桃紅四物湯多糖的結(jié)構(gòu)分析及對(duì)缺血性腦卒中大鼠的抗炎作用

張亞南,趙夢(mèng)蝶,唐林峰,侯欣宇,張亞中,韓 嵐,3,彭代銀,3,4

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,安徽 合肥 230012;2.安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院,安徽 合肥 230051;3.中藥復(fù)方安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,安徽 合肥 230012;4.省部共建安徽道地中藥材品質(zhì)提升協(xié)同創(chuàng)新中心,安徽 合肥 230012)

腦卒中是世界上死亡率較高的疾病之一,目前中國腦卒中患病人數(shù)高達(dá)1 300萬,且發(fā)病率和死亡率依然在逐步上升[1]。腦卒中分為缺血性腦卒中、出血性腦卒中,缺血性腦卒中約占80%,可直接威脅患者的生命[2]。目前,臨床上主要采用溶栓劑、自由基清除劑等藥物治療腦卒中,但具有治療時(shí)間窗窄、作用靶點(diǎn)單一等問題。中藥及其復(fù)方所含化學(xué)成分多樣,在治療腦卒中過程中具有多靶點(diǎn)、多途徑等優(yōu)勢(shì)。

桃紅四物湯是治療腦卒中的有效方劑[3-4]。該方是在《仙授理傷續(xù)斷秘方》中四物湯的基礎(chǔ)上加桃仁、紅花組成,全方由桃仁、紅花、熟地黃、當(dāng)歸、白芍、川芎6味藥組成,具有活血化瘀、祛瘀生新之功效。桃紅四物湯中主要化學(xué)成分包括芳香酸、黃酮、多糖等[5]。多糖是桃紅四物湯的主要活性成分之一。有文獻(xiàn)報(bào)道,中藥多糖具有抗炎[6]、抗氧化[7]等多種生物活性。有研究[8]表明,當(dāng)歸多糖可以通過抑制海馬神經(jīng)元的凋亡減少對(duì)腦缺血大鼠的損傷;也有研究[9]證明,桃紅四物湯不同提取部位對(duì)血虛血瘀模型動(dòng)物都有作用,其多糖組的補(bǔ)血活血作用更為顯著。課題組前期研究[10]表明,桃紅四物湯能顯著減小腦梗死體積,改善腦組織病理損傷和學(xué)習(xí)記憶能力。但目前關(guān)于桃紅四物湯多糖的結(jié)構(gòu)特征和對(duì)缺血性腦卒中的保護(hù)作用報(bào)道甚少,本研究旨在探究桃紅四物湯多糖的結(jié)構(gòu)特征及桃紅四物湯多糖對(duì)缺血性腦卒中大鼠的藥效作用,以期為桃紅四物湯藥用資源的發(fā)掘提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)SD雄性大鼠98只,體質(zhì)量(220±20)g,購自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司[生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK(魯)2019-0003]。動(dòng)物在標(biāo)準(zhǔn)條件下進(jìn)行光照和黑暗循環(huán),自由獲取食物和水(室溫25 ℃,濕度50%),實(shí)驗(yàn)開始前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。本研究根據(jù)安徽中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)的方案和指南進(jìn)行,動(dòng)物倫理學(xué)編號(hào)為AHUCM-rats-2021041。

1.2 藥材 桃仁(批號(hào)2006100152)、紅花(批號(hào)170025)、熟地黃(批號(hào)200780222)、當(dāng)歸(批號(hào)2101110042)、白芍(批號(hào)201219)、川芎(批號(hào)2010180072)均購自安徽亳州市滬譙藥業(yè)有限公司,并經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院俞年軍教授鑒定。

1.3 藥品與試劑 尼莫地平(批號(hào) 200108):亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司;TTC(批號(hào) 20220711):金克隆(北京)生物技術(shù)有限公司;4%多聚甲醛(批號(hào) 22329929):蘭杰柯科技有限公司;單糖標(biāo)準(zhǔn)品:上海源葉生物科技有限公司;其余試劑均為分析純。白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)試劑盒(批號(hào) MM-0047R1):江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司;白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)試劑盒(批號(hào)分別為20220401-30219B、20220401-31063B):泉州市睿信生物科技有限公司;抗GAPDH抗體(批號(hào) ABL1020;Abbkine):亞科因生物科技有限公司;抗IL-6抗體(批號(hào) YT5348):美國Immunoway生物有限公司;抗IL-1β抗體(批號(hào) AF5103):江蘇親科生物有限公司;抗TNF-α抗體(批號(hào) 17590-1-AP):武漢三鷹生物技術(shù)有限公司。

1.4 主要儀器 紫外—可見分光光度計(jì)(UV-1900):上海翱藝有限公司;全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀:美國Thermofisher;紅外光譜儀(尼高力6700):美國Thermofisher;高效液相色譜儀:美國Thermofisher。

2 方法

2.1 桃紅四物湯多糖的制備 采用水提醇沉法提取桃紅四物湯多糖[11]。按全方比例稱取桃仁、紅花、熟地黃、當(dāng)歸、白芍、川芎置于60 ℃烘干后粉碎,倒入95%乙醇脫脂,料液比為1∶20。在室溫下攪拌提取24 h后進(jìn)行抽濾,濾渣在45 ℃烘箱烘干至無醇味,再加入蒸餾水提取,料液比為1∶20,65 ℃浸提2 h,抽濾后收集濾渣再次水提,濾液在65 ℃下減壓濃縮。將無水乙醇濃度調(diào)節(jié)為80%的乙醇進(jìn)行醇沉,在4 ℃冰箱放置24 h,沉淀用蒸餾水溶解,經(jīng)Sevage法脫蛋白。透析、冷凍、干燥后即得桃紅四物湯多糖。

2.2 桃紅四物湯多糖中總糖含量的測(cè)定 采用苯酚—硫酸法[12]檢測(cè)桃紅四物湯多糖中總糖的含量。

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制 精密稱取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品配置成1 mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液。取8個(gè)10 mL容量瓶,分別加入0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液,用超純水定容。分別吸取1.0 mL不同濃度的葡萄糖溶液加入8支EP管中,然后加入80%苯酚25 μL和2.5 mL濃硫酸。混勻后在37 ℃水浴鍋中溫育20 min。在490 nm處測(cè)定反應(yīng)液吸光度值,繪制多糖濃度與吸光度之間的關(guān)系曲線。

2.2.2 樣品的測(cè)定 配制1 mg/mL樣品溶液,稀釋20倍后按上述方法進(jìn)行操作,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總糖含量。

2.3 桃紅四物湯多糖分子量的測(cè)定 采用凝膠滲透色譜測(cè)定桃紅四物湯多糖的分子量,稱取5 mg桃紅四物湯多糖,用流動(dòng)相配置成終濃度為1 mg/mL溶液,經(jīng)0.43 μm濾膜過濾,流動(dòng)相為0.1 mol/L NaNO3,標(biāo)準(zhǔn)曲線則以聚乙二醇為標(biāo)準(zhǔn)品,測(cè)定多糖分子量分布。

2.4 桃紅四物湯多糖的單糖組成分析

2.4.1 多糖水解和衍生化 精確稱量多糖樣品及對(duì)照品5 mg,加入1 mL 超純水溶解,再加入2 mol/L三氟乙酸溶液1 mL,110 ℃ 加熱2 h。冷卻至室溫,用3 mol/L NaOH溶液中和至pH值為7.0,超純水定容至5 mL,得到水解液。取上述水解液及對(duì)照品溶液各400 μL,加0.5 mol/L 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮甲醇溶液和0.3 mol/L的NaOH溶液各400 μL,混勻,70 ℃水浴衍生化100 min,加入0.3 mol/L HCl溶液500 μL,混勻,加入2 mL CHCl3萃取3次,收集水層離心后過0.45 μm微孔濾膜備用[13]。

2.4.2 高效液相色譜條件 色譜柱為ZORBAX Eclipse XDB-C18,流動(dòng)相為乙腈—磷酸鹽緩沖液等度洗脫,流速為0.8 mL/min,柱溫30 ℃,檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm,進(jìn)樣量10 μL。

2.5 紅外光譜分析 將1 mg多糖與100 mg干燥的溴化鉀粉末混合,然后研磨壓片,采用紅外光譜儀在4 000～400 cm-1處掃描。

2.6 桃紅四物湯多糖對(duì)缺血性腦卒中大鼠的影響

2.6.1 缺血性腦卒中大鼠模型制備 采用線栓法建立大腦中動(dòng)脈阻塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)大鼠模型。將大鼠麻醉后仰臥固定在鼠板上,沿頸中線切開,鈍性分離出右頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈及頸外動(dòng)脈,將頸總和頸外動(dòng)脈用手術(shù)線結(jié)扎,動(dòng)脈夾夾緊頸內(nèi)動(dòng)脈,用手術(shù)剪在頸外和頸內(nèi)動(dòng)脈交叉處剪一小切口,在開口上方打一活結(jié),將線栓通過切口向下插入至頸內(nèi)動(dòng)脈,打開動(dòng)脈夾,將線栓慢慢插入直至感到阻力,扎緊活結(jié)后縫合。假手術(shù)組操作方法同上但不插線栓。模型復(fù)制24 h后進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分,評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參照Zea Longa[14]評(píng)分法。0分:運(yùn)動(dòng)毫無障礙,神經(jīng)功能沒有損傷;1分:損傷對(duì)側(cè)前肢彎曲,不能完全伸展;2分:爬行時(shí)向損傷對(duì)側(cè)旋轉(zhuǎn);3分:爬行時(shí)向損傷對(duì)側(cè)傾倒;4分:不能自主行走、無自主意識(shí);5分:動(dòng)物死亡。評(píng)分越高,說明大鼠的神經(jīng)功能缺損越嚴(yán)重。

2.6.2 動(dòng)物分組與給藥 將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組,模型組,桃紅四物湯多糖低、中、高劑量組,桃紅四物湯組,尼莫地平組,每組14只。桃紅四物湯多糖低、中、高劑量組分別給予桃紅四物湯多糖0.09、0.18、0.36 g/kg,桃紅四物湯組給予桃紅四物湯18 g/kg,尼莫地平組給予尼莫地平0.02 g/kg。假手術(shù)組和模型組給予等容積生理鹽水。桃紅四物湯的制備工藝及給藥劑量參考課題組前期研究[3],按全方比例稱取藥材,先以10倍量水提取2 h,過濾后濾渣再以8倍量水提取1.5 h,合并兩次濾液濃縮成生藥含量為1.8 g/mL的濃縮液備用。術(shù)后第2天開始給藥,每日1次,連續(xù)7 d。

2.6.3 Berderson評(píng)分 給藥結(jié)束后進(jìn)行評(píng)分。將大鼠的尾巴提起高于地面1 m,觀察大鼠前肢行為,根據(jù)Berderson評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。0分:正常,無神經(jīng)功能缺損癥狀;1分:提尾時(shí)左前肢屈曲,不能完全伸展;2分:左前肢屈曲,側(cè)肢抵抗力嚴(yán)重下降,無轉(zhuǎn)圈行為;3分:左前肢屈曲,側(cè)肢抵抗力嚴(yán)重下降,且不自主轉(zhuǎn)圈;4分:意識(shí)不清,甚或24 h內(nèi)死亡。

2.6.4 TTC染色檢測(cè)大鼠腦梗死率 采用20%烏拉坦將大鼠麻醉后,取出腦組織后清洗干凈,然后放入-20 ℃冰箱冷凍20 min,取出放在冰盒上快速切成5片厚度為2 mm的冠狀切片。用2% TTC溶液對(duì)腦片進(jìn)行染色,黑暗環(huán)境下37 ℃水浴30 min,隨后用4%多聚甲醛溶液將染色的組織樣本固定過夜。白色部分為梗死區(qū)。拍照,用Image J軟件計(jì)算出各組大鼠腦梗死率。

2.6.5 蘇木精—伊紅(hematoxylin-eosin staining, HE)染色觀察各組大鼠腦組織病理變化 將大鼠腦組織取出后放入4%多聚甲醛固定,石蠟包埋,切片,HE染色,顯微鏡下觀察腦組織的病理形態(tài)。

2.6.6 免疫組織化學(xué)染色法觀察大鼠腦組織炎癥因子的表達(dá)水平 大鼠取腦后4%多聚甲醛固定,石蠟包埋,切片,將切片置于二甲苯洗脫蠟,乙醇梯度脫水,檸檬酸緩沖液加熱,自然冷卻,浸泡于H2O2,PBS沖洗;一抗大鼠血清4 ℃過夜,二抗孵育,DAB顯色,蘇木精重新染色后中性膠密封。顯微鏡下觀察結(jié)果,拍照,Image J軟件進(jìn)行定量分析。

2.6.7 炎癥指標(biāo)的檢測(cè) 將大鼠麻醉后腹主動(dòng)脈取血,靜置1 h,離心取上清進(jìn)行分裝,放入-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩０凑赵噭┖姓f明書操作檢測(cè)TNF-α、IL-1β、IL-6含量。

2.6.8 Western blot法檢測(cè)大鼠腦組織中炎癥因子表達(dá)水平 將腦組織用液氮研磨后稱質(zhì)量,將蛋白酶抑制劑按比例加入裂解液中,放入冰盒中裂解1 h后,4 ℃、12 000 r/min離心15 min,取上清,使用BCA法測(cè)定蛋白濃度,加入1/4容積的上樣緩沖液。用SDS-PAGE凝膠分離總蛋白,然后用轉(zhuǎn)膜裝置轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,將膜放入相應(yīng)的一抗中4 ℃孵育過夜。洗滌后將膜放入對(duì)應(yīng)二抗,室溫下孵育1.5 h,使用ECL試劑檢測(cè)條帶,用Image J分析蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。

3 結(jié)果

3.1 桃紅四物湯多糖中總糖的含量 以吸光度值為縱坐標(biāo)(Y),葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行線性回歸,得到回歸方程Y=3.805 7X+0.009 8,R2=0.994 3,測(cè)得桃紅四物湯多糖中總糖含量(純度)為75.25%。

3.2 桃紅四物湯多糖的分子量 采用凝膠滲透色譜法測(cè)定,通過計(jì)算可以直接得到樣品中每個(gè)點(diǎn)的分子量,通過Breeze軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行處理,得到多糖分子量為2.47×104Da。

3.3 桃紅四物湯多糖的單糖組成 桃紅四物湯多糖是雜多糖,由甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等單糖組成。其中甘露糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖的物質(zhì)的量的比為0.59∶0.41∶72.03∶16.69∶6.22。

圖1 桃紅四物湯多糖紅外光譜

3.5 桃紅四物湯多糖對(duì)MCAO大鼠神經(jīng)功能的影響 連續(xù)給藥1周后,假手術(shù)組大鼠評(píng)分為0分,沒有任何神經(jīng)功能缺陷。MCAO大鼠出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能缺陷,如不能完全伸展左前爪,行走時(shí)轉(zhuǎn)向或向左傾倒,神經(jīng)功能評(píng)分高于假手術(shù)組,給藥治療后,評(píng)分顯著降低(P<0.05),表明神經(jīng)功能損傷得到緩解。見圖2。

注:A.假手術(shù)組;B.模型組;C.桃紅四物湯多糖低劑量組;D.桃紅四物湯多糖中劑量組;E.桃紅四物湯多糖高劑量組;F.桃紅四物湯組;G.尼莫地平組;與假手術(shù)組比較,*P<0.05;與模型組比較,#P<0.05

3.6 桃紅四物湯多糖對(duì)MCAO大鼠腦梗死率的影響 假手術(shù)組大鼠腦無損傷;模型組大鼠腦部出現(xiàn)明顯的梗死區(qū),腦梗死率顯著增加(P<0.05);與模型組比較,各給藥組腦梗死區(qū)明顯減小,腦梗死率明顯降低(P<0.05),說明桃紅四物湯多糖對(duì)腦卒中大鼠有腦保護(hù)作用。見圖3。

注:A.假手術(shù)組;B.模型組;C.桃紅四物湯多糖低劑量組;D. 桃紅四物湯多糖中劑量組;E.桃紅四物湯多糖高劑量組;F.桃紅四物湯組;G.尼莫地平組;與假手術(shù)組比較,*P<0.05;與模型組比較,#P<0.05

3.7 桃紅四物湯多糖對(duì)MCAO大鼠腦組織病理變化的影響 HE染色結(jié)果顯示,假手術(shù)組大鼠腦組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,未見水腫及炎癥細(xì)胞浸潤且排列整齊;模型組大鼠腦組織細(xì)胞排列不規(guī)則,細(xì)胞出現(xiàn)壞死、紊亂及炎癥細(xì)胞浸潤;與模型組比較,桃紅四物湯組,尼莫地平組,桃紅四物湯多糖低、中、高劑量組大鼠腦組織細(xì)胞壞死區(qū)域均顯著減少,且細(xì)胞排列較為完整緊密。見圖4。

圖4 各組大鼠腦組織形態(tài)比較(HE染色,10×20倍)

3.8 桃紅四物湯多糖對(duì)MCAO大鼠腦組織中炎癥因子的影響 與假手術(shù)組比較,模型組大鼠腦組織中TNF-ɑ、IL-1β、IL-6表達(dá)水平顯著升高(P<0.05);與模型組比較,桃紅四物湯多糖各劑量組TNF-ɑ、IL-1β、IL-6表達(dá)水平顯著下降(P<0.05)。見圖5。

3.9 桃紅四物湯多糖對(duì)MCAO大鼠血清中炎癥因子的影響 與假手術(shù)組比較,模型組大鼠血清TNF-ɑ、IL-1β、IL-6水平顯著升高(P<0.05);與模型組比較,桃紅四物湯多糖低、中、高劑量組大鼠血清TNF-ɑ、IL-1β、IL-6水平顯著降低(P<0.05)。見表1。

表1 桃紅四物湯多糖對(duì)MCAO大鼠血清中炎癥因子的影響

3.10 各組大鼠腦組織中TNF-ɑ、IL-1β、IL-6蛋白表達(dá)水平比較 與假手術(shù)組比較,模型組大鼠腦組織中TNF-ɑ、IL-1β、IL-6蛋白表達(dá)水平顯著上升(P<0.05);與模型組比較,桃紅四物湯多糖低、中、高劑量組大鼠腦組織中TNF-ɑ、IL-1β、IL-6蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.05),說明桃紅四物湯多糖可減輕腦卒中大鼠的炎癥反應(yīng)。見圖6。

注:A.假手術(shù)組;B.模型組;C.桃紅四物湯多糖低劑量組;D.桃紅四物湯多糖中劑量組;E.桃紅四物湯多糖高劑量組;F.桃紅四物湯組;G.尼莫地平組;與假手術(shù)組比較,*P<0.05;與模型組比較,#P<0.05

4 討論

近年來,中藥在預(yù)防和治療腦卒中方面取得了較大進(jìn)展,許多中藥的有效成分和復(fù)方在藥理實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用中顯示出較為顯著的療效。從傳統(tǒng)中藥提取物,如多糖方面探尋抗腦卒中藥物,充分發(fā)揮中藥多靶點(diǎn)、多途徑、不良反應(yīng)較小的優(yōu)勢(shì),也是值得探索的途徑之一。遠(yuǎn)志多糖可通過調(diào)節(jié)TLR4介導(dǎo)的MyD88/NF-κB通路,發(fā)揮抗神經(jīng)炎癥和神經(jīng)保護(hù)作用[17]。五味子多糖可以改善小鼠認(rèn)知功能,減輕神經(jīng)炎癥,其抗炎機(jī)制可能是激活NF-κB/MAPK通路[18]。黃芪多糖能改善阿爾茨海默病大鼠氧化應(yīng)激反應(yīng),其保護(hù)神經(jīng)的機(jī)制可能是通過激活Wnt信號(hào)通路抑制神經(jīng)毒性[19]。本課題組前期對(duì)于桃紅四物湯和方中非多糖類的小分子成分進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)這類成分對(duì)于腦卒中有顯著作用[10,20]。在此基礎(chǔ)上,本研究對(duì)桃紅四物湯多糖展開研究。本研究選用線栓法建立大鼠MCAO模型,通過TTC染色、Berderson神經(jīng)功能評(píng)分,觀察桃紅四物湯多糖對(duì)缺血性腦卒中大鼠的治療作用。結(jié)果顯示,與模型組大鼠比較,桃紅四物湯多糖干預(yù)后,MCAO模型大鼠神經(jīng)功能有不同程度的恢復(fù),腦梗死率降低,提示桃紅四物湯多糖對(duì)缺血性腦卒中大鼠有明顯的腦保護(hù)作用。

腦缺血可誘發(fā)炎癥因子的釋放,從而對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)造成損害。炎癥因子可通過誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞浸潤,刺激膠質(zhì)細(xì)胞活化因子的表達(dá);同時(shí),炎癥因子還可以刺激細(xì)胞黏附分子生成[21]。炎癥反應(yīng)作為腦缺血損傷的主要原因之一,影響腦缺血的治療及預(yù)后。腦缺血狀態(tài)下,炎癥細(xì)胞如星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌大量IL-1β參與腦缺血早期炎癥反應(yīng)。TNF-α是一種免疫調(diào)節(jié)蛋白,可介導(dǎo)多種促炎癥細(xì)胞因子,且TNF-α表達(dá)水平升高與腦缺血的損傷成正比。另有研究[22]表明,TNF-α的表達(dá)與認(rèn)知能力減弱、神經(jīng)元毒性密切相關(guān);IL-1過量表達(dá),也會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)元死亡,加重神經(jīng)炎癥,造成認(rèn)知障礙性疾病。有研究[23]證實(shí),三七多糖可以通過改善腦組織抗氧化能力,抑制炎癥細(xì)胞因子過度產(chǎn)生,發(fā)揮對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠的保護(hù)作用。紅花多糖可抑制腦缺血再灌注損傷大鼠炎癥因子的產(chǎn)生,減少神經(jīng)元凋亡[6]。當(dāng)歸多糖預(yù)處理可以減輕缺血再灌注大鼠腦組織中炎癥反應(yīng)[24]。本研究也發(fā)現(xiàn):腦缺血后炎癥因子表達(dá)水平升高,藥物干預(yù)后,桃紅四物湯組和尼莫地平組大鼠血清和腦組織中IL-6、IL-1β、TNF-α的表達(dá)水平顯著降低;桃紅四物湯多糖各劑量組大鼠IL-6、IL-1β、TNF-α表達(dá)水平也明顯降低,但效果不及桃紅四物湯組。結(jié)果說明,多糖作為桃紅四物湯的有效成分,可以通過抑制炎癥因子的表達(dá),減輕腦缺血損傷,發(fā)揮治療腦卒中的作用。

綜上,桃紅四物湯多糖對(duì)MCAO模型大鼠具有保護(hù)作用,可以降低血清腦組織中IL-6、IL-1β、TNF-α的表達(dá)水平,減輕炎癥反應(yīng)。