量均勻度需復試16批，馬來酸氯苯那敏含量均勻度需復試1批，2 個主成分均需復試1 批，涉及13 家生產企業；不合格樣品6 批（即A+S> 15.0），其中咖啡因和馬來酸氯苯那敏含量均勻度不合格各3 批，涉及6 家生產企業。需復試的樣品批數不計入合格率計算，故膠囊劑含量均勻度的合格率為94.87%（111/117）。

2.5 重量/裝量差異與含量均勻度的關系

根據2.4 項下測定結果，對S值較大的片劑生產企業C、膠囊劑生產企業E 和膠囊劑生產企業K 產品的重量/裝量差異與含量均勻度的關系進行考察，詳見圖3。片劑生產企業C、膠囊生產企業E的產品每片（粒）中3種主成分含量與片（粒）重曲線高度一致，表明主成分在制粒時混合均勻，但由于片劑生產企業C的產品重量的RSD為3.31%，膠囊生產企業E 的產品裝量的RSD為2.25%，導致含量均勻度不合格；膠囊生產企業K 的產品裝量的RSD為1.35%，但僅有對乙酰氨基酚的含量與裝量差異呈正相關。

A1，B1，C1.對乙酰氨基酚 A2，B2，C2.咖啡因 A3，B3，C3.馬來酸氯苯那敏圖3 重量/裝量差異與含量均勻度的關系A1，B1，C1.Acetaminophen A2，B2，C2.Caffeine A3，B3，C3.Chlorphenamine MaleateFig.3 Relationship between weight difference and content uniformity

3 討論

3.1 含量測定方法建立

采用高效液相色譜-紫外檢測法對對乙酰氨基酚、咖啡因和馬來酸氯苯那敏3個主成分進行分離和含量測定，其難點在于對乙酰氨基酚每片（粒）含量250 mg，而馬來酸氯苯那敏每片（粒）含量僅2 mg，上述2個主成分含量差異達125倍。因此，考慮在同一液相色譜系統中，采用不同的進樣量，以保證2種主成分定量的準確性。根據PDA 圖譜掃描結果，咖啡因的最大吸收波長為275 nm，馬來酸氯苯那敏的最大吸收波長為228 nm，由于馬來酸氯苯那敏的含量低，氯苯那敏的峰面積較小。因此，確定咖啡因和馬來酸氯苯那敏的檢測波長為225 nm。

此外，在現行法定標準中，流動相采用等度洗脫方式，導致氯苯那敏的保留時間較長，往往超過50 min 才出峰，且氯苯那敏的含量極低，導致氯苯那敏峰形不夠尖銳，理論板數較差，影響定量的準確性。采用加大有機相的比例，氯苯那敏峰的出峰時間穩定在16 min 左右，提高了氯苯那敏峰的理論板數和定量的準確性。故選擇2.1項下流動相等度洗脫程序。

3.2 含量均勻度測定結果評價

復方氨酚烷胺片：片劑含量均勻度合格率為91.84%，106 批中有8 批產品需復試，有8 批產品不合格。咖啡因含量均勻度不合格的有4 批，來自片劑生產企業A 的3 批和片劑生產企業E 的1 批，其咖啡因的S值不大，但A值太大，導致A+S>15.0。片劑生產企業C 產品的含量均勻度較差，馬來酸氯苯那敏含量均勻度不合格。分析原因，生產企業C 產品的A值和S值均較大，且A值與含量測定結果差異較大。片劑生產企業G產品中馬來酸氯苯那敏的含量均勻度極差，6 批產品中馬來酸氯苯那敏含量均勻度有3 批不符合規定；1 批S值為5.80%，其余5 批S值最大為1.66%。表明該生產企業混合制粒的工藝沒有問題，結合其產品的含量測定結果，認為生產企業G 對馬來酸氯苯那敏的投料量未嚴格按處方和標準作業程序進行投料，導致批間差異較大。

復方氨酚烷胺膠囊：膠囊劑含量均勻度合格率為94.87%，135 批中有18 批產品需復試，有6 批產品不合格。咖啡因含量均勻度不合格的有3批，來自膠囊生產企業D，B，F，企業D 和B 是由于咖啡因含量均勻度A值過大而導致不合格；而膠囊生產企業F產品的含量均勻度較差，1批產品咖啡因含量均勻度不合格，馬來酸氯苯那敏含量均勻度需復試，含量均勻度A值和S值均較大，導致產品的含量均勻較差。膠囊生產企業K產品的含量均勻度極差，1 批產品的咖啡因和馬來酸氯苯那敏含量均勻度均需復試，2種主成分的A值僅為1.41%和0.06%，表明主藥投料量合格；但S值過大，分別為9.41%和14.14%。表明混合制粒時未混勻，導致產品的含量均勻度極差。膠囊生產企業O產品的馬來酸氯苯那敏含量高達142%，這與含量測定結果一致，其規格為同品種其他產品標識量的1/2，對乙酰氨基酚、鹽酸金剛烷胺和咖啡因含量均符合規定，馬來酸氯苯那敏的含量卻遠高于規定限度，表明未嚴格按處方量投料生產。膠囊劑中咖啡因含量均勻度需復試的批數較多，涉及12家企業的16批產品，除了膠囊生產企業K的1批產品外，其余均為咖啡因含量過高導致含量均勻度超出規定限度，表明膠囊劑中咖啡因過量投料的現象較片劑普遍。

3.3 含量均勻度不符合規定的原因分析

考察S值較大的片劑生產企業C、膠囊生產企業E和膠囊生產企業K 產品的重量/裝量差異和含量均勻度的關系，結果顯示，由于對乙酰氨基酚每片標示量為250 mg，占每片（粒）制劑總質量的50%～70%，每片（粒）制劑中對乙酰氨基酚的含量與每片（粒）質量直接相關，故控制好重量/裝量差異的均勻性，可保證對乙酰氨基酚每片（粒）含量的均勻性。片劑生產企業C和膠囊生產企業E 的產品由于重量/裝量差異較大，導致含量均勻度不合格，提示生產企業C和E應注意對壓片工藝的改進和提高。膠囊生產企業K的產品咖啡因和馬來酸氯苯那敏的含量和膠囊的裝量差異無關聯，表明混合制粒時未充分混勻。提示生產企業應重視在濕法制粒時制軟材的混合工藝，改進工藝參數，積極查找原因，提高上述3種主成分的混合均勻性。

3.4 小結

復方氨酚烷胺片（膠囊）中5 種主成分的混合順序是保證本品種含量均勻度的關鍵。建議企業根據5種主成分的處方量，按從小到大進行逐級投料和混合，且保證足夠的混合時間，以保證每種主成分混合的均勻性。復方氨酚烷胺片（膠囊）的現行質量標準中，由于缺乏咖啡因和馬來酸氯苯那敏2 種主成分含量及含量均勻度的控制，部分生產企業對這2種成分的投料未嚴格按標準進行，批間差異較大，含量均勻度較差。建議生產企業應嚴格管控咖啡因和馬來酸氯苯那敏的投料情況；同時，應在質量標準中增訂咖啡因和馬來酸氯苯那敏2種主成分的含量及含量均勻度控制項目。