CDC20 在子宮內膜癌中的表達及意義

王娜，劉春靜，楊鈺杰，趙薇，劉麗晶

1.齊齊哈爾醫學院附屬第三醫院婦產科，黑龍江齊齊哈爾 161000；2.齊齊哈爾醫學院附屬第三醫院教務科，黑龍江齊齊哈爾 161000

根據子宮內膜癌臨床特征可將其分為Ⅰ型和Ⅱ型兩大類，其中Ⅰ型約占子宮內膜癌病例的70%~80%，多見高分化，患者預后良好[1-2]；Ⅱ型約占子宮內膜癌病例的10%~20%，具有較強的侵襲性、細胞分化程度低，預后較差[3-4]。雖然上述基因與子宮內膜癌的預后相關，但是仍存在一定的局限性。因此，臨床急需新的生物標志物來分析子宮內膜癌患者的預后水平。細胞分裂周期蛋白20（cell division cycle 20, CDC20）是最早發現與細胞周期中的有絲分裂異常相關的因子，其與染色體分離異常及蛋白-蛋白相互作用密切相關[5]。近年來的研究發現，乳腺癌等患者腫瘤干細胞中存在大量的CDC20，而CDC20 水平與癌癥患者預后水平密切相關[6-7]。但目前臨床并無關于CDC20 與子宮內膜樣腺癌的研究，基于此，本研究將選取2020 年1 月—2021 年3 月于齊齊哈爾醫學院附屬第三醫院婦產科收治的96 例子宮內膜癌患者為研究對象，探討CDC20 在子宮內膜癌中的表達及意義。現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取本院收治入院的96 例子宮內膜癌患者為研究對象。根據子宮內膜癌組織中CDC20 表達將其分為CDC20 高表達組及CDC20 低表達組。本研究已通過本院醫學院倫理委員會審批[齊倫審2021（102）號]。

1.2 納入與排除標準

納入標準：患者經病理診斷確診為子宮內膜癌；凝血功能正常；既往未接受過其他抗腫瘤治療；心、肺等功能正常；患者及家屬依從性較好，且精神正常；簽訂知情同意書者。

排除標準：患者不符合手術治療條件；在其他部位出現的腫瘤細胞者；妊娠合并心肝腎等臟器功能不全者；合并其他腫瘤患者；嚴重全身免疫性疾病患者；近期進行放、化療等抗癌治療患者；患者不愿意進行手術治療者；不愿意參加本次研究者。

1.3 方法

組織中的CDC20 表達采用免疫組化法檢測：將患者癌組織及癌旁組織制備成石蠟切片，脫蠟，水化，修復，滅火內源性過氧化物酶，封閉，將美國Abcam 公司生產的一抗CDC20 按照1∶100 倍稀釋后，4℃下反應12 h，切片，加入二抗，顯色，復染，染色情況采用光鏡觀察。雙盲法判斷結果，棕黃色為陽性。染色強度評分：>75%的陽性細胞比例計4 分；51%~75%的陽性細胞比例計3 分；26%~50%的陽性細胞比例計2 分；1%~25%的陽性細胞比例計1分；無陽性細胞不計分。陰性表達為0~1 分，陽性表達為2~12 分。染色強度評分：76%~100%計4分，51%~75%計3 分，26%~50%計2 分，5%~25%計1 分，<5%為0 分。總得分=染色范圍評分×染色強度評分。

CDC20 mRNA 水平采用實時熒光定量PCR 檢測術中取患者癌組織和癌旁組織（距癌組織3 cm），將Trizol 試劑加入后提取RNA，檢測合格的樣本量，合成cDNA 模板鏈，進行實時熒光定量聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction, PCR）擴增。反應條件：下面過程連續40 個循環，3 min94℃預變性，30 s94℃變性，60℃退火30 s。采用2-??Ct 法，計算CDC20 mRNA 的相對表達水平。

CDC20 蛋白水平采用Western blotting 檢測，提取患者癌組織和癌旁組織（距癌組織3 cm），行電泳，轉至PVDF 膜上，加入CDC20 鼠單克隆抗體、抗β-actin 鼠單克隆抗體（1∶1 000）4℃孵育過夜，洗滌3 次；將羊抗鼠抗體（1∶4 000）室溫孵育1 h，洗滌3次，顯色，拍照。

1.4 觀察指標

①兩組臨床病理特征的對比：對比兩組年齡、體質指數（body mass index, BMI）、分娩次數、分娩方式、組織學分型、國際婦產科聯盟（federation international of gynecology and obstetrics, FIGO）分期、病理分級等。②子宮內膜癌患者CDC20 表達情況的影響因素分析。

1.5 統計方法

應用SPSS 21.0 統計學軟件分析數據，采用Excel 建立數據庫。符合正態分布數據的計量資料以（）表示，采用t檢驗；計數資料以例數（n）和率（%）表示，比較采用采用χ2檢驗或Kruskal-Wallis秩和檢驗；經Cox 回歸分析子宮內膜癌的影響因素。P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者臨床病理特征的對比

96 例子宮內膜癌組織中CDC20 高表達69 例，低表達27 例。兩組年齡、BMI、分娩次數、分娩方式比較，差異無統計學意義（P>0.05）；兩組組織學分型、FIGO 分期、病理分級、CDC20mRNA 及CDC20 蛋白評分比較，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2 子宮內膜癌患者CDC20 表達情況的影響因素分析

經Cox 回歸分析顯示，子宮內膜癌患者CDC20表達情況的影響因素是FIGO 分期、病理分級、CDC20mRNA、CDC20 蛋白。見表2。

表2 子宮內膜癌患者CDC20 表達情況的影響因素分析

3 討論

子宮內膜癌的發病率和致死率均較高。目前，子宮內膜癌的早期診斷通常是根據患者的絕經后出血等臨床表現及宮腔鏡下子宮內膜活檢、診斷性刮宮為主，但若患者錯失最佳的診斷時機，則會造成腫瘤轉移或術后復發，預后不佳。因此，臨床急需有效的、可靠的生物學標記物，改善患者的預后[8-9]。CDC20 屬于細胞周期調節蛋白，位于染色體1p34.1。在細胞周期的不同時期CDC20 水平并不相同，細胞的G1 期內并無CDC20表達，S 期則出現CDC20 表達，CDC20 在G2/M 期則達到一個峰值[10]。細胞處于有絲分裂后期時，則CDC20 能夠降解其蛋白依賴激酶和底物細胞周期蛋白等泛素化，其參與細胞調節。機體內CDC20 水平異常則會造成有絲分裂出錯，且會造成部分癌癥基因的過表達和抑癌基因的丟失或者突變。CDC20 水平高表達會促進癌細胞增殖，也促使癌細胞自我修復能力提高，造成腫瘤患者腫瘤抑制失控[11]。CDC20 亦可緩沖腫瘤細胞凋亡速度，參與腫瘤的進展。近年來，隨著SAC 與CDC20 關系的深入研究，臨床也越來越重視CDC20 與腫瘤的關系。

CDC20 在胃癌、卵巢癌、宮頸癌、膠質母細胞瘤、乳腺癌、胰腺導管腺癌等惡性腫瘤中呈高表達，且參與腫瘤發生發展過程[12]。張哲等[13]的研究指出，CDC20 在乳腺癌中呈高表達，且與臨床分期密切相關，可預測患者的預后水平。在乳腺癌進展中CDC20 能夠發揮重要作用，CDC20 參與腫瘤細胞的增殖，同時也與乳腺癌細胞的侵襲能力相關，這可能在細胞有絲分裂后期中CDC20 也發揮了重要作用，其可以通過調節后期促進復合體的活性調節細胞周期進程。但目前臨床并無關于CDC20 與子宮內膜癌關系的研究。本研究結果顯示，不同組織學分型、FIGO 分期、病理分級子宮內膜癌組織中CDC20 表達比較，差異有統計學意義（P<0.05），提示CDC20 與子宮內膜癌患者組織學分型、FIGO 分期、病理分級密切相關。

目前的研究指出，治療如子宮內膜癌等惡性腫瘤疾病時需根據手術病理分期進行區分，以明確手術治療的準確性。FIGO 分期能夠為子宮內膜癌的治療方案提供依據，其可確定患者的腫瘤分期，其能夠有效評估癌組織是否侵犯到陰道、直腸等組織，輔助檢查包括膀胱鏡等，其操作簡單，具有較高的適應性，直接影響到臨床決策及預后水平[14]。本研究結果顯示，子宮內膜癌患者CDC20 表達情況的影響因素是FIGO分期（OR=2.604、95%CI=1.401~3.886，P<0.001）、病理分級、CDC20 陽性，提示FIGO 分期、病理分級、CDC20mRNA、CDC20 蛋白是子宮內膜癌患者CDC20 表達情況的影響因素。但楊影等[15]的研究指出，FIGO 分期（β=0.813、S.E.=0.189，Waldχ2=17.936、OR=2.255、95%CI=1.557~3.226，P=0.001）是子宮內膜癌患者預后的影響因素，與本研究結果相同。但本研究也存在不足之處，本研究所納入病例均為本院子宮內膜癌患者，病例較少，后期應聯合其他醫院擴大比例人數進一步研究證實。另外，且未進行基礎研究，后期有機會希望通過基礎研究進一步證實本研究結果。

綜上所述，不同組織學分型、FIGO 分期、病理分級子宮內膜癌組織與CDC20 表達密切相關，且癌組織中CDC20 表達高于癌旁組織，子宮內膜癌患者CDC20 表達情況的影響因素是FIGO分期、病理分級、CDC20mRNA、CDC20 蛋白。