血清LncRNA-MALAT1 水平與心肌梗死患者疾病嚴(yán)重程度和預(yù)后的關(guān)系

邵燦，周文，陳芙蓉

心肌梗死是老年人群中心血管疾病的好發(fā)類型，發(fā)病率、死亡率較高，部分嚴(yán)重者可能導(dǎo)致胸痛、休克。急性心肌梗死（AMI）的發(fā)病機(jī)制相對(duì)復(fù)雜，認(rèn)為與心肌損傷、炎癥進(jìn)展和血流改變有關(guān)[1-2]，手術(shù)治療的效果良好，可有效降低患者病死率和致殘率，但依然有部分患者因各種原因出現(xiàn)近期心血管不良事件（MACE）。既往臨床多將肌鈣蛋白作為AMI 臨床診斷和預(yù)后評(píng)價(jià)的監(jiān)測指標(biāo)[3]，但其在早期心肌損傷時(shí)敏感性較差。近年來隨醫(yī)學(xué)進(jìn)步和分子生物學(xué)發(fā)展，越來越多的研究者發(fā)現(xiàn)，AMI患者的發(fā)病與進(jìn)展可能與基因表達(dá)和調(diào)控有關(guān)[4]。長鏈非編碼RNA（lncRNA）是分子生物學(xué)中一種非編碼轉(zhuǎn)錄RNA，參與諸多心血管疾病的發(fā)病進(jìn)展。肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1（MALAT1）是lncRNA中的家族成員，權(quán)瑜等[5]發(fā)現(xiàn)，LncRNA-MALAT1可以調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能，抑制其表達(dá)可以抑制心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷狀態(tài)，發(fā)揮一定的心臟保護(hù)效果。鑒于此，本研究探討LncRNA-MALAT1 與AMI 患者病情進(jìn)展及預(yù)后的關(guān)系，旨在為臨床治療AMI，改善預(yù)后挖掘潛在治療靶點(diǎn)，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性選取2019 年3 月至2020 年8 月在溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院接受治療的120 例AMI 患者為觀察對(duì)象。其中男71 例，女49 例；年齡40 ～75 歲，平均（55.9±5.1）歲；基礎(chǔ)疾病：高血壓42例，糖尿病49 例，高血脂29 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合AMI診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，經(jīng)心電圖、冠脈造影檢查確診；年齡＞18歲；急性胸痛發(fā)作至就診時(shí)間＜8 h；接受經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入（PCI）術(shù)治療；臨床資料無缺失，可完成研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往或現(xiàn)在明確存在腫瘤疾病者；合并心絞痛、肥厚型心肌病、糖尿病視網(wǎng)膜病變、嚴(yán)重血管病變、嚴(yán)重感染和肺部疾病；妊娠期、哺乳期女性；合并免疫系統(tǒng)障礙者；既往存在心臟手術(shù)史者。本研究過程符合《赫爾辛基宣言》相關(guān)倫理要求，經(jīng)溫州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)[倫研批第（2023-L040）號(hào)]，且已豁免患者及家屬知情同意。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集 通過電子病歷系統(tǒng)收集研究對(duì)象的臨床資料，包括患者性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、吸煙史、血脂情況[總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白]、收縮壓、舒張壓、血清心肌肌鈣蛋白I（cTnⅠ）、超敏C 反應(yīng)蛋白（hs-CRP）及肌酸激酶（CK-MB）等水平。

1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法測定血清LncRNAMALAT1 水平 采集研究患者外周靜脈血5 ml，離心分離取上清液，利用密度梯度離心法分離PBMC。用Trizol 法（上海雙達(dá)生物技術(shù)有限公司）提取PBMC 細(xì)胞的總RNA，并使用紫外分光光度計(jì)（賽默飛，型號(hào)：Multiskan SkyHigh）檢測RNA 的濃度。先采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，將產(chǎn)物置于4 ℃條件下保存，再以獲得的cDNA 為模板進(jìn)行熒光定量PCR 擴(kuò)增，在RT-PCR 儀上設(shè)置反應(yīng)條件：95℃5min 預(yù)變性；隨后經(jīng)95℃變性10s，60℃退火35 s，65 ℃延伸30 s，擴(kuò)增35 個(gè)循環(huán)。引物序列如下：LncRNA-MALAT1 上游引物：5’-AGGCGTTGTG-CGTAGAGGA-3’，下游引物：5’-GGATTTTTACCAA-CCACTCGC-3’；內(nèi)參GAPDH上游引物：5’-AGACAGCCGCATCTTCTTGT-3’，下游引物：5’-CTTGCCGTGGGTAGAGTCAT-3’。引物由上海生工生物工程有限公司合成。LncRNAMALAT1 表達(dá)量=，其中CT=CT（target）-C（tcalibrator），CT=CTlnRNA-CT18S。

1.2.3 Gensini 評(píng)分 對(duì)研究對(duì)象行冠狀動(dòng)脈造影檢查，并以Gensini評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[7]評(píng)價(jià)冠脈狹窄程度，分為Gensini 評(píng)分≥60 分組（n=52）和Gensini 評(píng)分＜60 分組（n=68）。

1.2.4 MACE 評(píng)估 研究對(duì)象均在本院接受手術(shù)，且電話或門診隨訪6 個(gè)月。記錄隨訪期間再發(fā)心肌梗死、血管重建、惡性心律失常、慢性心力衰竭、心源性休克等MACE 發(fā)生情況。

1.3 觀察指標(biāo)（1）比較Gensini 評(píng)分≥60 分組和Gensini 評(píng)分＜60 分組患者的臨床資料。（2）比較非MACE 組和MACE 組患者血清高密度脂蛋白和LncRNA-MALAT1 水平。（3）分析血清高密度脂蛋白、LncRNA-MALAT1 預(yù)測AMI 患者近期發(fā)生MACE 的價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 使用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用[例（%）]表示，比較采用檢驗(yàn)。預(yù)測價(jià)值分析采用受試者工作特征（ROC）曲線，計(jì)算曲線下面積（AUC）。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Gensini 評(píng)分≥60 分組和Gensini 評(píng)分＜60 分組患者臨床資料比較 Gensini 評(píng)分≥60 分組和Gensini評(píng)分＜60 分組患者在性別、年齡、BMI、吸煙史、收縮壓、舒張壓、低密度脂蛋、總膽固醇、三酰甘油等差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P ＞0.05），兩組高密度脂蛋白、cTnⅠ、hs-CRP、CK-MB、LncRNA-MALAT1 等差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。

表1 Gensini 評(píng)分≥60 分組和Gensini 評(píng)分＜60 分組AMI 患者臨床資料比較

2.2 非MACE 組和MACE 組患者血清高密度脂蛋白和LncRNA-MALAT1 水平比較 120 例AMI 患者經(jīng)6 個(gè)月隨訪后有36 例患者出現(xiàn)MACE，將其納為MACE 組，其余納為非MACE 組。MACE 組患者血清高密度脂蛋白和LncRNA-MALAT1 水平高于非MACE 組（均P ＜0.05），見表2。

表2 非MACE 組和MACE 組AMI 患者血清高密度脂蛋白和LncRNA-MALAT1 水平比較

2.3 血清高密度脂蛋白、LncRNA-MALAT1 預(yù)測AMI 患者近期發(fā)生MACE 價(jià)值 血清高密度脂蛋白、LncRNA-MALAT1 水平均具有預(yù)測AMI 患者M(jìn)ACE 價(jià)值，AUC 分別為0.641，0.692。以高密度脂蛋白、LncRNA-MALAT1水平截?cái)嘀禐榕R界點(diǎn)，采用并聯(lián)的方式進(jìn)行聯(lián)合檢測預(yù)測AMI 患者預(yù)后價(jià)值，其AUC 為0.726，敏感度為83.33%，特異度為61.90%，聯(lián)合檢測AUC及敏感度均高于各指標(biāo)單獨(dú)檢測，見表3。

表3 血清高密度脂蛋白、LncRNA-MALAT1 水平預(yù)測AMI 患者近期發(fā)生MACE 價(jià)值

3 討論

AMI 指的是由于冠狀動(dòng)脈內(nèi)突然的血栓形成，導(dǎo)致了血液不能夠通過冠狀動(dòng)脈給心肌細(xì)胞供血和供氧，此時(shí)心肌就會(huì)出現(xiàn)壞死，是一種可能危及生命的急性冠脈綜合征，具有發(fā)病突然、死亡風(fēng)險(xiǎn)較高等特點(diǎn)，臨床主要采用PCI 術(shù)治療。但PCI 術(shù)后仍存在急性心力衰竭、嚴(yán)重心律失常等MACE 事件發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，嚴(yán)重威脅患者生存[8]。因此，早期有效診治對(duì)控制AMI 疾病發(fā)展以及降低死亡率具有不可忽視的意義。

Gensini 評(píng)分是冠脈狹窄程度的常見評(píng)分，可有效反映冠狀動(dòng)脈病變的發(fā)生及嚴(yán)重程度[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，Gensini評(píng)分≥60 分組和Gensini評(píng)分＜60 分組患者在高密度脂蛋白、cTnⅠ、hs-CRP、CK-MB、LncRNA-MALAT1 方面差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。LncRNAs是一類長度超過200 nt的RNA，可以以RNA 的形式調(diào)控下游多種基因表達(dá)，參與癌癥、神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等多種疾病的發(fā)生和進(jìn)展[10-11]。lncRNAs 廣泛參與心臟發(fā)育、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌梗死、心臟衰竭、高血壓和動(dòng)脈瘤等發(fā)病過程中[12-13]。既往有研究顯示，血清LncRNA-MALAT1在AMI 患者中呈高表達(dá)，可作為AMI 患者M(jìn)ACE風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的重要生物標(biāo)志物[14]。本研究結(jié)果表明，血清高密度脂蛋白、cTnⅠ、hs-CRP、CK-MB、LncRNA-MALAT1 水平與AMI疾病嚴(yán)重程度有關(guān)。

本研究120 例AMI 患者經(jīng)6 個(gè)月隨訪后有36例患者出現(xiàn)MACE，MACE 組患者血清高密度脂蛋白和LncRNA-MALAT1 水平高于非MACE 組。這提示AMI 患者預(yù)后可能與血清高密度脂蛋白和LncRNA-MALAT1 水平高低存在一定關(guān)聯(lián)。LncRNA-MALAT1 在心血管疾病中發(fā)揮重要作用。有研究顯示，血清LncRNA-MALAT1 水平可用于預(yù)測AMI患者心室重構(gòu)情況，推測血清LncRNA-MALAT1 水平可用于評(píng)估AMI 患者預(yù)后情況[15]。本研究結(jié)果顯示，血清高密度脂蛋白和LncRNA-MALAT1 水平均具有預(yù)測AMI 預(yù)后價(jià)值，AUC 分別為0.641，0.692，聯(lián)合檢測AUC及敏感度均高于各項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測，這提示血清高密度脂蛋白和LncRNAMALAT1 水平能較好預(yù)測AMI患者預(yù)后，聯(lián)合檢測可提高AMI 敏感性。

綜上所述，血清高密度脂蛋白和LncRNA-MALAT1 水平可影響AMI 患者疾病嚴(yán)重程度，兩個(gè)指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用可有效預(yù)測患者短期預(yù)后情況，臨床可通過檢測血清高密度脂蛋白和LncRNA-MALAT1水平變化，評(píng)估患者預(yù)后，并及時(shí)采取對(duì)應(yīng)預(yù)防干預(yù)措施減少患者病死風(fēng)險(xiǎn)。盡管本研究可為臨床改善AMI患者提供科學(xué)依據(jù)，但仍存在一定的不足之處。本研究納入樣本量偏小，且患者均來自同一家醫(yī)院，可能造成數(shù)據(jù)存在偏倚；且隨訪時(shí)間較短，對(duì)于上述指標(biāo)能否預(yù)測AMI 患者治療后遠(yuǎn)期預(yù)后需要擴(kuò)大樣本量延長隨訪時(shí)間行進(jìn)一步分析研究。

利益沖突 所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明 邵燦：研究命題的提出、設(shè)計(jì)，撰寫論文；周文：采集及清洗數(shù)據(jù)、篩選病例；陳芙蓉：實(shí)施研究、論文審定、實(shí)施研究