臨沂地區健康成人小而密低密度脂蛋白膽固醇參考區間的建立

李公奇，姜艷，張曉卉

（1.臨沂市中醫醫院醫學檢驗科，山東 臨沂 276003；2. 臨沂市中醫醫院肛腸科，山東 臨沂 276003）

低密度脂蛋白膽固醇（Low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）由一系列密度、體積、理化特征不同的顆粒組成，存在明顯的異質性。 小而密低密度脂蛋白膽固醇（Small and low density lipoprotein cholesterol，sdLDL-C）為LDL 亞組分之一，是心腦血管疾病的獨立危險因素[1]。 目前臨沂地區的sdLDL-C 基線水平不明， 實驗室大多直接引用試劑生產廠家提供的生物參考區間，但因地域、種族等原因， 引用的參考區間與本地區居民的實際參考區間之間可能會存在一定差異[2]；另外，不同的檢測系統得到的檢測結果也存在一定差異。 試劑說明書中明確指出，實驗室應該根據實際情況，建立適合本地區人群的參考區間[3]。 因此，不同地區、不同性別、 不同年齡段建立相應的正常參考區間是很有必要的[4]。 本研究旨在初步建立臨沂地區健康成人sdLDL-C 的參考區間， 為臨沂市的醫學實驗室提供參考。

1 材料與方法

1.1 標本來源 依據WS/T 402-2012 《臨床實驗室檢驗項目參考區間的制定》[5]中對參考個體的篩選標準， 選取2020 年3 月至12 月在我院正常體檢成人3 791 名，其中男性1 651 名，年齡18～93 歲，女性2 140 名，年齡18～92 歲。 所有入選者經詢問病史、血清學檢查、心電圖、超聲波檢查等排除心腦血管疾病、惡性腫瘤、糖尿病、高血壓、高脂蛋白血癥、肝臟腎臟疾病，且半年內均未服用降血脂藥物。

1.2 儀器與試劑 采用Beckman AU5821 全自動生化分析儀，試劑、校準液、質控品均由浙江東甌診斷產品有限公司生產，檢測系統精密度、正確度均已通過驗證。

1.3 方法

1.3.1 樣本采集及處理 所有樣本均在空腹狀態下采集靜脈血5 mL，3 000 r/min 離心10 min，2 h 內完成血清sdLDL-C 的檢測， 嚴格按照標準操作程序操作，準確記錄數據。

1.3.2 樣本分組 依據世界衛生組織對年齡段劃分標準將男、 女各分為3 組：18～44 歲為青年組，45～59 歲為中年組，≥60 歲為老年組。 樣本共分6 組，每組樣本數n≥120 例。

1.3.3 剔除離群值 參考CLSI EP28-A3c 文件[6]，采用Dixon法剔除離群值，離群值判斷標準為疑似離群值與相鄰值之差（D）與數據全距（R）比值D/R≥1/3，若有離群值應剔除并補充上其他數據。

1.4 統計學處理 采用SPSS 22.0 軟件進行統計學分析。 以Kolmogorov-Smirnov法進行正態性檢驗，樣本sdLDL-C 在各組中的分布均為非正態分布，在統計學描述時采用中位數（四分位數）M（P25~P75）表示，兩組間比較采用非參數Mann-Whitney U檢驗， 多組間比較采用非參數Kruskal-Wallis H檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。采用Spearman秩相關進行sdLDL-C 水平與年齡的相關性分析；采用百分位數法建立sdLDL-C 的參考區間。

1.5 參考區間的驗證 每組隨機選取20 份健康人群血清樣本（男女各半），按照sdLDL-C 的標準操作程序進行檢測，根據WS/T402-2012《臨床實驗室檢驗項目參考區間的制定》[5]的要求，檢測結果應有90%落在區間內， 即不超過2 個超出參考區間時驗證通過。

2 結果

2.1 與試劑盒提供的參考區間比對 本研究3 791例樣本呈非正態分布， 采用百分位數法建立P2.5～P97.5的參考區間，與試劑盒提供的參考區間比較有差異，見表1。

表1 臨沂地區健康成人與試劑盒sdLDL-C 參考區間的比對（P2.5～P97.5，mmol/L）

2.2 不同性別、不同年齡組sdLDL-C 分布情況 將3 791 例樣本按性別、 年齡劃分為6 組進行比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。 男性中年組（45～59歲）sdLDL-C 水平明顯高于青年組（18～44 歲）和老年組（≥60 歲），差異有統計學意義（P＜0.05）。 女性中年組（45～59 歲）和老年組（≥60 歲）sdLDL-C 水平明顯高于青年組（18～44 歲），差異有統計學意義（P＜0.05）。 青年組（18～44 歲）sdLDL-C 水平男性高于女性，差異有統計學意義（P＜0.05）。 中年組（45～59 歲）、老年組（≥60 歲）sdLDL-C 水平男、女差異無統計學意義（P=0.158，P=0.114），見表2。

表2 不同性別、不同年齡組sdLDL-C 分布[M（P25～P75），mmol/L]

2.3 不同性別sdLDL-C 分布與年齡相關性分析男、 女兩組樣本與年齡均為非正態分布， 采用Spearman秩相關進行分析， 男性sdLDL-C 水平與年齡無相關性（P＞0.05，r=0.016），女性sdLDL-C 水平與年齡呈顯著性正相關(P<0.05，r=0.254)，見表3。

表3 不同性別sdLDL-C 分布與年齡相關性分析

2.4 各組人群sdLDL-C 參考區間的建立， 男性各組間sdLDL-C 水平差異有統計學意義， 需分組建立參考區間；女性中年組（45～59 歲）與老年組（≥60 歲）sdLDL-C 水平差異無統計學意義，合并為一組，女性青年組（18～44 歲）單獨一組，見表4。

表4 各組人群sdLDL-C 參考區間（P2.5～P97.5，mmol/L）

2.5 參考區間的驗證 以上三組每組各選取20 例健康體檢個體， 測定結果均在建立的參考區間范圍內，符合參考區間驗證的要求，說明本研究建立的參考區間可以用于臨床。

3 討論

小而密低密度脂蛋白膽固醇（sdLDL-C）被美國膽固醇教育計劃委員會列入新發現的成人心血管疾病的重要危險因素之一[7-8]。 sdLDL-C 可自由穿過血管壁，極易氧化，并能募集巨噬細胞吞噬被氧化的LDL，形成泡沫細胞，聚集到動脈壁[9]，不易通過受體介導的途徑被清除， 導致其蓄積于血管壁，對血管壁造成持續損傷[10-11]，加重心肌梗死病情。 近年來，sdLDL-C 水平的檢測在國內外受到普遍的重視， 國內許多醫學實驗室已逐步實現對sdLDL-C 的檢測。 但是，由于地域、種族等差異，sdLDL-C 在人群中的分布很難進行統一[12]，本實驗室使用的廠家提供的參考區間源于浙江、 北京和山東地區的360 例健康人群， 其sdLDL-C 分布水平與本地區人群的分布水平差異較大。 因此，非常有必要根據臨沂地區人群的sdLDL-C 分布情況來建立相應的參考區間， 為臨沂市的醫學實驗室提供參考。

本研究發現， 臨沂地區sdLDL-C 水平在人群中的分布存在性別、年齡的差異，不能直接引用試劑廠家提供的單一參考區間。 男性各年齡段sdLDL-C 水 平 有 顯 著 性 差 異，45 ～59 歲 男 性sdLDL-C 水平明顯高于其他年齡段， 其sdLDL-C分布與年齡無相關性；45 歲以上女性sdLDL-C 水平明顯高于18～44 歲女性， 其sdLDL-C 分布與年齡呈顯著性正相關，表明女性隨著年齡的增長，其體內sdLDL-C 水平逐漸增高， 這可能和雌性激素的相關保護機制有關， 絕經前女性的保護性脂蛋白水平較高[13]，這就是年齡較大的婦女患心血管疾病的風險明顯增加的原因， 與LDL-C 各組分的不同分布密切相關[14]；18～44 歲男性sdLDL-C 水平明顯高于同年齡段女性，這與吳燕等[15]的研究結果一致。本研究認為，男性各年齡組間sdLDL-C 水平有顯著性差異，需分組建立參考區間；女性中年組、老年組間sdLDL-C 水平無顯著性差異， 可合并為一組，女性青年組需單獨建立參考區間。 建立本地區sdLDL-C 的生物水平參考區間對個體化醫療發展有重大意義。

本研究中因受青少年（18 歲以下）人群樣本采集所限， 未將18 歲以下健康人群列入調查之列，只初步建立了健康成人的sdLDL-C 參考區間，且納入的3 791 名健康成人在需要根據性別、年齡分組的情況下樣本量還不夠， 研究存在一定的局限性。 在下一步的研究中，將聯合多家地市醫院采集樣本進行統計分析，并將18 歲以下健康人群納入研究中，建立大區域性人群的sdLDL-C 參考區間，這樣會更具實際應用價值。