氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測大棗中33 種禁用農(nóng)藥殘留量

伍麗君，周勁松，2，馬恩耀，2，謝珊珊，孫心恒，陳秀敏

（1.廣東漢潮中藥科技有限公司/廣東省傳統(tǒng)中藥創(chuàng)新中心，廣州 510000；2.廣州采芝林藥業(yè)有限公司，廣州 510360）

大棗又名棗、紅棗，為鼠李科植物棗（Ziziphus jujubaMill.）的成熟果實。大棗原產(chǎn)于中國，是廣為應(yīng)用的食藥同源品種。大棗含有豐富的維生素C、維生素P，除供生食外，還可制成蜜棗、酒棗、牙棗等蜜餞和果脯，也可作棗泥、棗面、棗酒、棗醋等，為食品工業(yè)原料。棗供藥用，有養(yǎng)胃、健脾、益血、滋補(bǔ)、強(qiáng)身之功效［1］。

食品和藥品安全問題是社會公眾所關(guān)注的焦點和熱點，而農(nóng)藥殘留則是影響食品和藥品安全性的重要因素，對農(nóng)藥殘留量的檢測和限量控制是保障食品和藥品安全性的重要手段。作為食品的大棗（鮮棗），早在2005 年便有國家標(biāo)準(zhǔn)對其農(nóng)藥殘留最大限量和檢測方法做出了規(guī)定［2］。作為藥品的大棗，則在2020 年才有國家標(biāo)準(zhǔn)做出規(guī)定，《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）2020 年版新增了“藥材及飲片（植物類）中禁用農(nóng)藥多殘留測定法”，并規(guī)定中藥材、中藥飲片中不得檢出中藥材種植過程中禁用的33 種農(nóng)藥［3］。已有對大棗中農(nóng)藥殘留進(jìn)行分析的文獻(xiàn)尚不多，且集中于作為食品的大棗［4-8］。本研究按照《中國藥典》2020 年版要求，對5 個產(chǎn)地的20 批大棗藥材中的33 種農(nóng)藥殘留量進(jìn)行了檢測，以期了解市場上藥用大棗中農(nóng)藥殘留的狀況。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

TGL-20R 型醫(yī)用高速冷凍離心機(jī)（山東百歐醫(yī)療科技有限公司），安譜EFAA-VM-B 型自動氮吹儀（上海安譜實驗科技股份有限公司），Agilent 1290-6470 型超高效液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（安捷倫科技有限公司），Agilent 8890-7000D 型氣相色譜-三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（安捷倫科技有限公司），N-1300V-WB 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛朗儀器有限公司），梅特勒XPR36 型百萬分之一分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司），SPH-310F 型恒溫振蕩器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司），安譜EOAA-VM-B 型渦旋儀（上海安譜實驗科技股份有限公司）。

1.2 材料與試劑

1.2.1 材料 大棗藥材收集自5 個產(chǎn)地，分別為新疆維吾爾自治區(qū)5 批，河北省5 批，甘肅省5 批，河南省3 批，山西省2 批。經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)黃海波教授鑒定均為鼠李科植物棗（Ziziphus jujubaMill.）的成熟果實。

1.2.2 試劑 甲酸銨（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；乙腈（色譜純，廣州化學(xué)試劑廠）；冰醋酸（優(yōu)級純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；甲酸（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；提取鹽［60105-335-B，賽默飛世爾科技（中國）有限公司］；分散固相萃取凈化管（33.33 mg/mL，上海星可高純?nèi)軇┯邢薰荆涣姿崛锦?biāo)準(zhǔn)品溶液（CDAA-S-412134-JD 1mL，濃度為1 000 mg/L，溶劑為乙腈，上海安譜實驗科技股份有限公司）；55 種禁用農(nóng)藥混合對照品溶液（CDAA-M-490407-TY 1.2 mL，濃度為20～200 mg/L，溶劑為丙酮，上海安譜實驗科技股份有限公司）；大棗空白基質(zhì)樣品（采集自野外）。

1.3 對照溶液的制備

1.3.1 混合對照溶液的制備 精密量取禁用農(nóng)藥混合對照品溶液（已標(biāo)示各相關(guān)農(nóng)藥品種的濃度）250 μL，置于10 mL 量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻得中間儲備液；再精密量取中間儲備液2 mL，置于10 mL 量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻即得工作溶液。

1.3.2 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析用內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密量取磷酸三苯酯標(biāo)準(zhǔn)品溶液1.0 mL，加乙腈制成0.1 μg/mL 的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析用的內(nèi)標(biāo)溶液。

1.3.3 空白基質(zhì)溶液的制備 取空白基質(zhì)樣品，同供試品溶液的制備方法處理制成空白基質(zhì)溶液。

1.3.4 基質(zhì)混合對照溶液的制備 分別精密吸取空白基質(zhì)溶液1.0 mL 6 份，40 ℃氮吹濃縮至約0.4 mL，分別加入工作溶液l0、20、50、100、150、200 μL，加乙腈定容至l mL，渦旋混勻，即得。

1.4 供試品溶液的制備

取粉碎后的大棗3 g，置50 mL 聚苯乙烯具塞離心管中，加入1%冰醋酸溶液15 mL，渦旋至藥粉充分浸潤，放置30 min，精密加入乙腈15 mL，渦旋使其混勻，置于振蕩器上以500 次/min 劇烈振蕩5 min，加入提取鹽7.5 g，立即搖散，再置振蕩器上以500次/min 劇烈振蕩3 min，于冰浴中冷卻10 min，以4 000 r/min 在10～20 ℃離心5 min，取上清液9 mL，置分散固相萃取凈化管中，渦旋使其充分混勻，置振蕩器上以500 次/min 劇烈振蕩5 min 使其凈化完全，400 r/min 離心5 min，精密吸取上清液5 mL，置氮吹儀上于40 ℃水浴濃縮至約0.4 mL，加乙腈稀釋至1.0 mL，渦旋混勻，用0.22 μm 有機(jī)濾膜濾過，濾液即為供試品溶液。

1.5 色譜條件

1.5.1 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法［5］色譜條件：Agilent DB-17MS（規(guī)格為30.00 m×0.25 mm×0.25 μm）。進(jìn)樣口溫度250 ℃，不分流進(jìn)樣。載氣為高純氦氣（He）。進(jìn)樣口為恒壓模式，柱前壓力為146 kPa。程序升溫：初始溫度60 ℃，保持1 min，以30 ℃/min 的速率升至120 ℃，再以10 ℃/min 的速率升溫至160 ℃，再以2 ℃/min 的速率升溫至230 ℃，最后以15 ℃/min 的速率升溫至300 ℃，保持6 min。

質(zhì)譜條件：以三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測；離子源為電子轟擊源（EI），離子源溫度250 ℃。碰撞氣為氮氣或氬氣。質(zhì)譜傳輸接口溫度250 ℃。質(zhì)譜監(jiān)測模式為多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。

1.5.2 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法［6］色譜條件：Kinetex（100.0 mm×2.1 mm，2.6 μm）。以0.1 %甲酸溶液（含5 mmol/L 甲酸銨）為流動相A，以乙腈-0.1%甲酸溶液（含5 mmol/L 甲酸銨）（95∶5）為流動相B，梯度洗脫為0～1 min，0%流動相A，30%流動相B；1～12 min，70%→0%流動相A，30%→100%流動相B；12～14 min，0%流動相A，100%流動相B；流速為0.3 mL/min，柱溫為40 ℃。

質(zhì)譜條件以三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測；離子源為電噴霧（ESI）離子源，正離子掃描模式。監(jiān)測模式為多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。

1.6 測定方法

1）氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。分別精密吸取上述基質(zhì)混合對照溶液和供試品溶液各1 mL，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液0.3 mL，混勻，濾過，取續(xù)濾液。分別精密吸取上述2 種溶液各1 μL，注入氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，按內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算，即得。

2）高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。分別精密吸取上述基質(zhì)混合對照溶液和供試品溶液各1 mL，精密加入水0.3 mL，混勻，濾過，取續(xù)濾液。分別精密吸取上述2 種溶液各1～5 μL，注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，按外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算，即得。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性、范圍及定量限

由表1 可知，在所用濃度范圍內(nèi)，各農(nóng)藥成分均呈良好的線性關(guān)系，定量限均達(dá)到《中國藥典》2020年版的要求。

2.2 準(zhǔn)確度

稱取5.000 g經(jīng)過驗證不含目標(biāo)物的供試品9份，每3 份為1 組作為平行樣，每份分別加入“1.3.1”的中間儲備溶液30、60、90 μL，后續(xù)依照“1.4”的供試品溶液制備，再按照“1.5”的色譜條件進(jìn)行分析。

氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法下加入35 種禁用農(nóng)藥混合對照品溶液后，農(nóng)藥回收率在65.54%～101.03%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在0.38%～11.54%。高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法下加入30 種禁用農(nóng)藥混合對照品溶液后，農(nóng)藥回收率在62.92%～109.96%，RSD在0.04%～3.71%。試驗的回收率均在60.00%～130.00%，表明該方法的準(zhǔn)確度良好，能夠滿足55 種農(nóng)藥殘留的檢測要求。

2.3 穩(wěn)定性試驗

精密稱定1 份樣品，加入“1.3.1”的中間儲備溶液30 μL，按照“1.4”的方法制備供試品溶液，室溫放置，分別在0、5、10、14、18、24 h 測定濃度，再按照“1.5”的色譜條件進(jìn)行分析。

氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法下各時間化合物檢出濃度的RSD均小于15%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.4 樣品測定

采集了20 批來自5 個產(chǎn)地的大棗藥材，并采用本試驗所建立的方法對藥材進(jìn)行了檢測，結(jié)果顯示，這20 批大棗藥材均未檢出33 種禁用農(nóng)藥。

3 結(jié)論

本研究建立了QuEChERS-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和QuEChERS-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，建立基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線和添加內(nèi)標(biāo)來消除基質(zhì)效應(yīng)，避免樣品出現(xiàn)假陽性。結(jié)果進(jìn)行了方法學(xué)確認(rèn)，考察了線性、范圍、定量限、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性。氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法下檢測的35 種禁用農(nóng)藥在其適宜的線性范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)在0.997 2～0.999 9，定量限在0.000 10～0.005 50 mg/kg，回收率在65.54%～101.03%，RSD在0.38%～11.54%。高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法下檢測的30 種禁用農(nóng)藥在其適宜的線性范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)在0.989 6～0.999 7，定量限在0.000 01～0.000 49 mg/kg，回收率在62.92%～109.96%，RSD在0.04%～3.71%。結(jié)果表明，建立的QuEChERS-氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和QuEChERS-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法高效、靈敏、穩(wěn)定、簡單、快速、經(jīng)濟(jì)，適用于大棗基質(zhì)的農(nóng)藥殘留快速檢測。