HLA-B27、ANA 和ANCA 檢測對類風濕性關節炎的診斷價值

曹娜娜，王娜，劉玉珂

（河南省洛陽正骨醫院，河南 洛陽 471000）

類風濕性關節炎(Rheumatoid arthritis, RA)是臨床常見的慢性免疫性疾病， 多發于40~60 歲中老年女性患者[1-3]。 臨床常表現為對稱性、進行性和侵蝕性關節炎， 嚴重者可造成關節畸形和功能喪失[4-6]。 近些年，隨著人們飲食結構和生活方式的變化，RA 的發病率逐年遞增，2020 年我國RA 的發病率在慢性病中占0.28%~0.36%[7-9]。早期RA 缺乏特異性的臨床表現， 常被誤診為系統性紅斑狼瘡（Systemic lupus erythematosus，SLE） 和 骨 關 節 炎（Osteoarthritis，OA），往往延誤最佳的治療時機，且老年患者多伴基礎疾病，若未及時有效治療RA 會使膝關節造成不可逆性損傷， 嚴重影響患者的日常活動和生活質量。 因此，早期診斷對RA 患者的預后有積極的意義。 目前臨床常用X 線、MRI 影像學檢查進行診斷， 但是頻繁使用影像學射線對患者造成極大的傷害[10]。 研究發現，動態監測血清免疫指標對RA 患者的治療和預后有積極的指導意義[11]。 人類白細胞B27 抗原（Human leukocyte B27 antigen,HLA-B27）與關節性疾病有一定的相關性，抗核抗體（Anti-nuclear antibody ,ANA）是臨床篩查自身免疫性疾病的重要指標[12-13]。 抗中性粒細胞胞質抗體(Antineutrophil cytoplasmic antibody,ANCA)以中性粒細胞和單核細胞為靶抗原的抗體，在原發性小血管炎中有較高的表達[14]。本研究旨在探討HLA-B27、ANA 和ANCA 在診斷RA 的臨床價值，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年9 月至2020 年9 月在我院住院的患者，其中RA 組132 例，并隨機選取同期治療的非RA 組患者132 例。 納入標準：滿足RA 的診斷依據[15]；RA 診斷標準：晨僵≥6 周；累及部位3 個及以上；手關節炎；對稱性關節炎；類風濕結節； 血清類風濕因子陽性；X 片提示骨侵蝕或關節局限性脫鈣或明顯脫鈣； 滿足以上≥4 條。排除標準：患惡性腫瘤；肝腎功能不全；臨床資料不全。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 采集患者空腹靜脈血5 mL，靜置30 min 后離心并分離血清（2 000 r,10 min），取上層清液置于-80 ℃冰箱保存，從采集到檢驗≤2 h。

1.2.2 檢測方法 采用酶聯吸附試驗法 （ELISE 檢測）白細胞介素33（Interleukin-33，IL-33）、白細胞介素35（Interleukin-35，IL-35）水平，試劑和試劑盒均采用杭州聯科生物技術股份有限公司。 檢測前質控并矯正儀器，在試驗中設置空白、陽性、陰性和質控孔，選擇自動酶標儀比色分析，在450 nm波長處測定吸光度值（OD 值）并計算樣本含量。 采用化學發光分析儀分析25-（OH）VitD3 水平， 試劑和試劑盒均采用上海鈺博生物科技有限公司。

使用流式細胞術檢測HLA-B27 陽性率，儀器： 美國貝克曼庫爾特公司FC500 流式細胞儀和原裝試劑。記錄淋巴細胞中HLA-B27+/B7-細胞的平均熒光強度和細胞表達率。 判定標準：HLAB27+/B7-占總淋巴細胞比例大于60%且平均熒光強度大于5。

采用間接免疫熒光法檢測ANA 陽性率，儀器選用德國歐蒙公司生產放射免疫計數儀， 試劑選用上海科新生物公司生產試劑。 判定標準：熒光顯示鏡下特異性熒光為陽性。

采用間接免疫熒光法檢測ANCA 陽性率，儀器選用德國歐蒙公司生產放射免疫計數儀， 試劑選用上海江萊生物科技有限公司生產試劑。 判定標準：熒光顯示鏡下特異性熒光為陽性。

1.3 觀察指標

比較兩組一般資料和VitD、IL-33 和IL-35水平。

比較兩組HLA-B27、ANA 和ANCA 陽性率。

相 關 性 分 析IL-33、IL-35 和VitD 水 平 與HLA-B27、ANA 和ANCA 陽 性 率 的 關 系， 判 斷HLA-B27、ANA 和ANCA 診斷RA 的準確性。

1.4 統計學處理 采用SPSS 21.0 統計學軟件對本研究中類風濕性關節炎患者臨床數據進行整理和分析，滿足正態分布且方差齊的計量資料采用（±s）表示，采用兩樣本獨立t檢驗比較組間差異，計數資料用率表示， 采用χ2檢驗，Pearson相關性分析RA 患者IL-33、IL-35 和VitD 水平與HLA-B27、ANA 和ANCA 陽性率，kappa一致性分析HLAB27、ANA、ANCA 與聯合檢測的診斷價值，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 比較兩組一般資料 比較兩組一般資料無顯著差異（P>0.05），見表1。

表1 比例兩組一般資料（±s）［n(%)］

表1 比例兩組一般資料（±s）［n(%)］

類別 RA 組（n=132） 非RA 組（n=132） t/χ2 P性別1.132 0.287年齡（歲）吸煙史飲酒史家族史男女 有無 有無 有無37（28.03）95（71.97）52.36±5.21 49（37.12）83（62.88）43（32.58）89（67.42）73（55.30）59（44.70）45（34.09）87（65.91）52.64±5.34 50（37.88）82（62.12）47（35.61）85（64.39）68（51.52）64（48.48）0.431 0.016 0.271 0.381 0.667 0.899 0.604 0.537文化程度0.138 0.710高中及高中以下高中以上75（56.82）57（43.18）72（54.55）60（45.45）居住環境潮濕0.693 0.405關節活動度（°）是否84（63.64）48（36.36）76.36±5.36 81（61.36）51（38.64）76.69±5.48 0.495 0.621

2.2 比較兩組血清學水平 RA 組患者IL-33 水平高于非RA 組患者（P<0.05），IL-35 和VitD 水平顯著低于非RA 組患者（P<0.05），見表2。

表2 比較兩組患者IL-33、IL-35 和VitD 水平（±s）

表2 比較兩組患者IL-33、IL-35 和VitD 水平（±s）

組別 IL-33（pg/mL）RA 組（n=132）非RA 組（n=132）t P 28.45±2.14 11.36±2.08 65.794<0.001 IL-35（pg/mL）25.37±3.47 54.18±5.63 50.050<0.001 VitD（nmmol/L）32.88±3.51 50.25±5.46 30.746<0.001

2.3 比較RA 組患者HLA-B27、ANA 和ANCA 陽性率 RA 組患者HLA-B27、ANA 和ANCA 陽性率均高于非RA（P<0.05），見表3。

表3 比較RA 患者HLA-B27、ANA 和ANCA 陽性率［n（%）］

2.4 RA 組患者IL-33、IL-35 和VitD 水平與HLAB27、ANA 和ANCA 陽性率的相關性分析 RA 組患者IL-33 水平與HLA-B27（+）、ANA（+）和ANCA（+）呈正相關，IL-35 水平與HLA-B27（+）、ANA（+）和ANCA（+）呈負相關，VitD 水平與HLA-B27（+）、ANA（+）和ANCA（+）呈負相關，見表4。

表4 RA 患者IL-33、IL-35 和VitD 水平與HLA-B27、ANA 和ANCA 陽性率的相關性分析

2.5 比較RA 組患者指標特異性和敏感度 見表5。

表5 比較指標特異性和敏感度

3 討論

RA 是慢性全身炎癥性疾病，目前對發病機制尚無定論，以侵蝕性關節炎為主要特征，常表現為關節滑膜炎癥、 關節軟骨和軟組織受損， 常見于腕、手、足、膝的病變，多以手掌指關節和近節指關節受累[16-17]。 具有極高的致殘率，可發生于任何年齡，女性高于男性。 目前RA 的治療原則是延緩疾病進展、降低風濕活動性，達到控制關節破壞和預防關節功能喪失的目的。 早期發現和早期治療是RA 患者良好預后的關鍵， 由于RA 早期缺乏特異性臨床特征，因此增加了臨床醫師的診斷難度，但是風濕性疾病患者常出現特異性自身抗體可以為臨床醫師提供借鑒和判斷。

本研究發現，RA 組患者IL-33 水平高于非RA 組患者，IL-35 和VitD 水平低于非RA 組患者。IL-33 是當機體受到外在刺激時產生的前炎性因子， 與其受體結合影響細胞因子的分泌， 使Th1/Th2 免疫應答失衡，參與炎癥、免疫學疾病和心血管疾病的反應，在RA 類疾病中有較高的表達。IL-35 是一種抑炎癥因子，通過誘導Tregs和調節性B細胞使T 細胞發生最大抑制效應參與免疫應答，因此在RA 中相對較低。 VitD 不僅可以維持人體鈣環境穩定， 對免疫調節也起重要作用，RA 患者多伴不同程度的骨質疏松，RA 患者體內鈣流失水平高于非RA 患者， 因此VitD 含量相對較少。 因此， 臨床醫師在風濕性疾病的診斷治療中可關注IL-33、IL-35 和VitD 水平輔助判斷RA。

本研究中RA 組患者HLA-B27、ANA 和ANCA 陽性率均明顯高于非RA 組。HLA-B27 是一種顯性遺傳標志抗原，可以調節免疫應答，通過結合自身肽段使T 細胞殺傷靶細胞，損傷組織和器官，在全身性炎癥反應中有特異性的表現。 既往研究發現，HLA-B27 在強直性脊柱炎中有較高的表達[18]，因此HLA-B27 在RA 中特異度高， 但靈敏度相對較低。 ANA 靶抗原是核酸、組蛋白、非組蛋白和各種蛋白酶， 除細胞核外在細胞質和細胞器中也大量存在，是非特異性的自身抗體，在心血管疾病和血栓疾病中均可出現較高的陽性率， 既往研究發現，ANA 在系統性紅斑狼瘡中有較高的表達[19]。 因此ANA 在RA 中特異度高，但靈敏度相對較低，在臨床診斷中應聯合其他指標共同鑒別。ANCA 是第一個被證實參與血管炎發病的相關抗體， 以靶抗原為中性粒細胞胞漿的多種成分， 如絲氨酸蛋白酶3（PR3）、髓過氧化物酶（MPO）、彈性蛋白酶和乳鐵蛋白，當人體受到外在刺激時，中性粒細胞被募集參與抗擊外來感染源同時發生凋亡。且RA 患者IL-33 水平與HLA-B27（+）、ANA（+）和ANCA（+）呈正相關，IL-35 和VitD 水平與HLA-B27 （+）、ANA（+）和ANCA（+）呈負相關。臨床醫師可通過檢測IL-33、IL-35 和VitD 水平輔助判斷RA 患者疾病的嚴重程度，以期指導臨床。

因此，臨床難以依據單一指標診斷RA，應結合HLA-B27、ANA 和ANCA 聯合評估和判斷，避免誤診和漏診，HLA-B27、ANA 和ANCA 聯合檢測可以提高RA 診斷的準確度。