氣相色譜-串聯質譜法和高效液相色譜-串聯質譜法檢測大棗中33 種禁用農藥殘留量

伍麗君，周勁松，2，馬恩耀，2，謝珊珊，孫心恒，陳秀敏

（1.廣東漢潮中藥科技有限公司/廣東省傳統中藥創新中心，廣州 510000；2.廣州采芝林藥業有限公司，廣州 510360）

大棗又名棗、紅棗，為鼠李科植物棗（Ziziphus jujubaMill.）的成熟果實。大棗原產于中國，是廣為應用的食藥同源品種。大棗含有豐富的維生素C、維生素P，除供生食外，還可制成蜜棗、酒棗、牙棗等蜜餞和果脯，也可作棗泥、棗面、棗酒、棗醋等，為食品工業原料。棗供藥用，有養胃、健脾、益血、滋補、強身之功效［1］。

食品和藥品安全問題是社會公眾所關注的焦點和熱點，而農藥殘留則是影響食品和藥品安全性的重要因素，對農藥殘留量的檢測和限量控制是保障食品和藥品安全性的重要手段。作為食品的大棗（鮮棗），早在2005 年便有國家標準對其農藥殘留最大限量和檢測方法做出了規定［2］。作為藥品的大棗，則在2020 年才有國家標準做出規定，《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）2020 年版新增了“藥材及飲片（植物類）中禁用農藥多殘留測定法”，并規定中藥材、中藥飲片中不得檢出中藥材種植過程中禁用的33 種農藥［3］。已有對大棗中農藥殘留進行分析的文獻尚不多，且集中于作為食品的大棗［4-8］。本研究按照《中國藥典》2020 年版要求，對5 個產地的20 批大棗藥材中的33 種農藥殘留量進行了檢測，以期了解市場上藥用大棗中農藥殘留的狀況。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

TGL-20R 型醫用高速冷凍離心機（山東百歐醫療科技有限公司），安譜EFAA-VM-B 型自動氮吹儀（上海安譜實驗科技股份有限公司），Agilent 1290-6470 型超高效液相色譜-三重四級桿質譜聯用儀（安捷倫科技有限公司），Agilent 8890-7000D 型氣相色譜-三重四級桿質譜聯用儀（安捷倫科技有限公司），N-1300V-WB 型旋轉蒸發儀（上海愛朗儀器有限公司），梅特勒XPR36 型百萬分之一分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司），SPH-310F 型恒溫振蕩器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司），安譜EOAA-VM-B 型渦旋儀（上海安譜實驗科技股份有限公司）。

1.2 材料與試劑

1.2.1 材料 大棗藥材收集自5 個產地，分別為新疆維吾爾自治區5 批，河北省5 批，甘肅省5 批，河南省3 批，山西省2 批。經廣州中醫藥大學黃海波教授鑒定均為鼠李科植物棗（Ziziphus jujubaMill.）的成熟果實。

1.2.2 試劑 甲酸銨（色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司）；乙腈（色譜純，廣州化學試劑廠）；冰醋酸（優級純，天津市科密歐化學試劑有限公司）；甲酸（分析純，天津市大茂化學試劑廠）；提取鹽［60105-335-B，賽默飛世爾科技（中國）有限公司］；分散固相萃取凈化管（33.33 mg/mL，上海星可高純溶劑有限公司）；磷酸三苯酯標準品溶液（CDAA-S-412134-JD 1mL，濃度為1 000 mg/L，溶劑為乙腈，上海安譜實驗科技股份有限公司）；55 種禁用農藥混合對照品溶液（CDAA-M-490407-TY 1.2 mL，濃度為20～200 mg/L，溶劑為丙酮，上海安譜實驗科技股份有限公司）；大棗空白基質樣品（采集自野外）。

1.3 對照溶液的制備

1.3.1 混合對照溶液的制備 精密量取禁用農藥混合對照品溶液（已標示各相關農藥品種的濃度）250 μL，置于10 mL 量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻得中間儲備液；再精密量取中間儲備液2 mL，置于10 mL 量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻即得工作溶液。

1.3.2 氣相色譜-串聯質譜法分析用內標溶液的制備 精密量取磷酸三苯酯標準品溶液1.0 mL，加乙腈制成0.1 μg/mL 的氣相色譜-串聯質譜法分析用的內標溶液。

1.3.3 空白基質溶液的制備 取空白基質樣品，同供試品溶液的制備方法處理制成空白基質溶液。

1.3.4 基質混合對照溶液的制備 分別精密吸取空白基質溶液1.0 mL 6 份，40 ℃氮吹濃縮至約0.4 mL，分別加入工作溶液l0、20、50、100、150、200 μL，加乙腈定容至l mL，渦旋混勻，即得。

1.4 供試品溶液的制備

取粉碎后的大棗3 g，置50 mL 聚苯乙烯具塞離心管中，加入1%冰醋酸溶液15 mL，渦旋至藥粉充分浸潤，放置30 min，精密加入乙腈15 mL，渦旋使其混勻，置于振蕩器上以500 次/min 劇烈振蕩5 min，加入提取鹽7.5 g，立即搖散，再置振蕩器上以500次/min 劇烈振蕩3 min，于冰浴中冷卻10 min，以4 000 r/min 在10～20 ℃離心5 min，取上清液9 mL，置分散固相萃取凈化管中，渦旋使其充分混勻，置振蕩器上以500 次/min 劇烈振蕩5 min 使其凈化完全，400 r/min 離心5 min，精密吸取上清液5 mL，置氮吹儀上于40 ℃水浴濃縮至約0.4 mL，加乙腈稀釋至1.0 mL，渦旋混勻，用0.22 μm 有機濾膜濾過，濾液即為供試品溶液。

1.5 色譜條件

1.5.1 氣相色譜-串聯質譜法［5］色譜條件：Agilent DB-17MS（規格為30.00 m×0.25 mm×0.25 μm）。進樣口溫度250 ℃，不分流進樣。載氣為高純氦氣（He）。進樣口為恒壓模式，柱前壓力為146 kPa。程序升溫：初始溫度60 ℃，保持1 min，以30 ℃/min 的速率升至120 ℃，再以10 ℃/min 的速率升溫至160 ℃，再以2 ℃/min 的速率升溫至230 ℃，最后以15 ℃/min 的速率升溫至300 ℃，保持6 min。

質譜條件：以三重四極桿串聯質譜儀檢測；離子源為電子轟擊源（EI），離子源溫度250 ℃。碰撞氣為氮氣或氬氣。質譜傳輸接口溫度250 ℃。質譜監測模式為多反應監測（MRM）。

1.5.2 高效液相色譜-串聯質譜法［6］色譜條件：Kinetex（100.0 mm×2.1 mm，2.6 μm）。以0.1 %甲酸溶液（含5 mmol/L 甲酸銨）為流動相A，以乙腈-0.1%甲酸溶液（含5 mmol/L 甲酸銨）（95∶5）為流動相B，梯度洗脫為0～1 min，0%流動相A，30%流動相B；1～12 min，70%→0%流動相A，30%→100%流動相B；12～14 min，0%流動相A，100%流動相B；流速為0.3 mL/min，柱溫為40 ℃。

質譜條件以三重四極桿串聯質譜儀檢測；離子源為電噴霧（ESI）離子源，正離子掃描模式。監測模式為多反應監測（MRM）。

1.6 測定方法

1）氣相色譜-串聯質譜法。分別精密吸取上述基質混合對照溶液和供試品溶液各1 mL，精密加入內標溶液0.3 mL，混勻，濾過，取續濾液。分別精密吸取上述2 種溶液各1 μL，注入氣相色譜串聯質譜儀，按內標標準曲線法計算，即得。

2）高效液相色譜-串聯質譜法。分別精密吸取上述基質混合對照溶液和供試品溶液各1 mL，精密加入水0.3 mL，混勻，濾過，取續濾液。分別精密吸取上述2 種溶液各1～5 μL，注入液相色譜-串聯質譜儀，按外標標準曲線法計算，即得。

2 結果與分析

2.1 線性、范圍及定量限

由表1 可知，在所用濃度范圍內，各農藥成分均呈良好的線性關系，定量限均達到《中國藥典》2020年版的要求。

2.2 準確度

稱取5.000 g經過驗證不含目標物的供試品9份，每3 份為1 組作為平行樣，每份分別加入“1.3.1”的中間儲備溶液30、60、90 μL，后續依照“1.4”的供試品溶液制備，再按照“1.5”的色譜條件進行分析。

氣相色譜-串聯質譜法下加入35 種禁用農藥混合對照品溶液后，農藥回收率在65.54%～101.03%，相對標準偏差（RSD）在0.38%～11.54%。高效液相色譜-串聯質譜法下加入30 種禁用農藥混合對照品溶液后，農藥回收率在62.92%～109.96%，RSD在0.04%～3.71%。試驗的回收率均在60.00%～130.00%，表明該方法的準確度良好，能夠滿足55 種農藥殘留的檢測要求。

2.3 穩定性試驗

精密稱定1 份樣品，加入“1.3.1”的中間儲備溶液30 μL，按照“1.4”的方法制備供試品溶液，室溫放置，分別在0、5、10、14、18、24 h 測定濃度，再按照“1.5”的色譜條件進行分析。

氣相色譜-串聯質譜法和高效液相色譜-串聯質譜法下各時間化合物檢出濃度的RSD均小于15%，表明該方法重復性良好。

2.4 樣品測定

采集了20 批來自5 個產地的大棗藥材，并采用本試驗所建立的方法對藥材進行了檢測，結果顯示，這20 批大棗藥材均未檢出33 種禁用農藥。

3 結論

本研究建立了QuEChERS-氣相色譜-串聯質譜法和QuEChERS-高效液相色譜-串聯質譜法，建立基質匹配標準曲線和添加內標來消除基質效應，避免樣品出現假陽性。結果進行了方法學確認，考察了線性、范圍、定量限、準確度、穩定性。氣相色譜-串聯質譜法下檢測的35 種禁用農藥在其適宜的線性范圍內相關系數在0.997 2～0.999 9，定量限在0.000 10～0.005 50 mg/kg，回收率在65.54%～101.03%，RSD在0.38%～11.54%。高效液相色譜-串聯質譜法下檢測的30 種禁用農藥在其適宜的線性范圍內相關系數在0.989 6～0.999 7，定量限在0.000 01～0.000 49 mg/kg，回收率在62.92%～109.96%，RSD在0.04%～3.71%。結果表明，建立的QuEChERS-氣相色譜-串聯質譜法和QuEChERS-高效液相色譜-串聯質譜法高效、靈敏、穩定、簡單、快速、經濟，適用于大棗基質的農藥殘留快速檢測。